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巴西固氮螺菌Yu62draTG基因及其下游区域的克隆与核苷酸序列分析 总被引:9,自引:2,他引:7
以Azospirillum brasilense sp74. 0kb draTG片段为探针。自A.Brasilense Yu62的基因文库中克隆了约8kb的draTG同源片段。通过对该片段的Southern杂交分析发现Abrasilense Yu62的draTG基因定位在3.0kb EcoRI-Kpn I片段上,其上游与nifH基因相邻。DNA序列分析结果表明:该片段含有完整的draTG,这两个基因下游还有两个开放阅读框架(ORF3和ORF4,其中ORF4是不完整的),draTG及下游的ORF3推测以一个操纵元的方式转录;在draG及ORF3的上游区域均发现。54依赖型启动子的特征序列(DPE及UAS).推测它们与draT共转录外,还有可能单独转录。同源比较的结果表明Azospirillum的DraTG是非常保守的.它们在菌株及种间的差异都很小;紧接着drag的ORF3除与A lipoferum和Rhodospirillum rubrum相应位置的ORF同源外,还与Azotobacter vinelandii的ORFl4同源;ORF3下游的ORF4与大肠杆菌的yafj基因有较高的同源性。 相似文献
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巴西固氮螺菌 Yu62 draTG 基因启动子区域的核苷酸序列及其功能分析 总被引:1,自引:1,他引:0
对巴西固氮螺菌draTG上游区域进行了全序列分析,结果表明该区域除了编码部分nifH基因外(nifH与draTG转录方向相反),不编码任何其它已知的基因。但在该区域发现了一些可能的调控序列,它们包括上游激活序列(UAS)、下游启动子组份(DPE)和富A+T区。这说明:nifH与draT间的区域可能主要起调控功能而非编码功能;dra操纵元(operon)的启动子很可能是RpoN-依赖型。用pAF300做载体,构建了draT∷cam转录融合质粒pAT1,并通过检测Cmr以检测draT在大肠杆菌和巴西固氮螺菌中的表达,结果表明draT在LD丰富培养基上,好氧条件下,只在巴西固氮螺菌中才表达。这说明,draT的转录需要某种大肠杆菌中没有的因子,同时也表明draTG上游区域有启动子功能。利用启动子探针质粒载体pCB182,构建了draT∷lacZ转录融合质粒pCT1。在大肠杆菌中测定肺炎克氏杆菌NifA对draT∷lacZ的转录激活作用。结果表明nifA并不参与draT的转录调控。 相似文献
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生物被膜是单细胞微生物通过其分泌的胞外多聚基质粘附于介质表面并将其自身包绕其中而成的膜样微生物细胞聚集物。生物被膜的形成使细菌具有更强的适应外界环境的能力,也是导致微生物产生耐药性及慢性感染性疾病难以治疗的重要原因之一。铜绿假单胞菌在肺部的定殖是肺囊性纤维化病患者发病和死亡主要原因,其造成的感染通常与形成抗生素抗性极强的生物被膜有关。铜绿假单胞菌生物被膜的形成受控于多种复杂的细菌调控体系之下,包括群体感应系统及参与调节胞外多聚基质合成的双组分调控系统等。此外,为了利用低浓度的环境铁来维持生存并完成各种生理功能,铜绿假单胞菌进化出了一系列铁摄取系统,这些系统对其毒力因子的释放和生物被膜的形成又起着重要的调控作用。本文主要对铜绿假单胞菌生物被膜的形成与调控机制及其铁摄取系统进行了综述,为进一步了解及清除铜绿假单胞菌引发的问题提供途径与思路。 相似文献
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肺炎克氏杆菌nifA基因在巴西固氮螺菌固氮基因表达的铵调节中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
固氯螺菌(Azospirillum)是一类仅在限铵和微好氧条件下固氮的微生物,它可与许多禾本科作物联合共生⑴,具有较大的应用潜力。铵作为固氮作用的调节信号,在固氮螺菌的实际应用中是首要的限制因素。在固氯螺菌中,铵不但具有与肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)相似的阻遏固氮酶合成的作用,而且还对已合成的固氮酶进行活性调节⑵。研究表明,其固氮酶翻译后活性调节的机制类似于深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum)⑶,即在有铵条件下其固氮酶铁蛋白的一个亚基被共价修饰而丧失活性,这一过程是可逆的。由于铵在固氮螺菌中双水平地调节固氮作用,使得在野生菌株中研究其固氮基因表达水平上的调节较为困难。Zhang等⑷利用区域定位诱变技术获得了巴西固氮螺菌Sp7(A.Brasilense Sp7)的draT-突变株,在该突变株中铵不再影响固氮酶的活性,这为其固氮基因表达调节的研究提供了一个良好的材料。本文将组成型表达的肺炎克氏杆菌nifA基围引入该突变株中,通过分析讨论铵对巴西固氮螺菌固氮基固表达的调节作用方式。 相似文献
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用TD-PCR法克隆了巴西固氮螺菌(Azospirillun brasilense)Yu62的nifA基因.序列分析表明它与巴西固氮螺菌Sp7的nifA序列高度同源(96.5%),其编码的产物NifA蛋白与Sp7菌株NifA的氨基酸序列同源性为97.6%.该基因可以完全互补巴西固氮螺菌Sp7 nifA-突变株的Nif-表型.研究了NH4+和O2对Yu62 nifA基因的表达及NifA活性的影响.结果表明mfA基因在Yu62菌株中是部分组成型表达的,氨和氧不能完全阻遏其表达,在5mmol/LNH4Cl与微氧(0.5%O2)条件下表达最高;NifA蛋白在0.4%~0.5%O2时活性最高,氧分压降低和提高都使NifA活性下降,1mmol/L NH4Cl足以抑制NifA的活性. 相似文献
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巴西固氮螺菌 Yu62 draTG 基因启动子区域的核苷酸序列及其功能分析 总被引:2,自引:0,他引:2
对巴西固氮螺菌draTG上游区域进行了全序列分析,结果表明该区域除了编码部分nifH基因外(nifH与draTG转录方向相反),不编码任何其它已知的基因。但在该区域发现了一些可能的调控序列,它们包括上游激活序列(UAS)、下游启动子组份(DPE)和富A+T区。这说明:nifH与draT间的区域可能主要起调控功能而非编码功能;dra操纵元的启动子很可能是RpoN-依赖型。用pAF300做载体,构建了 相似文献
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用PR方法克隆了巴西固氮螺菌Yu62 nifH的启动子片段,DNA序列分析表明菌株Yu62与标准菌株sp7之间的DNA序列差异很小。利用启动子探针质粒载体pcBl82,构建了3个不同的nifH::lacz转录融合质粒,在大肠杆菌中分别测定肺炎克氏杆菌NifA对它们的转录激活作用。结果表明巴西固氮螺菌nifH启动子的转录是依赖于NifA的,缺失了上游激活序列的启动子不能被NifA激活转录,肺炎克氏杆菌NifA对其自身nifH及巴西固氮螺菌nifH启动子的转录激活作用并无很大差异。 相似文献