基质金属蛋白酶-2/9敏感型可跨膜融合抗氧化酶的表达、纯化和表征北大核心CSCD

融合了跨膜肽的抗氧化酶可进入细胞,保护细胞免受放射损伤。然而跨膜肽的跨膜能力没有靶向性,其也可把抗氧化酶带入肿瘤细胞进而保护肿瘤细胞,降低放疗的效果。为此,根据多数肿瘤细胞微环境中存在活性基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2或MMP-9的特点,在细胞跨膜肽R9与人铜、锌超氧化物歧化酶(superoxide dismutase 1,SOD1)和谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)之间融合MMP-2/9的底物肽X,设计了融合蛋白GST-SOD1-X-R9。该蛋白在肿瘤微环境中可因MMP-2/9酶切底物肽X而失去跨膜肽,从而无法进入肿瘤细胞,进而只能进入正常细胞。全基因合成SOD1-X-R9序列,并将其插入原核表达载体pGEX-4T-1中,得到表达质粒,并实现了GST-SOD1-X-R9融合蛋白的可溶表达。GST-SOD1-X-R9经硫酸铵沉淀和GST亲和层析纯化,分子量约为47 kDa,与理论值一致。纯化的融合蛋白的SOD活性和GST活性分别为2954 U/mg和328 U/mg。GST-SOD1-X-R9的SOD活性或GST活性在生理条件下几乎没有变化。该融合蛋白在溶液中可被胶原酶Ⅳ部分水解。分别建立了2D和3D培养的HepG2细胞模型来检验肿瘤微环境中的MMP-2活力对该蛋白跨膜能力的影响。在2D培养模型中,HepG2的MMP-2活力极低,但在3D培养模型中,随着培养时间的增加,HepG2肿瘤球的体积变大,其胞外MMP-2活力也随之增强。GST-SOD1-X-R9在2D培养的HepG2细胞中具有和GST-SOD1-R9蛋白一样的跨膜效率,但在3D培养的HepG2细胞球中的跨膜能力大大降低。本研究为后续深入研究GST-SOD1-X-R9靶向防护正常细胞的氧化损伤效应奠定了基础。     

老龄小鼠术后认知功能障碍和肠道菌群失调的关系

摘要 目的：评价肠道菌群失调和老龄小鼠术后认知功能障碍的潜在作用机制和关系。方法：清洁级健康雄性老龄小鼠 C57BL/6J 20只,16-17月龄,体重28-35ｇ,采用随机数字表法分为两组：对照组（A=10只）和手术组（AS=10只）。AS组小鼠行剖腹探查术。术后48小时采集小鼠粪便和血清标本,16S rDNA测序检测粪便肠道细菌丰度变化,Elisa法检测血清的IL-1β、IL-6和TNF-α含量。术后3天行Morris水迷宫实验。结果：与A组比较,AS组小鼠术后逃避潜伏期延长,空间探索试验在目标象限所花的时间减少（P＜0.05）;α多样性与β多样性指数分析两组小鼠粪便肠道菌群的丰富度和多样性发生差异性改变,AS组的肠道菌群结构中门（6种）和属（15种）水平相对丰度的差异较显著（P＜0.05）;两组小鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平表达对比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：肠道菌群失调改变可能与老龄小鼠术后认知功能障碍的发病机制有关。     

骨形态发生蛋白7 在前列腺癌中的表达

目的:探讨骨形态发生蛋白( BMP-7)在前列腺癌组织中的表达及其与临床分期之间的关系.方法:应用免疫印迹法检测30例前列腺癌患者及30例前列腺良性增生患者前列腺组织中BMP-7的表达情况.结果:前列腺癌组织中BMP-7的表达显著高于前列腺良性增生组织,且BMP-7的表达随前列腺癌的临床分期、Gleason分级增高而增加.结论:BMP-7在前列腺癌中的表达明显增高,其表达量与临床分期相关,前列腺癌组织中BMP-7的表达增高提示预后不佳.     

一株来源于土壤的横梗霉菌及其产羧甲基纤维素酶性质

从广州徐闻农垦丰收农场土壤样品中分离到一株产羧甲基纤维素酶菌株,结合菌株形态特征和ITS基因序列同源性分析结果,表明该菌株为Lichtheimia sp.的未定种,其系统分类学关系与横梗霉菌Lichtheimia ramosa isolate K12(MN190291.1)最近,故命名为:横梗霉菌XWNR1(Lichtheimia ramosa XWNR1),该菌种保藏号为CCTCC NO:M2018230。采用刚果红染色法发现该菌粗酶液能够降解羧甲基纤维素钠产生透明圈,初步确定该菌具有产羧甲基纤维素酶的能力。通过优化该菌发酵培养条件,结果表明:该菌株以2.0×10^6接种浓度、1%接种量,28℃180 r/min恒温振荡培养60 h时,菌株分泌的羧甲基纤维素酶具有最好的活力。酶学性质初步研究结果表明,该羧甲基纤维素酶在最适pH 7.0、最适反应温度40℃条件下具有较好的pH稳定性和热稳定性。     

人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡研究及氨茶碱的诱导作用

目的:在前期研究的基础上进一步观察氨茶碱对人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡的诱导作用。方法:密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离健康成年人外周血T淋巴细胞,分空白组及氨茶碱组,培养后观察细胞光镜及电镜形态学、FDA/PI荧光染色,并用流式细胞仪检测凋亡和胀亡细胞比例变化。结果:①人外周血T淋巴细胞经体外培养,可自然出现典型的细胞凋亡与胀亡形态学改变。②人外周血T淋巴细胞在氨茶碱诱导作用下,凋亡率有显著增高,但胀亡率相对无显著增高。结论:人外周血T淋巴细胞存在凋亡与胀亡现象,氨茶碱可诱导人外周血T淋巴细胞凋亡,但不能有效的诱导健康人外周血T淋巴细胞胀亡。     

可分泌性GLP-1重组慢病毒的构建

目的:为了探讨使用基因治疗在体内分泌表达胰高血糖素样肽-1(GLP-1)方法治疗糖尿病的可行性,构建可分泌表达GLP-1的重组慢病毒.方法:1.将已构建成功的NT4-GLP-1融合基因插入慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO中,构建pLenti6V5D-TOPO/NT4-GLP-1重组慢病毒包装质粒.2.用慢病毒包装辅助质粒plp1、plp2、plp/VSVG,及重组慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO/NT4-GLP-1,四质粒磷酸钙共沉淀法转染80%融合的293细胞系,包装慢病毒.3.通过免疫组化法染色确定重组慢病毒效应.结果:重组质粒经BamHI和XhoI联合酶切,10g/L琼脂糖凝胶电泳可见在342bp处有一目的片段.该值与NT4-GLP-1融合基因片段的大小一致,说明NT4-GIP-1融合基因已经成功重组于慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO内.免疫组化结果显示,实验组细胞内出现大量棕黄色颗粒,阳性细胞达到70%以上,对照组中没有阳性细胞,所以说明NT4-GLP-1重组慢病毒在细胞中可以正确地分泌表达GLP-1.结论:NT4-GLP-1重组慢病毒包装质粒构建正确,病毒包装成功.     

双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化条件的研究

介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法,并系统研究影响双歧杆菌电转化效率的关键因素。通过研究,菌体在4oo为0.3-0. 5时收集以制备感受态细胞,制备好的感受态细胞应尽早用于电转化;最佳电场强度为12.5 kV/cm;转化后的细胞复苏培养2 h为佳。感受态细胞的转化效率可达103 CFU/μg DNA。     

四氢嘧啶微生物合成与应用研究进展

极端环境微生物定义了生命的边界。为了适应各种极端环境,极端环境微生物通过合成许多独特的活性化合物来保护自己。四氢嘧啶就是其中一种代表性的保护性物质。它最早是从极端嗜盐菌中发现的,作为调节细胞渗透压的一类相容性溶质,可以帮助微生物适应高盐等恶劣环境。研究发现四氢嘧啶不仅是一种重要的渗透压调节剂,还是一种高效的生物保护剂,可以帮助蛋白、核酸、生物膜乃至整个细胞对抗高温、干燥、冷冻和辐射等多种逆境。因此,四氢嘧啶在生物保护、生物医药和生物科技等众多领域展现出广阔的商业化应用前景。随着合成生物学和代谢工程技术的快速发展,传统的嗜盐菌四氢嘧啶生产方法已逐步被产率更高、环境更友好的生物工程菌及技术所取代。本文围绕四氢嘧啶的微生物合成及其应用研究进行综述,为后续四氢嘧啶的开发和应用提供重要参考。     

应用Maxent建立沙筛贝潜在生境模型

外来入侵物种沙筛贝适应能力强、繁殖率高,一旦入侵,将严重危害潮间带生物多样性。我国广东省部分沿海地区的潮间带和牡蛎增养殖区已被沙筛贝入侵,且污损情况较严重。为了了解沙筛贝目前在我国的潜在生境情况,本研究选用最大熵模型(Maxent)和地理信息系统相结合,建立了沙筛贝在我国和全球的潜在生境预测模型,并利用受试者工作特征曲线(ROC)和实地调查对结果进行验证。结果表明: 沙筛贝全球存在概率较高的地区分布于北美洲与南美洲之间、印度南部、斯里兰卡和我国长江以南沿海以及南半球的澳大利亚范迪门湾;沙筛贝在我国的适生区域主要分布在上海以南沿海省份。影响沙筛贝适生区域分布的主要环境变量包括水汽压、温度和太阳辐射,经ROC检测后训练集AUC值为0.996,预测结果达到优秀水平。研究结果可为沙筛贝入侵风险评估和治理提供理论依据, 补充我国外来入侵物种的潜在生境预测工作。     

净石灵胶囊联合体外冲击波碎石术治疗复杂性肾结石临床疗效分析

目的:探讨净石灵胶囊联合体外冲击波碎石术治疗复杂性肾结石临床疗效。方法:选取2010年1月-2011年12月在我院就诊的复杂性肾结石患者83例,随机分为体外冲击波碎石术组、经皮肾镜碎石取石组、净石灵胶囊联合体外冲击波碎石术组。观察两组间的手术时间、碎石率、疗效以及组内之间不同直径的结石的碎石率。结果:ESWL组碎石成功率85.3%,PCNL组碎石成功率90.0%,净石灵胶囊联合体外冲击波碎石术组碎石成功率89.7%,三组比较无统计学意义(P>0.05);ESWL组手术时间(40.2±6.3)min,PCNL组手术时间(46.6±4.1)min,净石灵胶囊联合体外冲击波碎石术组手术时间(42.2±5.7)min,三组比较无统计学意义(P>0.05);ESWL组、PCNL组、净石灵胶囊联合体外冲击波碎石术组治疗复杂性肾结石的有效率依次为75.0%、80.0%、97.4%,组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05);ESWL组5<10mm、10<15mm、15<20mm直径的肾结石的粉碎率依为100%、85.7%、40%,组内比较具有统计学意义(P<0.01),PCNL组5<10mm、10<15mm、15<20mm直径的肾结石的粉碎率依次为100%、83.3%、75%,组内比较具有统计学意义(P<0.05),净石灵胶囊联合体外冲击波碎石术组5<10mm、10<15mm、15<20mm直径的肾结石的粉碎率依次为100%、88.9%、57.1%,组内比较具有统计学意义(P<0.01)。结论:体净石灵胶囊联合体外冲击波碎石术治疗复杂性肾结石的临床疗效优于单纯运用体外冲击波碎石术或经皮肾镜碎石取石术。