芽孢杆菌蛋白质分泌工程

无论真核生物还是原核生物,每个细胞都至少能合成上千种蛋白质(酶)。作为理想的生物工程菌,应能把这些蛋白质(酶)的大部分分泌到细胞外。芽孢菌是重要的工业生产用菌,遗传背景也较清楚。芽孢菌细胞表层比大肠菌简单,蛋白质易于向胞外分泌。芽     

乳酸菌及其生长因子对人畜健康的作用

乳酸菌是自古以来就被人类作为食品微生物利用的一大类菌,只是近30年来由于厌氧菌培养技术的日益发展,才引起了微生物学家、营养学家、病理学家、免疫学家、微生态学家等的关注和重视。     

空间条件对乳酸菌遗传学及生物学特性的影响

目的：了解空间条件对微生物的影响。方法：LG-1菌株经“92106”科学返回式卫星搭载7天,返回地面后,检测其变化。结果：搭载返回的LG-1菌株死亡数高于对照菌100倍以上,但存活的菌株,有一个明显延长的生存期。筛选出2株乳糖、半乳糖发酵缺陷株,32%的菌株失去了一个分子量为3.0道尔顿大小的质粒,但未发现它与任何表型有关。结论：空间条件对微生物的遗传和生物学性状有一定的作用。     

枯草芽孢杆菌基因片段的琼脂糖凝胶电泳分离I．色氨酸C基因片段的分离

限制性核酸内切酶EcoRl酶切枯草芽孢杆菌(Bactllus subtlis) SR 22的 DNA,用琼脂糖凝胶电泳分离了色氨酸C基因(trpC)的片段,位于凝肢柱的10—11厘米处。冷冻挤压回收该段的DNA,荧电光分光光度计直接测定回收液中DNA的含量。电泳后比电泳前trpC 转化活性提高了37.7倍。这一段DNA的平均分子量为5.1×106,trpC片段的纯度为9.3％。     

芽孢杆菌原生质体作为质粒DNA转化的受体

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) B3F 7658,短小芽孢杆菌(B. pumilus) AS 1.940,巨大芽孢杆菌(B．Megaterium) AS 1.941,和多粘芽孢杆菌(B. polymyxa) AS 1.878等菌株,既不能作为染色体DNA的转化受体,也不能作为质粒DNA的转化受体。用不同量的溶菌酶处理这些菌株形成原生质体,然后加pUB110质粒DNA,经聚乙二醇6000(PEG)诱导,在含新霉素(400μg／ml)的DM-3再生培养基上恢复细胞壁,培养48小时后,转化子数为1.0 x 103一4.6×105／μg DNA。若同时用PEG和Ca2+ 离子诱导,转化子数可提高2—3倍。质粒pUBll0用EcoRI酶切后,转化子数大大下降(2.0×102转化子／μg DNA)。Eco RI酶切后,用T4连接酶连成环状,转化子数有所增加(1．7×103转化子／μg DNA)。     

枯草杆菌－大肠杆菌多功能穿梭载体的构建

由枯草杆菌载体pUBllO和大肠杆菌载体pGEM3构建了两个新的多功能穿梭载体pBE2和pBE3,它们具有强启动子和多酶切位点区。这两个载体能在枯草杆菌和大肠杆菌中复制和表达,是比较理想的载体。