紫外线辐照聚苯乙烯微孔板用于酶免疫测定的研究与表征

以重组人钙调素（rhCaM）、亲环素（rhCyP）、心磷脂和双链DNA（dsDNA）为包被抗原,建立了检测针对上述4种抗原自身抗体的间接ELISA方法,并对聚苯乙烯微孔板（PS）紫外线（UV）辐照前后进行了对比研究.结果发现：PS板经UV-辐照后,可显著改善酶免疫分析的测定效果,自身抗体的测定敏感度和重复性均有显著提高.原子力学显微镜（AFM）表征结果则提供了改善酶免疫分析的直接证据,抗原分子均匀平铺于UV-辐照的PS基底表面,而未经辐照的PS板则抗原分子的吸附率低,且分布不均并有成团聚集现象.X射线光电子能谱（XPS）分析表明,PS板经UV-辐照后,基底表面发生了氧化并引入了含氧的活性基团,O/C元素比较辐照前提高了6.9倍,改善了对抗原生物分子的亲水和化学反应性能,此亦即UV-辐照PS板改善对抗原分子固定效果的主要原因.     

纳米疫苗与疫苗用纳米材料

疫苗是一种用于有效预防或治疗多种疾病的生物制品,是遏制新型传染病传播的关键手段.与传统疫苗相比,基于纳米材料与技术制成的纳米疫苗,具有抗原装载效率高、靶向性好、毒性低、稳定性高、给药方式多样等显著优势.近10年来,纳米疫苗的研究与日俱增,具有应用潜力的纳米疫苗与材料不断涌现.根据纳米疫苗所添加抗原及其预防疾病的不同可将...     

从鼠黑色素瘤细胞系中分离和鉴定癌干细胞样细胞

目的：从鼠黑色素瘤BL6F10细胞系中分离与鉴定癌干细胞（CSC）样细胞,为今后对CSC的鉴定及靶向治疗奠定基础。方法：用不同免疫磁珠标记的单克隆抗体,从BL6F10细胞系中分离有特征性CD表型的瘤细胞,体外观察不同CD表型瘤细胞在软琼脂培养基上形成克隆的能力;将这些瘤细胞皮下注射到C57BL/6小鼠,比较其致瘤性。结果：从BL6F10细胞系中分离出不同CD表型的特征性瘤细胞;在软琼脂培养基上,CD133^＋、CD44^＋和CD44^＋CD133^＋细胞克隆形成率分别高于CD133^-、CD44^-和CD44^＋CD133^-细胞;CD133^＋、CD44^＋、CD44^＋CD133^＋和CD44^＋CD133^＋CD24＋细胞在小鼠体内的致瘤性分别强于CD133^-、CD44^-、CD44^＋CD133^-和CD44^＋CD133^＋CD24^-细胞。结论：CD44^＋CD133^＋CD24＋表型的BL6F10细胞的某些生物学特性与CSC样细胞相似,具有CSC特征,这些实验结果为进一步鉴定BL6F10细胞系中的CSC提供了重要的实验资料。     

综述——新型纳米生物材料的研发：医学纳米颗粒对类细胞膜作用的仿真研究进展

细胞膜是包围细胞质、维持细胞内部组分动态平衡的一个半透膜,参与细胞黏附、离子传导、信号传导等分子生物学过程．类细胞膜提供了有效的模型研究这些生物学过程,故而分子层面上研究医学纳米颗粒对类细胞膜的作用有助于评估纳米颗粒的生物安全性以及促进纳米颗粒的生物医学应用．本文初步探讨了医学纳米颗粒对类细胞膜作用的仿真研究进展,并在此基础上结合膜生物物理学的研究热点对后续的研究进行了展望．     

超顺磁性三氧化二铁纳米粒子进入吞噬细胞RAW264.7的途径、代谢归宿和生物学效应

超顺磁性铁纳米粒子（SPION）已在纳米医学等诸多领域开始应用,其相关研究也受到了广泛关注,但有关磁性纳米粒子进入细胞的方式、代谢归宿及细胞学效应仍不完全清楚.本研究发现,几乎所有的内吞信号通路都参与了SPION进入RAW264.7巨噬细胞的过程.SPION入胞后主要有3种代谢途径：（1）随有丝分裂进入子代细胞;（2）经溶酶体降解释放游离铁离子进入细胞的铁代谢库;（3）可能通过胞吐作用被排至细胞外.SPION入胞后有很好的生物相容性,对细胞活力、活性氧（ROS）生成及线粒体膜电位等无显著影响,但SPION入胞后对胞内的铁代谢有一定影响,能使贮铁蛋白L（ferritin-L）的mRNA和蛋白表达均升高,运铁蛋白1（ferroportin1）在mRNA水平表达升高,但蛋白质水平未见明显变化,且上述两种蛋白质表达的变化不是通过影响铁调节蛋白2（IRP2）实现的.上述发现为深入揭示纳米粒子的入胞机制及磁性纳米粒子在医学上的安全应用提供了实验依据.     

Ypel3基因在小鼠胚胎发育中的表达与调控

目的:探讨小鼠胚胎发育过程中Ypel3基因的时空特异性表达与调控,为后续功能研究奠定基础。方法:选取胎龄(E)10.5、12.5、14.5、16.5和18.5 d的小鼠胚胎,利用荧光定量RT-PCR技术研究Ypel3基因mRNA的时序性动态表达谱;采用原位杂交技术观察Ypel3基因mRNA在胚胎发育E11.5和E15.5的空间表达谱;应用定量RT-PCR技术检测表观遗传学修饰对Ypel3基因mRNA表达丰度的影响。结果:定量RT-PCR表明该基因从胚胎发育的早中期开始表达,到出生前表达量呈逐渐升高趋势;原位杂交显示E11.5信号出现在脑和心脏中,E15.5信号在脑、舌、心、肺、胸腺、肝、肾等主要脏器中均有表达;甲基化转移酶抑制剂5-氮胞苷(5-Aza)处理的Neuro-2a(N2a)细胞中,Ypel3的表达水平未产生显著变化,而去乙酰化酶抑制剂4-苯丁酸(4-PBA)处理后该基因表达显著升高,5-Aza和4-PBA联合处理后表达水平进一步升高。结论:Ypel3基因在小鼠胚胎发育各阶段有广泛的表达,提示其具有重要作用,且该基因的表达可能受到组蛋白乙酰化的调控。     

纳米与生物

Nano 是希腊文中的单词,有“小矮人”的意思。在英文中,Nano 作为一个词头,放在任何单位前面都表示“十亿分之一”,而它与长度单位“米”相连接,就变成了如今众所周知的纳米,即十亿分之一米。     

制备磷酸化抗体结合反相蛋白阵列探测细胞通路模型信号

通过制备、鉴定与筛选可靠应用于反相蛋白阵列(reverse-phase protein array,RPPA)的磷酸化抗体作为探针,建立LNCa P细胞中Akt、Erk/MAPK通路在4种方式(EGF、LY294、PMA、Na Cl)刺激下信号变化的细胞通路模型,利用RPPA技术探测细胞通路模型的信号。结果获得4组细胞通路模型的RPPA测定数据及25个RPPA适用性的磷酸化抗体探针。4组模型结果均显示了通路中关键信号分子响应于4个外部扰动的磷酸化状态的动态变化。RPPA结果数据与相应的免疫印迹法(Western blot)分析结果一致,证实了分析数据的有效性与可靠性。结果表明,所制备磷酸化抗体探针与RPPA平台结合,极适合于分析细胞信号通路模型。该方法能够有效地拓展RPPA探针范围,使其成为新药开发、临床样本分析等领域的先进工具。     

小鼠白细胞介素21瘤苗的构建及其抗肿瘤效应研究

目的:建立稳定表达小鼠白细胞介素21(mIL-21)的肿瘤细胞瘤苗,观察其在小鼠体内是否能够诱导有效的抗肿瘤免疫反应及免疫记忆效应。方法:将已鉴定的重组质粒pcDNA3.1/mIL-21用脂质体法转染Sp2/0细胞制备瘤苗,RT-PCR法鉴定瘤苗中mIL-21的表达。通过流式细胞仪检测细胞周期来反映瘤苗体外增殖活性,再将其接种BALB/c小鼠,监测肿瘤生长情况,观察mIL-21瘤苗诱导的抗肿瘤效应;用ELISA法检测血清IFN-γ和IL-4含量。结果:得到稳定表达mIL-21的瘤苗Sp2/0-mIL-21。与对照组相比,体外增殖活性无差异。皮下接种BALB/c小鼠后,肿瘤生长缓慢,部分小鼠无瘤体生长并长期存活;用野生株Sp2/0瘤细胞再次攻击未长肿瘤的实验小鼠,4周后亦未见肿瘤生长。接种瘤苗小鼠血清中IFN-γ水平明显上升,IL-4无明显增高。结论:成功构建了mIL-21瘤苗Sp2/0-mIL-21,其能诱导有效的抗肿瘤免疫反应及免疫记忆效应。     

小鼠骨髓瘤中肿瘤干细胞的初步分析

探讨小鼠骨髓瘤(SP2/0细胞)中肿瘤干细胞存在与否。以克隆形成试验检测SP2/0细胞中具有形成克隆能力细胞的大体比例;采用BrdU标记滞留试验检测SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞,即具有干细胞特性的细胞;检测SP2/0细胞中具有干细胞特性的SP细胞存在情况及其比例。结果显示,SP2/0细胞中有一部分细胞具有形成克隆的能力;SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞;SP2/0细胞中存在SP细胞,其比例约为0.7%。而且SP2/0细胞中存在肿瘤干细胞。