重组人胰激肽原酶在大肠杆菌中的表达

根据人胰激肽原酶的氨基酸序列,采用大肠杆菌偏爱密码子,设计合成目的基因片段约750 bp.将设计得到的片段连接到pET-22b(+)表达载体中并测序,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达.将IPTG诱导表达的菌体进行SDS-PAGE电泳,在相对分子质量24 kD处可明显观察到高表达带,主要以包涵体形式存在,质量分数可达21.6％,进一步测得蛋白活性为2.27 nmol/s.利用MALDI串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定蛋白,蛋白得分106,大于可信得分83(P ＜0.05),确定了蛋白一级结构的正确性.     

植物生殖生物学研究的一些进展

简介参与花粉与柱头相互识别的s位点编码产物、花药城毡层组织特异启动子的克隆及应用、花粉粒内基因表达、卵细胞高体显微操作和合于形成前后的基因表达五个方面的研究动态和进展。     

金特异性结合短肽介导的重组杆状病毒与胶体金构成的纳米复合体

纳米金在生物探针方面的应用技术是重要的研究方向,这一技术的关键在于纳米金与生物分子有效的结合,本文通过基因重组策略,研究杆状病毒表面展示技术与金特异结合肽介导的固定化方法联用以构建生物-无机复合材料的可行性.利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将合成的金特异结合肽基因融合到杆状病毒BmNPV囊膜糖蛋白gp64的N端...     

基因工程在β-内酰胺药物研制上的应用

本文综合国内外有关文献介绍了青酶素Ｇ酰化酶的改造,异青霉素Ｎ合成酶和头孢菌素Ｃ水解酶的克隆,以及细菌血红蛋白基因克隆进丝状真菌。比较了化学法和两步酶法转化ｃｐｃ（头孢菌素Ｃ）成７－ＡＣＡ的优缺点。还讨论了基因工程β－内酰胺抗生素研制的发展方向。     

放线菌与枯草芽孢杆菌的共培养及其对活性次生代谢产物的影响

为探讨共培养对放线菌产生活性次生代谢产物的影响,结合抗菌活性测定及HPLC-PDA分析,研究了22株放线菌的单培养及其与枯草芽孢杆菌的共培养发酵代谢产物的差异,并选取抗菌活性较强的链霉菌FXJ2.014进一步研究其代谢产物。发现FXJ2.014、FXJ1.296、AS4.1252三株菌与枯草芽孢杆菌共培养时产生其在相同条件下单培养时没有的物质,其中链霉菌FXJ2.014单培养时主要产生醌霉素A,共培养时产物中增加了醌霉素结构类似物FXJ2.014-HB。进一步的抗菌、抗肿瘤活性测定结果表明,两者的生物活性有较显著的差异,且FXJ2.014-HB对多种肿瘤细胞系的抑制活性普遍弱于高毒性的醌霉素A,为有潜力的细胞毒性较小的抗生素。共培养是一条很有希望的发掘放线菌活性次生代谢产物的新途径。     

原生质体技术在工业微生物育种中的应用

原生质体技术已成为工业微生物育种手段之一。本文着重于工业微生物原生质体制备,促融因子及重组体选择策略等进行较详细的讨论,最后提出了若干建议。     

7种方法提取质粒DNA用于序列分析的比较

对取自同一摇瓶内的菌体,采用7种不同提取质粒的方法分离DNA,将分离的DNA做电泳观察、紫外吸收及序列分析,结果表明CTAB法具有快速、方便、可行的特点。     

重组人胰激肽原酶复性工艺的研究

目的:研究重组人胰激肽原酶包涵体变性及复性的工艺。方法:对本实验室构建的重组人胰激肽原酶大肠杆菌进行IPTG诱导表达表达成功后,菌体经超声破碎释放包涵体,包涵体经洗涤、变性、稀释和尿素梯度凝胶过滤色谱这两种方法复性后(Sephadex-G75),通过测定酶活检验复性效果。结果:①重组人胰激肽原酶工程菌经过IPTG诱导后能够表达目的蛋白,目的蛋白以包涵体形式存在,将细胞破碎后,包涵体经过3次洗涤,纯度达到71.93%;②变性包涵体经24小时稀释复性后,蛋白浓度达到72.61μg/m L,酶的比活达到13.84 U/mg;③变性包涵体经过2个小时的尿素梯度凝胶过滤复性后,蛋白浓度可达到830.07μg/mL,酶的比活达到48.61 U/mg。结论:两种复性方法均可以使包涵体达到一定的浓度和比活,比较发现尿素梯度凝胶过滤色谱具有复性时间短和比活力高等优点,可作为重组人胰激肽原酶复性的一种有效的手段。     

重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定

建立尿素梯度凝胶过滤复性重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的方法。将诱导表达的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体通过初步纯化后变性,然后在尿素梯度凝胶过滤色谱柱Sephadex G-75中复性,洗脱流速0.4 mL/min,复性完毕后透析除去小分子复性剂,使用琼脂糖电泳法检验其有活性后,再用单向酶扩散法测定其酶活力为655.8 U/mg,复性得率为83.7%。最后通过LC-ESI-MS/MS从氨基酸序列组成上证明复性产物是重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。结果表明,建立的方法能成功用于复性变性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体蛋白,获得了可用于结构和功能研究的具有生物学活性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。     

植物tRNA新闻二则

由大肠杆菌和其他材料的研究结果得知,负责编码tRNA的基因,总是先转录为前体tRNA,然后切去头尾若干个核苷酸,加工出成熟tRNA分子,而且tRNA基因在细胞里具有中度重复顺序,不同种tRNA基因往往纵向成串排列;但没有发现过有内涵子(intron)。 1982年哈佛大学3位研究人员发现玉米叶绿体的tRNA_(UAA)~(Leu)基因中含有1个458个碱基