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丙型肝炎病毒复合高变区1模拟表位蛋白的免疫原性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
将丙型肝炎病毒高变区1(HVR1)模拟表位融合基因插入原核表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经亲和层析和凝胶过滤层析获得HCV HVR1模拟表位融合蛋白.用Western blot和ELISA检测融合蛋白与HCV抗体阳性血清的结合情况.皮下注射免疫BALB/c小鼠,用ELISA检测小鼠血清中的抗HCV抗体水平及其与天然HCV高变区1合成肽的交叉反应.结果表明融合蛋白能与HCV抗体阳性血清特异结合,融合蛋白与HCV抗体阳性血清的结合频率为71.6%(25/35).融合蛋白免疫小鼠后能有效诱导免疫应答,其诱生的特异性抗体最高滴度达104(免疫后第8周),且该抗体能同2条天然HCV HVR1合成肽发生交叉反应.本研究提示,HCV复合HVR1模拟表位融合蛋白在丙型肝炎疫苗的研发中可能具有潜在应用价值. 相似文献
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丙型肝炎病毒多表位抗原基因的构建与免疫原性研究 总被引:4,自引:0,他引:4
丙型肝炎病毒(HCV)基因易发生变异, 尤其是含中和抗原表位的高变区1(HVR1)变异性最大. 模拟HVR1的B细胞表位具有涵盖多种天然表位的抗原特性, 保守的T细胞表位具有各型间的相对保守性. 为解决HCV高变性造成的疫苗研究障碍, 我们选取HCV E2区HVR1(384~410 aa)模拟B细胞表位9条、C区的保守CTL表位2条(35~44 aa, 132~140 aa)、NS3区保守的CTL表位1条(1073~1081 aa)及NS3区保守的Th表位1条(aa 1251~1259), 各表位之间以插入3个氨基酸为连接臂, 人工合成上述13条表位基因串联的HCV多表位抗原基因(mfc). 将mfc与gst基因融合, 表达了多表位抗原蛋白GST-MFC. 同时, 构建了白介素-2信号肽基因、PADRE表位基因和mfc基因串联的候选HCV DNA疫苗, 即质粒pVAX1.0-st-mfc. 以GST-MFC蛋白免疫家兔和质粒pVAX1.0-st-mfc免疫小鼠, 采用ELISA和Western blot方法, 应用10条具有代表性的HCV HVR1合成肽进行检测, 证明有9条HVR1合成肽能与所有免疫动物血清反应, 交叉反应率(cross reactivity, CR)为90%. 应用HCV抗体阳性的感染者血清与多表位抗原GST-MFC蛋白进行反应, 证明其反应识别率(reactivity frequency, RF)为75%. 上述结果表明, 筛选合成的HCV多表位抗原基因mfc具有HCV中和抗原表位的特征, 可作为HCV疫苗研制的候选基因. 相似文献
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竞争关系的对称性是塑造植物物种空间分布格局和影响物种共存重要机制之一,对其开展研究不仅对于揭示植物群落构建机制具有重要意义,也有助于解析群落演替的驱动力。在贵州赤水湿热河谷内的芭蕉群落中建设固定样地,对1989棵植物个体进行空间定位和物种识别并记录胸径等个体属性。采用对数相关函数和标记变异系数分析(marked variogram)等空间统计方法检测优势种的空间分布格局和竞争对称性,结果如下:(1)芭蕉(Musa sp.),粗糠柴(M.philippensis),粗叶木(L.chinensis),川钓樟(L.pulcherrima),红果黄肉楠(A.cupularis)等5种优势种均表现为小尺度下的种内聚集分布,其中芭蕉主要采用克隆繁殖,其重要值达33.6%,且种内聚集度最大。(2)芭蕉种群在5 m尺度下呈现出显著的种内对称性竞争,这一竞争过程减少了种群自疏作用并推动种内聚集分布格局的形成,增加了该种群在森林中的生存力。(3)芭蕉与其余4种优势种之间的不对称竞争过程导致了种间负关联。结果表明,不同优势种在种间竞争对称性上的差异说明了植物种群繁殖和扩散方式是群落构建的重要影响因素之一,相比于有性繁殖过程,采用无性克隆繁殖的植物个体可通过种内对称竞争机制来减少自疏以增加种群生存力,并通过与相邻异种个体的不对称竞争过程来提升种群获取有限资源的能力,进而成为演替中的优势个体。研究结果可为今后制定植物物种多样性保护政策提供科学参考。 相似文献
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蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的表面展示及酶学性质分析 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶催化1分子蔗糖上的果糖基转移到另一个蔗糖分子上,形成1-蔗果三糖和葡萄糖。在低聚果糖中,1-蔗果三糖益生素活性最高。本研究将该酶展示在酵母菌细胞表面上,并用于1-蔗果三糖的制备。【方法】将来自莴苣的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶基因克隆到用于酵母细胞表面展示的表达载体上,并在解脂亚罗酵母菌中进行异源表达,表达的酶展示在该细胞表面上,然后以蔗糖为底物,研究表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的性质。【结果】免疫荧光实验结果表明蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶已展示在酵母菌的细胞表面上,高效液相色谱结果表明酵母表面展示的该酶具有转移酶的催化活性。该酶的最适作用温度、最适作用p H分别为45°C和7.5;该酶的催化活性受Zn2+和Cu2+的抑制,受Ca2+激活;该酶重复使用7次后,酶活下降50%。表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶和3%蔗糖混合后在40°C条件下孵育30 min后,所产1-蔗果三糖含量最高为20.8 mmol/L。【结论】蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶在解脂亚罗酵母菌中得到成功表达,并展示在其细胞表面上,生化研究表明该重组蛋白具有果糖基转移酶活性,且催化蔗果三糖的生成。表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶作为一种全细胞催化剂能够用于1-蔗果三糖的制备。 相似文献
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芪类化合物在癌的起始、促进和发展阶段均有化学抗癌活性,对其化学结构进行改造并进行作用机制研究,提高其抗肿瘤活性,有可能发现新的抗肿瘤药物.在合成23种芪类化合物的基础上,以MTT法测定其对9种肿瘤细胞系的抑制作用,发现多种化合物对SMMC-7721、BGC-823、HepG2、Bel-7402、MCF-7、SGC-7901细胞系具有较明显的抑制活性.以细胞周期分析、Hoechst 33258荧光染色及线粒体膜电位变化进行检测,发现经抑制作用较强的化合物HCQ-10处理后的 Bel-7402细胞发生G2/M期阻滞,并继发细胞凋亡.实验结果说明,合成芪类化合物对SMMC-7721、BGC-823、HepG2、Bel-7402、MCF-7、SGC-7901细胞具有较为明显的增殖抑制作用,其抑制Bel 7402细胞增殖的作用机制为阻滞细胞于G2/M期并诱导细胞继发凋亡. 相似文献
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三种豆科牧草种子在萌发阶段对盐渍环境的生理适应及主要离子调控 总被引:2,自引:0,他引:2
试验对3种豆科牧草紫花苜蓿、草木樨、沙打旺的种子,在萌发阶段对盐渍环境的适应性和离子调控机制进行了研究,测定了盐渍环境中种子的萌发率和恢复萌发率;同时,对400 mmol·L-1NaCl处理后,种子恢复萌发、胚的主要离子含量变化、水分吸收等情况进行了测定。结果表明:50 mmol·L-1 NaCl处理中,紫花苜蓿种子的最终萌发率受到明显的抑制而降低;300 mmol·L-1 NaCl溶液处理中,草木樨的最终萌发率明显高于紫花苜蓿和沙打旺;沙打旺种子的初始萌发过程被300 mmol·L-1NaCl抑制而推迟,推迟的时间长于紫花苜蓿和草木樨达5 d。400 mmol·L-1 NaCl处理种子1、2 和4 d后,3种植物种子的吸水速率受到明显抑制;紫花苜蓿种子的恢复萌发率明显低于草木樨和沙打旺;紫花苜蓿种子胚积累的Na+明显高于草木樨和沙打旺,而且有较多的K+和Ca2+养分离子流失。盐渍环境下,3种牧草种子萌发受到的影响是由于渗透胁迫和离子毒害引起的,但3种植物种子的生理适应机制却存在明显的差异。 相似文献
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目的:探讨夏枯草对人甲状腺癌细胞系SW579细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法:采用甲基噻唑(MTT)比色法和生长曲线测定不同浓度夏枯草在不同作用时间内对在体外培养SW579细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果:夏枯草可在G0/G1期阻滞人甲状腺癌细胞系SW579的增殖,使S期细胞比率降低;在一定范围内,夏枯草的浓度越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高。结论:夏枯草能抑制人甲状腺癌细胞系SW579细胞生长,并诱导细胞凋亡而阻止细胞周期。 相似文献
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目的探讨胸部创伤患者早期血清正五聚蛋白(PTX3)、α-黑素细胞刺激素(α-MSH)及CRP水平与创伤后细菌感染的相关性分析。方法选取2017年3月至2019年5月本院收治的96例胸部创伤或以胸部创伤为主的多发伤患者作为创伤组,分为感染组34例和非感染组62例;同期健康体检者100例作为对照组。采用ELISA法检测血清PTX3、α-黑素细胞刺激素(α-MSH)水平;免疫比浊法检测血清CRP水平;ROC曲线评估血清PTX3、α-MSH、CRP水平对胸部创伤并发细菌感染的诊断价值。Logistic回归分析创伤后细菌感染的影响因素。结果创伤组患者血清PTX3、CRP表达水平高于对照组(P0.05),α-MSH表达水平低于对照组(P0.05)。创伤组患者血清PTX3、CRP水平入院后1 d内上升,1 d到7 d呈下降趋势,于7 d后低于入院时,创伤组患者血清α-MSH水平入院后1 d内下降,1 d~7 d呈上升趋势(P0.05);感染组胸部创伤患者血清PTX3、CRP水平高于非感染组(P0.05),α-MSH水平低于非感染组(P0.05)。血清PTX3、α-MSH、CRP水平联合预测胸部创伤并发细菌感染的ROC曲线下面积、敏感度、特异度、约登指数分别为0.968、88.0%、93.2%、0.820。Logistic多因素回归分析显示PTX3、CRP均是创伤后细菌感染的危险因素(P0.05),α-MSH是创伤后细菌感染的保护性因素(P0.05)。结论胸部创伤及创伤后细菌感染发生过程中血清PTX3、CRP水平上升,血清α-MSH水平下降,三者联合检测对胸部创伤并发细菌感染具有一定诊断价值。 相似文献
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自然保护区被公认为是生物多样性就地保护最有效的方式之一。基于全国自然保护区基础调查,通过分析我国自然保护区内野生哺乳动物种群数量的分布情况,在全国尺度上对自然保护区内591种哺乳动物的就地保护状况进行了评估。根据评价指标体系,将我国哺乳动物就地保护水平划分为"有效保护""较好保护""一般保护""较少保护""未受保护""保护状况不明""未予评价"等7个等级。结果表明,除未予评价的35种外,其余参评的556种物种中,共有534种在自然保护区内得到一定程度的保护,占总数的90.36%。其中有效保护、较好保护、一般保护、较少保护的物种分别有145、60、100种和229种,分别占总数的24.53%、10.15%、16.92%和38.75%。此外,有22种物种保护状况不明。针对不同保护体系中的哺乳动物的就地保护状况进行评价,研究共涉及国家重点保护野生动物140种和列入中国物种红色名录的427种,其中分别有109种和409种在保护区内得到不同程度的保护。总体来说,虽然有90.36%的哺乳动物在保护区内得到不同程度的保护,但保护状况良好(包括有效保护和较好保护)的比例明显较低,保护状况仍然不容乐观,保护力度有待加强;对于保护状况不明的物种,有必要对保护区开展更加全面、细致的科学考察以进一步确定其保护现状;对于确未受到自然保护区就地保护的物种,需要通过完善保护区网络,将其纳入自然保护体系之中。 相似文献