猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的原核表达、纯化与结构分析

将猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)BJ 4毒株N基因克隆至原核表达载体pET2 8a中 ,得到重组表达载体pET2 8 N ,转化EscherichiacoliBL2 1(DE3)细胞 ,获得可溶性表达 ,表达量占菌体蛋白的 2 8%。经ProbandNi2 亲和层析获得重组蛋白P2 8 N ,圆二色谱 (CD)测定结果表明 ,P2 8 N重组蛋白螺旋占 2 6 1% ,折叠占 2 3 7% ,转角 19 8% ,卷曲占 30 3%。并进一步绘制出PRRSVN蛋白的二级结构图     

“强基计划”背景下生物学实验教学改革——以“生物学综合设计”课程为例北大核心CSCD

人才培养是未来国家竞争的核心。“强基计划”是我国对基础学科拔尖创新人才培养模式的重要探索,是满足国家重大战略人才需求的重要举措。“强基计划”招收的学生,往往成绩优异、兴趣浓厚,这为相关学科的人才培养模式提出了新要求和新目标。其中,“强基计划”背景下的基础教学改革势在必行。超学科教育理念(science,technology,engineering,arts,mathematics,STEAM)作为一种跨学科的综合性教育理念,与“强基计划”的建设理念不谋而合。鉴于此,天津大学生命科学学院根据“强基计划”背景下生物学科人才培养目标,结合STEAM教育理念,以“生物学综合设计”课程为例,对生物学实验教学改革进行了探索与实践。     

PRRSV非结构蛋白Nsp2PL2域结构及其去泛素化酶功能

为了解PRRSV非结构蛋白Nsp2的PL2域结构及功能,本研究通过构建PL2、PL2融合Ub的Strep标签的原核表达质粒,表达获得纯度95%以上的蛋白,进行结晶。结果表明PRRSV PL2蛋白的聚集状态具有浓度依赖性,优化出短粗和长细两种晶型的蛋白晶体。通过细胞内外实验了解PL2的去泛素化酶特征。将纯化的Ub-PL2-Strep蛋白分别与K48、K63或KO(线性)泛素化的蛋白孵育,检测蛋白体外去泛素化酶活性;将构建的PL2真核表达载体与不同位点泛素质粒共转染以了解PL2去泛素化酶活性及作用模式。结果表明PL2蛋白具有去除K48、K63及线性泛素化修饰的广谱去泛素化酶作用。PL2蛋白高二硫键含量,多聚特性影响规则晶体及衍射图的形成。PL2蛋白结构及功能的研究为PRRSV致病机制及药物靶点的筛选提供了依据。     

克雷伯氏肺炎杆菌LDH526产1,3-丙二醇的甘油自动流加策略

1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,主要作为平台化合物用于合成聚酯,如聚对苯二甲酸丙二醇酯。经基因工程改造的克雷伯氏肺炎杆菌LDH526能以甘油作为唯一碳源合成1,3-丙二醇,最终发酵浓度超过90 g/L。甘油浓度是影响1,3-丙二醇合成的关键因素。为了实现对甘油浓度的精确控制,设计并优化了基于发酵动力学的甘油自动流加策略。通过将底物流加速率与易观察变量p H和发酵时间偶联,实现了发酵过程中甘油流加的自启动和甘油浓度的动态控制。发酵72 h,1,3-丙二醇的浓度可稳定超过95 g/L。自动控制甘油流加的发酵过程具有可重复性、连续性以及人工工作量少的特点,有望从实验室规模扩大到生产规模。