全文获取类型
收费全文 | 2689篇 |
免费 | 1191篇 |
国内免费 | 2002篇 |
出版年
2024年 | 7篇 |
2023年 | 141篇 |
2022年 | 228篇 |
2021年 | 246篇 |
2020年 | 249篇 |
2019年 | 179篇 |
2018年 | 89篇 |
2017年 | 131篇 |
2016年 | 232篇 |
2015年 | 197篇 |
2014年 | 222篇 |
2013年 | 291篇 |
2012年 | 305篇 |
2011年 | 281篇 |
2010年 | 292篇 |
2009年 | 301篇 |
2008年 | 329篇 |
2007年 | 219篇 |
2006年 | 140篇 |
2005年 | 144篇 |
2004年 | 192篇 |
2003年 | 226篇 |
2002年 | 228篇 |
2001年 | 100篇 |
2000年 | 205篇 |
1999年 | 153篇 |
1998年 | 81篇 |
1997年 | 94篇 |
1996年 | 64篇 |
1995年 | 45篇 |
1994年 | 36篇 |
1993年 | 98篇 |
1992年 | 96篇 |
1991年 | 21篇 |
1990年 | 6篇 |
1983年 | 9篇 |
1981年 | 1篇 |
1958年 | 3篇 |
1950年 | 1篇 |
排序方式: 共有5882条查询结果,搜索用时 203 毫秒
2.
【目的】通过增加北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)PD-67芳香族氨基酸合成的前体物质磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的供应,解除终产物对芳香族氨基酸合成途径中第一个酶同时也是关键酶3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合酶(DS)的反馈抑制并提高抗反馈抑制的DS的活力,使碳流更多地流向芳香族氨基酸合成途径,从而积累更多L-色氨酸。【方法】运用PCR技术扩增北京棒杆菌PD-67磷酸烯醇式丙酮酸合酶基因pps,与表达载体连接构建重组质粒pXPS;运用重叠PCR技术定点突变大肠杆菌(Escherichia coli)受苯丙氨酸调控的DS基因aroG,使相应的编码氨基酸序列发生突变:Leu175Asp,新的基因命名为aroGfbr,与表达载体连接构建重组质粒pXA;构建pps和aroGfbr的共表达重组质粒pXAPS。将3个重组质粒分别转入菌株PD-67,构建工程菌株PD-67/pXPS、PD-67/pXA和PD-67/pXAPS。通过摇瓶发酵研究工程菌株的发酵特性。【结果】酶活分析结果表明,pps基因和aroGfbr基因在北京棒杆菌PD-67中均实现了表达。工程菌株PD-67/pXA粗酶液DS抗反馈抑制分析表明,AroGfbr已解除酪氨酸和苯丙氨酸的反馈抑制。过表达pps基因和aroGfbr基因分别使工程菌L-色氨酸产量提高12.1%和26.8%,双基因共表达可使工程菌的产酸量提高35.9%。【结论】北京棒杆菌PD-67pps基因的过表达以及大肠杆菌来源的解除反馈抑制的aroGfbr的过表达均有助于增加PD-67 L-色氨酸的合成,而双基因的共表达可以进一步提高L-色氨酸的积累量。 相似文献
3.
【目的】探讨乙肝感染中gp96上调的机制及其可能发挥的病理学机制。【方法】首先通过生物信息学、Real-time PCR、荧光报告基因和Western blot研究NF-κB激活gp96表达的机制。进一步通过在肝细胞中过表达或敲低gp96的水平,运用CCK-8法和流式检测分析gp96对肝细胞增殖、凋亡,和细胞周期的影响,通过检测肝细胞EMT发生和细胞集落形成实验,分析gp96对于HCC发生的作用。【结果】NF-κB与gp96启动子上NF-κB结合位点结合,激活gp96的表达。实验结果显示,gp96能够促进肝细胞增殖、抑制凋亡,促进细胞周期从静息期向分裂期的转化,同时促进肝细胞EMT发生和细胞集落的形成。【结论】NF-κB通过活化gp96启动子上调其表达,为HBV慢性感染上调gp96的机制提供了线索,同时提示gp96在慢性炎症引发HCC过程中发挥重要作用。 相似文献
4.
野生大豆抗感大豆孢囊线虫材料内生细菌多样性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
【目的】对抗感野生大豆材料根内生细菌的多样性进行比较分析,为研究野生大豆内生细菌与大豆孢囊线虫之间的相互关系奠定基础。【方法】在野生大豆抗大豆孢囊线虫3号生理小种筛选基础上,利用扩增核糖体DNA限制性分析(Amplified ribosomal DNA restriction analysis,ARDRA)和16S rDNA克隆文库测序相结合的方法,对抗感野生大豆根系内生细菌多样性及群落结构进行分析。【结果】野生大豆根内生细菌分属于6大类群,其中变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)为优势类群,相对丰度分别为46.8%和13.6%,另外有少量的放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、酸杆菌门(Acidobacteria)、异常球菌-栖热菌门(Deincoccus-Thermus)和古细菌(Archaea),18.8%克隆序列与环境中未培养细菌的16S rDNA序列有较高的相似性。野生大豆高抗材料内生细菌的多样性比高感材料更为丰富,且抗感材料内生细菌优势菌群存在明显差异,中慢生根瘤菌(Mesorhizobium tamadayense)、肠杆菌(Enterobacter ludwigii)和巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)为野生大豆高抗材料特有的可操作分类单元(Operational Taxonomic Units,OTUs)中的优势种群。【结论】研究结果表明抗感野生大豆根内生细菌的优势种群存在明显差异,而内生细菌的优势种群与大豆孢囊线虫的相互关系正在深入分析研究。 相似文献
5.
6.
通过用糊精(含8-12个D-葡萄糖残基)做底物,以碘显色,在460nm监测光吸收的变化,测定淀粉麦芽四糖酶活力的结果表明:测活体系中含有一定量的钙离子.酶的测活曲线(在A_(460)<0.08的吸收范围)有较好的线性,该方法比间断法简便,快速,并且在测定淀粉麦芽四糖酶盐酸胍变性的失活动力学过程中.具有较好的重复性,可能成为淀粉麦芽寡糖酶测活的常用方法. 相似文献
7.
腺苷酸激酶基因在大肠杆菌中的可溶性高表达 总被引:6,自引:0,他引:6
报道了鸡肌腺苷酸激酶基因的克隆和在温控启动子PRPL调控下在大肠杆菌中的可溶性高效表达.SDS-PAGE分析表明,鸡肌腺苷酸激酶的含量可占大肠杆菌细胞总蛋白含量的38%.利用Johnson等的干冰/乙醇-冰水浴反复冻融法,可将此重组蛋白进行富集,纯度可达85%以上.鸡肌腺苷酸激酶可与抗兔肌腺苷酸激酶单克隆抗体产生强的交叉反应. 相似文献
8.
伴随老化,老年人的认知和脑功能会表现出一定的下降趋势.尽管如此,人类的大脑到老年期都会保有一定的可塑性,认知训练的方式是延缓认知和脑功能衰退的有效手段.本文回顾了以往针对老年人不同类型的认知训练研究,探讨了认知训练的理论基础(包括放大观和补偿观),深入分析了老年人认知训练的神经机制,并在此基础上指出以往研究中理论基础冲突的不足和对未来研究老年人训练任务适配性的展望. 相似文献
9.
外来物种入侵后的多物种竞争共存的集合种群模型 总被引:3,自引:0,他引:3
基于多物种竞争共存模型,提出外来物种与本地物种竞争共存途径的两种假想:外来物种通过插队竞争与本地物种实现共存;外来物种通过等位竞争与本地物种实现共存.并提出根据外来物种在两种竞争共存模式下占据生境斑块比例的稳定值大小来判断外来物种和本地物种的竞争共存途径.根据两种假想,分别建立了外来物种插队竞争共存模型和等位竞争共存模型.通过应用数学软件Mathematica 4.0对两个模型进行了模拟,得出以下结论:在外来物种与本地物种竞争共存状态下,如果外来物种通过插队竞争与本地物种实现共存,当本地物种竞争力差异较大时,外来物种极易对本地稀少物种构成危害.虽然外来物种不会直接造成本地稀少物种的灭绝,但是会使本地稀少物种的生境斑块急剧减少,增加本地稀少物种灭绝的可能性,而当本地物种竞争力差异较小时,外来物种对本地所有物种的影响都较小.如果外来物种通过等位竞争与本地物种实现共存,无论本地物种竞争力差异大小与否,外来物种只是影响到与其生态位相同的本地物种,影响程度取决于外来物种侵入时所占据生境斑块的比例大小. 相似文献
10.
基于2003–2007年千烟洲涡度相关通量塔观测的气象数据和蒸散发数据,评价了常用的蒸散发模型模拟森林生态系统蒸散发的适用性,包括Priestly-Taylor、Blaney-Criddle、Hargreaves-Samani、Jensen-Haise、Hamon、Turc、Makkink和Thornthwaite模型。结果表明,日尺度上Priestly-Taylor模型的模拟效果较好,相关系数达0.953;月尺度上Makkink模型的模拟效果较好,相关系数达0.995;而Thornthwaite模型在月尺度上模拟误差较大,均方根误差与平均偏差分别为15.559和13.436;Jensen-Haise模型在日、月尺度上模拟效果均较差。采用偏相关法分析气象因子与蒸散发值的关系,得出森林生态系统蒸散发驱动因子的贡献排序为:辐射温度水气压风速土壤温度相对湿度白天时长,即辐射对蒸散发的影响较为显著,与基于辐射法的Priestly-Taylor和Makkink模型分别在日、月尺度上适用性较好的结论一致。 相似文献