苏云金芽孢杆菌chiA,chiB全基因的克隆、表达及其序列分析

以苏云金芽孢杆菌科默尔亚种15A3菌株基因组DNA为模版,用touchdown PCR方法扩增几丁质酶ChiA和ChiB的全基因序列(GenBank登录号:EF103273和DQ512474)。将PCR产物连接pUCm-T克隆载体,获得重组质粒pUCm-chiA和pUCm-chiB,分别转化E.coliXL-Blue。克隆的几丁质酶基因可以利用本身的启动子异源表达各自的蛋白,不需要几丁质作为诱导物。表达的几丁质酶能够分泌到胞外。证明15A3菌株可组成型表达2种几丁质酶。经核苷酸及氨基酸序列分析证明,chiA基因全长1426bp,含有343bp的上游非编码区和1083bp的ORF,编码360个氨基酸。推测成熟蛋白分子量为36kD,只有一个几丁质酶催化域。chiB基因全长2279bp,含有248bp的上游非编码区和2031bp的ORF,编码676个氨基酸。推测成熟蛋白分子量约为70.6kD,具有三个功能域。核苷酸序列分析显示chiA和chiB的启动子所处的位置及转录起始碱基都不相同,-35区相同,而-10区有两个碱基不同,SD序列也不完全一致。     

清热利湿化痰方对痰湿瘀热型2型糖尿病患者中医症候积分、血糖代谢及血清MCP-1、IL-1β、HMGB1水平的影响

摘要 目的：探讨清热利湿化痰方对痰湿瘀热型2型糖尿病患者中医症候积分、血糖代谢及血清单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、白介素-1β（IL-1β）水平的影响。方法：收集恩施土家族苗族自治州州中心医院2018年05月~2021年05月期间接受治疗的104例2型糖尿病患者为研究对象,按抛硬币法随机分为观察组和对照组各52例。对照组以胰岛素强化治疗,观察组在对照组基础上增加清热利湿化痰方治疗。评估对比组间临床疗效、中医症候积分、血糖代谢、血清MCP-1、IL-1β、HMGB1指标及不良反应发生情况。结果：观察组总有效率为90.38%（47/52）,高于对照组总有效率73.08%（38/52）,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后两组患者中医症候积分均有降低,且观察组中医症候包括口苦咽干、神疲乏力、烦躁易怒、舌红苔黄等积分均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后两组患者各项血糖代谢指标水平均有降低,且观察组患者的血糖指标糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）水平均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后两组患者各项炎症因子水平均有降低,且观察组MCP-1、IL-1β、HMGB1水平均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗期间观察组和对照组的不良反应发生率分别为15.38%（8/52）、9.62%（5/52）,组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：清热利湿化痰方对痰湿瘀热型2型糖尿病有较好的治疗效果,能纠正患者的糖代谢紊乱状态,降低患者的不良中医症候程度,抑制MCP-1、IL-1β、HMGB1水平的表达,且不良反应发生率较低。     

直肠癌切除术患者永久性与临时性造口术后生活质量变化及其与排便症状的相关性研究

摘要 目的：探讨直肠癌切除术患者永久性与临时性造口术后生活质量变化,并分析其生活质量与排便症状的相关性。方法：纳入我院2017年4月～2020年4月收治的直肠癌切除术患者110例,所有纳入者均行造口术。根据造口方式,分成永久性造口组（简称永久组,n=41）、临时性造口组（简称临时组,n=69）。记录两组造口并发症发生率,分别在患者术后1、3、6个月,采用简明生活质量量表（SF-36）评估其生活质量,采用排便症状量表评估患者排便症状的变化。经Pearson线性相关分析患者生活质量评分与排便症状评分的相关性。结果：临时组造口并发症发生率（8.90%）与永久组（12.20%）比较无差异（P＞0.05）。两组术后3、6个月SF-36各维度评分均高于术后1个月,术后6个月各评分高于术后3个月,且临时组术后3个月SF-36各维度评分高于永久组（P＜0.05）,但两组术后6个月各评分比较无差异（P＞0.05）。两组术后3、6个月大便症状各评分均低于术后1个月,术后6个月的排便急迫感、排便费力、里急后重评分及总分低于术后3个月,且临时组术后3个月的排便急迫感、排便费力、里急后重评分及总分低于永久组（P＜0.05）,但两组术后6个月排便症状各评分比较未见差异（P＞0.05）。Pearson线性相关分析显示,排便症状总分与机体疼痛、躯体功能、躯体角色受限、情感角色受限、心理健康、社会功能、总体健康评分呈负相关（P＜0.05）。结论：直肠癌切除术患者临时性造口能够进一步促进术后3个月生活质量、排便功能的改善,在术后6个月,永久性造口患者的生活质量、排便功能基本达到临时性造口患者的状态,且排便功能与生活质量具有相关性。     

Bt几丁质酶的基础表达及诱导合成的多态现象

多数微生物可以产生几丁质酶。一般认为几丁质酶基因表达受几丁质的诱导和葡萄糖抑制。但是苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(简称Bt)几丁质酶的诱导表达方式是否与其他微生物相同,至今尚无定论。采用DNS法检测77株Bt在有或无诱导物培养基中的几丁质酶活力。研究了葡萄糖对4株不同表达类型菌株酶活力的影响,以及葡萄糖抑制与几丁质诱导之间的关系。研究发现在无几丁质诱导条件下,全部试验菌株都可以产生几丁质酶,保持一定量的基础表达,说明Bt能组成型合成几丁质酶,不需要诱导。添加诱导物之后,31株菌的酶活力没有任何变化,44株菌有不同程度的提高,但其中绝大部分诱导特性并不典型,酶活力提高不显著。许多Bt菌株几丁质酶表达兼具组成型和诱导型的特点。葡萄糖能够抑制几丁质的诱导作用,但是不能完全抑制Bt菌株几丁质酶的基础表达。比较组成型和诱导型菌株的几丁质酶基因chiA、chiB调节区域核苷酸序列,发现仅存在个别碱基的差异。     

术前合理管理对老年下肢骨折全麻手术患者血糖水平、血流动力学及应激因子的影响

摘要 目的：探讨术前合理管理对老年下肢骨折全麻手术患者血糖水平、血流动力学及应激因子的影响。方法：选择2017年6月-2019年6月我院收治的120例拟行全麻手术治疗的老年下肢骨折患者,随机分为两组。观察组（60例）给予术前合理管理,对照组（60例）给予传统术前管理。对比两组围术期血糖水平、血流动力学以及应激因子指标差异。结果：两组平均动脉压（MAP）、心输出量（CO）、体外循环阻力（SVR）、胸腔液体含量（TFC）、血糖、胰高血糖素、胰岛素、C肽、皮质醇 （Cor）、肾素（Rn）和促肾上腺皮质激素（ACTH）整体比较差异具有统计学意义（P＜0.05）,观察组麻醉后或术后各时点MAP、CO、TFC、胰岛素、C肽高于对照组,SVR、血糖、胰高血糖素、Cor、Rn、ACTH低于对照组（P＜0.05）。观察组术后首次排气时间、首次下床活动时间、术后住院时间短于对照组（P＜0.05）,口渴饥饿、术后感染发生率低于对照组（P＜0.05）。结论：术前合理管理可稳定老年下肢骨折全麻手术患者围术期血流动力学和血糖水平,降低应激因子水平和术后并发症风险,加快术后患者的康复。     

苏云金芽孢杆菌chiA,chiB全基因的克隆、表达及其序列分析

以苏云金芽孢杆菌科默尔亚种15A3菌株基因组DNA为模版,用touchdown PCR方法扩增几丁质酶ChiA和ChiB的全基因序列(GenBank登录号:EF103273和DQ512474)。将PCR产物连接pUCm-T克隆载体,获得重组质粒pUCm-chiA和pUCm-chiB,分别转化E.coliXL-Blue。克隆的几丁质酶基因可以利用本身的启动子异源表达各自的蛋白,不需要几丁质作为诱导物。表达的几丁质酶能够分泌到胞外。证明15A3菌株可组成型表达2种几丁质酶。经核苷酸及氨基酸序列分析证明,chiA基因全长1426bp,含有343bp的上游非编码区和1083bp的ORF,编码360个氨基酸。推测成熟蛋白分子量为36kD,只有一个几丁质酶催化域。chiB基因全长2279bp,含有248bp的上游非编码区和2031bp的ORF,编码676个氨基酸。推测成熟蛋白分子量约为70.6kD,具有三个功能域。核苷酸序列分析显示chiA和chiB的启动子所处的位置及转录起始碱基都不相同,-35区相同,而-10区有两个碱基不同,SD序列也不完全一致。