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朱松明张捷丁新德陈治泉高敏 《现代生物医学进展》2011,11(2):259-261
目的:构建大鼠过氧化物酶体增生因子激活受体γ(peroxisomeproliferator-activatedreceptorgamma)基因慢病毒表达载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究该基因在肝星状细胞活化(Hepaticstellatecells,HSC)及肝纤维化中的作用机制提供物质基础。方法:大鼠PPAR-γ基因序列进行PCR扩增,与经AgeI酶切后的pGC-FU-3FLAG载体连接产生慢病毒载体表达质粒pGC-fu-3flag-PPARG,转化DH5α,PCR筛选阳性克隆,测序并转入293T细胞Western blot鉴定,而后将pGC-fu-3flag-PPARG,pHelper 1.0,pHelper 2.0三质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒,收集上清浓缩病毒测定病毒滴度。结果:DNA测序及Westernblot鉴定证实构建的大鼠PPAR-γ基因慢病毒表达载体pGC-fu-3flag-PPARG正确,浓缩慢病毒悬液的滴度为2×108TU/ml。结论:成功构建携带大鼠PPAR-γ基因的重组慢病毒表达载体。 相似文献
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目的:构建大鼠过氧化物酶体增生因子激活受体γ(peroxisomeproliferator-activatedreceptorgamma)基因慢病毒表达载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究该基因在肝星状细胞活化(Hepaticstellatecells,HSC)及肝纤维化中的作用机制提供物质基础。方法:大鼠PPAR-γ基因序列进行PCR扩增,与经AgeI酶切后的pGC-FU-3FLAG载体连接产生慢病毒载体表达质粒pGC-fu-3flag-PPARG,转化DH5α,PCR筛选阳性克隆,测序并转入293T细胞Western blot鉴定,而后将pGC-fu-3flag-PPARG,pHelper 1.0,pHelper 2.0三质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒,收集上清浓缩病毒测定病毒滴度。结果:DNA测序及Westernblot鉴定证实构建的大鼠PPAR-γ基因慢病毒表达载体pGC-fu-3flag-PPARG正确,浓缩慢病毒悬液的滴度为2×108TU/ml。结论:成功构建携带大鼠PPAR-γ基因的重组慢病毒表达载体。 相似文献
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