农杆菌介导的日本落叶松胚性细胞遗传转化研究

基于体细胞胚胎发生技术平台,利用携带pSuper1300+质粒,以潮霉素为筛选标记基因的农杆菌GV3101介导日本落叶松遗传转化,对植物受体材料生理状态、农杆菌浓度和浸染时间以及共培养时间等影响因素进行了研究、分析和讨论.结果表明:综合优化各影响因素,生长旺盛的日本落叶松胚性细胞,经浓度为0.4(OD600)的农杆菌浸染10min,共培养2d,再用含400mg/L的头孢霉素的液体培养基清洗脱菌,然后在含400mg/L的头孢霉素固体培养基上恢复培养,并置于含5mg/L潮霉素的固体培养基上多次筛选,最终共获得54个抗性细胞系,转化率平均为0.94个/g.PCR检测鉴定,所有抗性细胞系均为阳性转化体,并排除了农杆菌污染导致的假阳性.研究建立并优化了农杆菌介导的日本落叶松遗传转化技术,为进行遗传改良和基因功能鉴定提供有利平台.     

植物抗旱相关基因研究进展

遭遇极端温度、干旱、高盐等胁迫时,植物需要调控多种基因,通过多种途径来抵御非生物胁迫的伤害。综述了植物在干旱胁迫发生时,信号传导和转录因子相关调控基因以及在水分运输、抗脱水、渗透调节以调节气孔开关等功能相关基因克隆的研究进展,并提出了今后开展植物抗逆研究的建议。     

人工含油废水对秋茄幼苗生长的影响

在玻璃网室中建立秋茄模拟湿地,分别用不同浓度的人工含油废水进行为期一年的每周两次定期排放,对照组(ＣＬ)用盐度１５‰的人工海水。人工含油废水对秋茄幼苗生长的影响如下:２００ｍｇ·Ｌ－１、４００ｍｇ·Ｌ－１和８００ｍｇ·Ｌ－１组的部分植株出现叶尖卷曲、叶缘有褐色斑点、叶片失绿等受害症状,８００ｍｇ·Ｌ－１组植株的受害症状出现的时间最早而且个体数最多;较高浓度的含油废水导致秋茄幼苗个体死亡,２００ｍｇ·Ｌ－１、４００ｍｇ·Ｌ－１和８００ｍｇ·Ｌ－１组的存活率依次为９５．９%、８５．２%和５９．２%。５０ｍｇ·Ｌ－１含油废水对秋茄幼苗的生长有促进作用,表现为生物量、茎高和茎径的年增长量极显著高于对照组;１００ｍｇ·Ｌ－１和２００ｍｇ·Ｌ－１含油废水对秋茄幼苗的生长无明显不良影响,表现为２００ｍｇ·Ｌ－１组生物量、茎高和茎径的年增长量与对照组比无显著差异,１００ｍｇ·Ｌ－１组植株仅茎高年增长量显著高于对照组;较高浓度的含油废水则使秋茄幼苗生长受到显著抑制,表现为４００ｍｇ·Ｌ－１组生物量和茎高的年增长量显著或极显著低于对照组,８００ｍｇ·Ｌ－１组生物量、茎高和茎径的年增长量显著或极显著低于对照组。表明秋茄幼苗对低浓度含油废水有一定的     

小叶杨△1-吡咯琳-5-羧酸合成酶(P5CS)基因克隆及在杂种落叶松中的转化

以小叶杨为材料构建了干旱胁迫和正常生长条件下的cDNA文库,以特异性引物从中扩增出一条1850bp大小的DNA片段。经序列分析证实该片段编码△^1-吡咯琳-5-羧酸合成酶（P5CS）。将该片段构建入植物表达载体pB1121中,在落叶松杂交育种中利用花粉管通道法将带有该P5CS基因的植物表达质粒转化入杂种落叶松,收获球果取出种子,提取转化种子发芽长出幼芽的DNA,特异性PCR扩增和Southern,Western Blotting检测证实落叶松中已导入P5CS基因。     

小叶杨Δ~1-吡咯琳-5-羧酸合成酶(P5CS)基因克隆及在杂种落叶松中的转化

以小叶杨为材料构建了干旱胁迫和正常生长条件下的cDNA文库,以特异性引物从中扩增出一条1 850bp大小的DNA片段,经序列分析证实该片段编码Δ1-吡咯琳-5-羧酸合成酶(P5CS)。将该片段构建入植物表达载体pBI121中,在落叶松杂交育种中利用花粉管通道法将带有该P5CS基因的植物表达质粒转化入杂种落叶松,收获球果取出种子,提取转化种子发芽长出幼芽的DNA,特异性PCR扩增和Southern,Western Blotting检测证实落叶松中已导入P5CS基因。