小鼠肝炎病毒N基因的原核表达和免疫活性初步分析

目的对小鼠肝炎病毒（mouse hapetitis virus）A59毒株核蛋白（N）基因进行了克隆、表达和重组蛋白的免疫活性分析。方法根据GenBank公布的MHV-A59 N基因序列（AY700211）,设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出N基因的主要抗原片段NS,将目的片段纯化后与pGEM-T-easy载体连接得到重组质粒pTN,双酶切回收目的基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组质粒pGEX-NS,转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行了诱导表达。对表达裂解物进行SDS-PAGE和Western-blotting验证。结果表达产物相对分子质量约56×103与预期相符;能与MHV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的NP（S）蛋白有良好的抗原性,为检测小鼠肝炎病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。  

东方田鼠四个种群线粒体D-loop区遗传多态性分析

东方田鼠(Microtus fortis)主要分布在我国和俄罗斯、朝鲜、蒙古等地,我国是东方田鼠主要分布区,在东北、西北、黄河流域、长江流域和浙江、福建等省都有分布.  

东方田鼠非酒精性脂肪肝模型的建立

目的建立东方田鼠非酒精性脂肪肝模型,并观察测定其肝指数、病理、血清生化指标的动态变化。方法选取6周龄湖南洞庭湖种群雄性东方田鼠70只,随机分为2组,模型组饲喂高脂肪料,对照组饲喂高纤维料,分别于第2、4、6、8、12周处死,称量体重及肝重,计算肝指数,采血检测东方田鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、r-谷氨酰转移酶(r-GT)、胆碱酯酶(CHE)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、葡萄糖(GLU)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL),并取肝脏HE染色后做病理学观察。结果与对照组相比,模型组6周时肝脏出现了典型的脂肪肝特征,肝重和肝指数都明显升高(P<0.05),血清ALT、AST、r-GT、CHE、TC、FFA、GLU和LDL都明显升高(P<0.05),HDL和TG均明显降低(P<0.05)。镜检观察到模型组田鼠肝细胞逐渐呈现弥漫性脂肪变性,6周时大范围出现脂滴,8周时肝内出现弥漫性大脂肪滴,12周后出现炎细胞的浸润。结论采用高脂饲料成功诱发东方田鼠非酒精性脂肪肝,可为研究非酒精性脂肪肝的发病机制和药物干预提供新的模型。  

蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带田鼠卵子的抑制作用

本文研究了慈姑和天花粉两种天然的蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带田鼠卵子的影响。结果显示:(1)在人精子获能期1.0×10~(-3)mol/L天花粉抑制剂可使人精子的穿卵率明显下降(P<0.01),而同样浓度的慈姑抑制剂,作用不明显。(2)去透明带田鼠卵子预先用抑制剂处理0.5h,被获能精子的穿卵率和未用抑制剂处理的卵子相似。(3)在获能后的人精子和去透明带田鼠卵子孵育期,两种抑制剂的浓度为0.5或1.0×10~(-3)mol/L时,精子的穿卵率明显下降。(4)在人精子获能期及人精子/去透明带田鼠卵子孵育期,两种抑制剂的浓度为1.0×10~(-3)mol/L时,均使精子的穿卵率下降(P<0.01),而抑制剂的浓度为1.0×10~(-4)mol/L时,作用不明显。(5)抑制剂不影响人精子的活动能力。这样看来,涉及精子穿透卵子的酶体系受到了蛋白酶抑制剂的影响。  

一种观察小鼠活体精原细胞SCE的简便方法

本方法参照 Kanda 等人方法作了以下改进:用市售针剂型活性炭作为 BrdU 的载体,省去了繁杂的制备过程,节省了人力和物力;用 Adler 方法制备精原细胞染色体标本,可获得较多的中期分裂相,便于观察分析,以 UPO技术代替 FPG 技术处理玻片,使标本不易褪色,便于保存且节省了昂贵的荧光试剂。实验结果表明:改进后的小鼠体内 SCE 方法经济、简便,易操作,效果良好。  

分泌性蛋白质合成的特殊机制

在高等动物中,许多多肽和蛋白质并不为细胞本身所需,而是参与整个机体的各种活动和调节,如多肽类激素、各种酶和某些结构蛋白等。这些由细胞产生却不为细胞本身所需的多肽和蛋白质统称为分泌性蛋白质。由于漫长的自然选择的作用,细胞内分泌性蛋白质的合成受到严格的调控,有着特殊的机制(见图A)。转译分泌性蛋白质时,核糖  

植物中的“果蝇”——拟南芥

虽然孟德尔以豌豆为实验材料开创了现代遗传学,后来麦克林托克又研究了玉米,发现了惊人的“跳跃基因”,但总的来说,这些植物都不是研究分子遗传学的良好材料。高等植物通常需要较大的种植面积,特殊的条件,而且繁殖周期长。更糟的是,植物的基因组通常都很大(例如,玉米的基因组比果蝇的大两个数量级),使人们难以分离到特定的基因。因此,虽然K~*Roberts早就认为植物是研究发育的良好系统,  

寻找尚未发现的物种

在十九世纪,地球上的大部分生物都还未被人类所了解,因此在那时,发现新的物种是整个生物科学中最令人兴奋、最多产的领域。但今天,生物学已发展到了分子水平,寻找新物种的工作似乎已经过时了。只有隐生动物学家们  

RNA也是生物催化剂

长期以来,人们一直认为所有的生物催化剂都是蛋白质(也就是酶).然而,分子生物学的新发展已经推翻了这一经典的观念. 一九八二年,美国科罗拉多州波尔多大学的Thomas Cech及其同事在研究原生生物四膜虫(Tetrahymena thermophila)的rRNA转录后加工问题时发现,四膜虫前体rRNA能够自己催化自己的剪接反应.该反应不需酶的催化,也不需要ATP,而只需NH_4~+、Mg~(2+)和鸟苷.Cech把这种能够催化自身剪接反应的核酸叫做“酶性核酸”(ribozyme)。Cech的这一发现被誉为近十年来分子生物学的最令人兴奋的发现之一.  

重组RNA技术的诞生

重组RNA技术,是美国哥伦比亚大学癌症研究所Kramer、Mills和Mide三人合作发明的。1984年初,哥伦比亚大学科技发展办公室已为该项技术申请专利。重组RNA技术的诞生意味着分子生物学在继重组DNA技术之后,又进入一个新的发展阶段。过去,人们只能在试管中利用DNA模板,RNA多聚酶及其辅因子很困难地转录出少量RNA,应用重组RNA技术,用100毫微克的RNA模板在一小时内就能复制出一毫克的RNA。重组RNA技术的关键所在是Qβ复制酶,它是1965年从被Qβ细菌病毒感染的寄主细胞中发现的一种RNA复制酶。当QβRNA侵入寄主细胞,能编码三种蛋白质:外壳蛋白、