马铃薯立枯丝核菌拮抗菌QHZ11的实时荧光定量PCR快速检测与应用

【背景】植物根际促生菌(plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR)在根际的定殖是其发挥作用的基础,直观有效的跟踪技术和定量方法是研究PGPR在根际原位分布规律的重要工具。【目的】建立一种马铃薯黑痣病病原菌——立枯丝核菌拮抗菌QHZ11的实时荧光定量PCR快速检测体系,并检测拮抗菌QHZ11在马铃薯根际的动态变化。【方法】根据GenBank中登录的类芽孢杆菌及近源菌株gyrB基因序列差异筛选特异性引物,优化反应条件;通过盆栽试验对马铃薯根际拮抗菌进行快速检测。盆栽试验设3个处理,T1：对照(无菌水,CK);T2：QHZ11菌悬液灌土(QHZ11);T3：将功能菌在有机肥中进行二次固体发酵制成生物有机肥(BOF11)。【结果】筛选出拮抗菌QHZ11的专用引物为gyrB-F/gyrB-R;建立的拮抗菌QHZ11实时荧光定量PCR检测方法特异性好、灵敏度高且重复性较好,线性相关系数为0.999 8,检测组内变异系数均在1%以内,扩增效率为0.9,可检测出1×103?1×1010 copies/g-soil的拮抗菌,具有检出限低和扩增效率高的特点。盆栽试验结果发现,T3处理马铃薯根际拮抗菌QHZ11的数量从接种的第10天即高出T2处理一个数量级,并于马铃薯盛花期(接种后第60天)达到峰值,说明二次固体发酵增加了拮抗菌在根际土壤中的存活和繁殖。【结论】建立的实时荧光定量PCR快速检测体系灵敏、高效,可为研究拮抗菌在马铃薯根际原位分布以及与病原菌的互作方面提供便捷有效的方法。     

类芽孢杆菌QHZ11对马铃薯黑痣病的生防效果

[背景] 马铃薯黑痣病是由立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）引起的一种典型土传病害,目前该病害生物防治的菌种资源比较有限,相应菌株生防机制的研究更是缺乏。[目的] 明确马铃薯黑痣病病原菌立枯丝核菌（R. solani） JT18的拮抗菌QHZ11对马铃薯黑痣病的生防效果,揭示QHZ11对黑痣病的部分防治机理。[方法] 在灭菌土壤中分别接种R. solani JT18（CK）,R. solani JT18和普通有机肥（Organic Fertilized,OF）,R.solaniJT18和氨基酸有机肥（AA+OF）及R. solani JT18和QHZ11生物有机肥（BOF11）,结合实时荧光定量PCR （Real-Time Fluorescence Quantitative PCR,RT-qPCR）等方法,研究马铃薯全生育期不同处理R.solaniJT18在马铃薯根际和植株不同部位的数量变化及拮抗菌QHZ11与R.solaniJT18的数量消长规律,同时比较不同处理黑痣病的病情指数及相应的防效。[结果] RT-qPCR结果表明,随马铃薯生育进程的推进,马铃薯根际、根系和匍匐茎R.solaniJT18的数量在各处理中均呈现先升高至块茎膨大期到达峰值后下降的趋势,而且各部位R.solaniJT18的数量为CK>OF>AA+OF>BOF11且根际>根系>匍匐茎;拮抗菌QHZ11的数量变化趋势与R.solaniJT18相同,但峰值在块茎形成期,并且同时期同一部位QHZ11的定殖数量均显著高于R.solaniJT18,甚至高出2个数量级,说明QHZ11占用了一定的营养资源和生态位点,严重抑制了R.solaniJT18的生长和繁殖。病情结果表明：CK病情指数最高,OF、AA+OF和BOF11处理均显著低于CK,其中BOF11处理发病最轻;生防结果则相反,为BOF11>AA+OF>OF处理,说明普通有机肥、氨基酸有机肥及生物有机肥均可不同程度地防治马铃薯黑痣病,其中以生物有机肥效果最显著。[结论] QHZ11以有机肥为载体施入土壤后,可以通过在马铃薯根际及植株不同部位竞争营养和生态位点,从而有效抑制黑痣病病原菌R.solaniJT18的生存和繁殖,起到显著的生防效果,这对QHZ11生物有机肥的应用和推广具有重要意义,并为进一步研究QHZ11的生防机制奠定了基础。     

大豆皂甙抗癌活性研究进展

本文就大豆皂甙的抗癌活性研究进展进行概述,并对未来研究方向进行了展望.     

马铃薯根系分泌物及酚酸类物质对萎缩芽孢杆菌促生菌株QHZ3趋化成膜的介导作用

【背景】根系分泌物介导的微生物趋化成膜是根际促生菌在根际定殖及功能发挥的重要前提,深入了解该过程对理解菌株定殖机制具有重要意义。【目的】探明马铃薯根系分泌物中使萎缩芽孢杆菌促生菌株QHZ3在根际趋化成膜的信号物质。【方法】通过高效液相色谱鉴定马铃薯根系分泌物中的主要酚酸类物质,采用半固体平板法与类毛细管法比较马铃薯根系分泌物和不同酚酸类物质对促生菌株QHZ3趋化作用,并通过结晶紫染色法观察马铃薯根系分泌物和不同酚酸类物质对菌株QHZ3生物膜形成的影响。【结果】马铃薯根系分泌物中的酚酸类物质主要包括富马酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸和肉桂酸。半固体平板法结果显示,马铃薯根系分泌物和4种酚酸对菌株QHZ3均具有趋化作用,富马酸的趋化作用最强;类毛细管定量试验结果表明,不同浓度酚酸对菌株QHZ3的趋化作用不同,中高等浓度的富马酸(25-100μmol/L)和低浓度的阿魏酸(10μmol/L)对菌株QHZ3的趋化作用最强;结晶紫染色法结果表明,120-240μg/mL马铃薯根系分泌物和50-75μmol/L富马酸及100μmol/L对羟基苯甲酸可显著促进菌株QHZ3生物膜的形成,而阿魏酸和肉桂酸对菌株的生物膜形成没有显著影响。【结论】根系分泌物和酚酸均可介导菌株QHZ3在马铃薯根际趋化成膜,但4种酚酸的作用不同,富马酸和阿魏酸对菌株的趋化作用显著,富马酸和对羟基苯甲酸则是对菌株生物膜的形成具有显著影响。     

类芽孢杆菌QHZ11-gfp在马铃薯植株上的定殖特征及促生效果

[背景] 生防菌在作物根系的有效定殖是其功能发挥的前提,而直观的跟踪技术和有效的定量方法是研究生防菌根系分布规律的重要工具。[目的] 研究马铃薯黑痣病病原菌立枯丝核菌（Rhizo ctonia solani） JT18的拮抗菌QHZ11在马铃薯植株上的定殖特征及对马铃薯的促生效果。[方法] 采用绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein,GFP）对QHZ11进行标记,将标记菌株菌悬液、生物有机肥和无菌水分别接种至灭菌土壤,通过激光共聚焦显微技术和实时荧光定量PCR等方法观察和测定标记菌株在马铃薯植株不同部位的定殖特征、数量变化及对马铃薯的促生效果。[结果] pHAPII质粒成功导入QHZ11并可稳定遗传40代,记为QHZ11-gfp;菌株标记前后的菌落形态、生长曲线和对R.solani JT18的拮抗能力等基本一致。从第7天开始,相继在马铃薯芽上和根上发现了绿色荧光,说明QHZ11-gfp成功定殖到了马铃薯的芽、根等部位。QHZ11-gfp在根系和匍匐茎的定殖数量均呈现先升高至块茎形成期达到峰值后下降的趋势,并且在整个生育期根系的定殖数量始终大于匍匐茎。菌悬液和生物有机肥处理均显著促进了马铃薯根系的生长,并通过增加株高等农艺性状提高了块茎产量。其中,生物有机肥处理在各部位的荧光强度、定殖数量和对马铃薯的促生效果均显著优于菌悬液。[结论] QHZ11-gfp可在马铃薯植株上成功定殖并对马铃薯有良好的促生效果,将其制成生物有机肥促进了其定殖,使促生效果也更好。     

贝那普利、替米沙坦单用与联用治疗早期糖尿病肾病对比研究

目的：研究贝那普利、替米沙坦单用与联用治疗早期糖尿病肾病的疗效。方法：选择早期糖尿病肾病患者作为研究对象,随机分为给予贝纳普利的A组、替米沙坦的B组、两药联合使用的C组,检测治疗后肾功能相关指标Ccr、Cyc、Hcy以及尿蛋白,评价生活质量、活动状态及负面情绪。结果：C组患者的Ccr、QLQ-C评分、KPS评分明显高于A、B两组,外周血Cys C、Hcy、24 h尿蛋白、HAMA评分、HAMD评分明显低于A、B两组。结论：贝那普利与替米沙坦联用能够发挥协同作用,更加有效的改善肾脏功能,具有积极的临床意义。     

皮胆红素百分位曲线图结合相关风险因素预测新生儿高胆红素血症的临床价值

摘要 目的：评价新生儿出生后72 h经皮胆红素（TcB）百分位曲线图结合临床相关风险因素，预测新生儿高胆红素血症的发生情况。方法：选择2018年1月-2019年12月在安徽理工大学第一附属医院出生的晚期早产儿和足月儿，使用经皮黄疸仪监测其黄疸值，绘制TcB百分位列线图，以新生儿出生后72 h内末次TcB值对应的风险区结合致病风险因素预测新生儿高胆红素血症发生的价值。结果：3818例新生儿出生后72 h后高危区人数为278例（7.28%）。TcB数值在4 h到48 h内上升最快，峰值出现在出生后84 h-120 h，P40、P75及P95峰值分别为193.75 μmol/L，224.75 μmol/L和282.25 μmol/L，其中P95峰值出现最晚。新生儿出生后0-48 h内共计有244例TcB值处于高危险区，其中92例在72 h后仍处高危区，预测灵敏度为29.97%，特异度为95.67%；49-72 h内共计有269例新生儿TcB值处于高危区，其中116例新生儿在72 h后TcB值仍处高危区，灵敏度为36.48%，特异度为95.62%。多因素Logistic回归分析显示，相关致病危险因素有：胎龄、住院时间、分娩方式、胎膜早破及喂养方式（P<0.05）。72 h内TcB危险区的受试者工作特征（ROC）曲线下面积为0.75（95%CI:0.56-0.93），结合相关风险因素的ROC曲线下面积为0.93（95%CI:0.81-1.00），预测价值明显提高。结论：TcB百分位曲线图结合"高危因素"预测新生儿高胆红素血症准确性较高，操作简便，具有较好的临床价值。