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1.
特异小干扰RNA敲除PLK1基因的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
为研究特异小干扰RNA(siRNA)作用于大肠癌细胞株SW480中PLK1 (Polo-like kinase 1)基因表达的mRNA对该细胞分裂生长的影响,设计了对应于PLK1基因表达mRNA不同位点的10种特异siRNA,经化学合成后,用脂质体转染SW480细胞,实时定量PCR检测PLK1基因的表达,观察不同的siRNA作用强度,并计数细胞了解相应细胞的生长情况,western-blot观察PLK1表达蛋白的变化和流式细胞计数分析细胞周期改变。发现10种siRNA均可敲除PLK1基因表达的20 %以上,其中P1、P4和P9 3组敲除mRNA达80 %以上,这3种siRNA及其混合物对PLK1基因mRNA的作用具有相应浓度效应,在25 nmol/L时达到最佳作用效果,而且相同浓度的混合物作用效果更好(超过95%),PLK1表达蛋白质明显降低,细胞周期在G2期受到阻碍。72 h后的各种siRNA浓度下细胞生长变化与PLK1基因的mRNA水平变化相一致。结果表明化学合成的特异siRNA对SW480细胞中PLK1基因表达具有消除作用,混合物作用更强,在细胞水平上抑制了SW480细胞的分裂生长。  相似文献   
2.
microRNAs(miRNAs)在参与癌症发生、发展过程中起着十分重要的作用.目前,miR-92b在结直肠癌中的作用及相关机制还未见报道.本研究探讨了miR-92b在结直肠癌发生发展中的功能及潜在机制.采用RT-qPCR方法发现,miR-92b在人结直肠癌临床样本中与癌旁组织相比显著高表达.通过结肠癌细胞株SW620稳转细胞及裸鼠皮下成瘤模型,发现过表达miR-92b可以显著促进细胞增殖及体内肿瘤生长.同时还发现miR-92b可以分泌形式存在于胞外及外周血中,提示miR-92b是一个具有分泌特性的microRNA. 在分子机理方面,c-MYC可通过调节miR-92b的启动子活性从而促进后者转录,并且c-MYC在结直肠癌组织样本中也存在高表达.进一步,通过在线预测、报告质粒活性检测及蛋白质印迹技术证实FBXW7是一个新的miR-92b靶基因.由于FBXW7已报道为c-MYC泛素降解过程中的关键泛素化连接酶之一,本研究结果提示结直肠癌中c-MYC、miR-92b及FBXW7三者间可能存在分子调节环路.综上所述,本研究为miR-92b在结直肠癌中的功能及机制提供了新的视角,并为miR-92b在结直肠癌早期诊断中的应用提供了新的参考.  相似文献   
3.
透明质酸介导的细胞游走受体(receptor for hyaluronan—mediated motility,RHAMM)是继CIM4之后发现的,分布于细胞膜表面、细胞浆以及细胞核,参与细胞分裂周期的调节、细胞的生长增殖、细胞迁移运动、细胞骨架的组装以及维持中心体和纺锤体极的结构的完整性,与细胞恶性转化、肿瘤浸润和转移等生物学行为密切相关;并且已作为一些肿瘤的肿瘤相关抗原,确定了其抗原表位,成为肿瘤免疫治疗的靶点;在一些肿瘤组织内的表达水平升高和呈现一定的表达模式,与肿瘤临床分级以及肿瘤预后有一定的相关性。  相似文献   
4.
为明确幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A(CagA)在致病过程中对宿主细胞蛋白质表达的影响及其与CagA磷酸化的相关性,分别用野生型cagA质粒和磷酸化位点突变型cagA质粒转染人胃腺癌上皮AGS细胞,应用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术,分析细胞蛋白质组的改变。结果表明,在可捕获的400多个蛋白质中,野生型CagA可使AGS细胞质荷比为4229、4714、4728、5129、6546、6657、8162、9084、13803、14021的10个蛋白质表达上调,质荷比为2013、4286、8563、9952、11085、11645的6个蛋白质表达下调。突变型CagA只能使质荷比为4714、4728、6546和6657的蛋白质表达上调。这些结果提示,这16个差异表达蛋白质可能参与了CagA的致病过程,其中质荷比为4714、4728、6546和6657蛋白质表达的改变与CagA的磷酸化作用无关,而其余12个蛋白质表达的改变则都依赖于CagAEPIYA重复序列酪氨酸位点的磷酸化。这些发现为进一步探讨CagA的致病机制提供了实验依据。  相似文献   
5.
选择性雌激素受体调节剂耐药受体机制研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
在乳腺癌内分泌治疗中,SERM耐药或治疗失效病例的进一步治疗为临床一大问题,近年来的研究发现雌激素受体蛋白的变异,以及受体激活过程中各种辅助蛋白的结构与功能异常,都可能是SERM耐药的重要机制,现将SERM耐药受体机制的研究进展作一综述。为临床SERM耐药病例的治疗或SERM耐药的逆转研究提供帮助。  相似文献   
6.
药用植物栝楼的组织培养及其表达蛋白的分析   总被引:14,自引:0,他引:14  
对栝楼的快速繁殖、愈伤组织的诱导与再分化,以及不同培养体系中天花粉蛋白的表达进行了初步研究。结果表明:栝楼茎切段的腋芽和顶芽在MS+0.5、1.0mg/L 6-BA培养基上可以快速繁殖;组织培养苗的叶片切块在MS+4.0mg/L 6-BA +0.2mg/L IAA的培养基上可形成愈伤组织,该愈伤组织在30d后再分化为绿苗,绿苗分化率为0.25苗/外植体;绿苗转移至MS+0.1mg/L NAA的培养基可100%生根;生根苗移栽至土壤中100%成活;移栽成活的栝楼在30d后长出小块根,并检测到天花粉蛋白的表达。  相似文献   
7.
GST-HAI-1融合蛋白的表达及抗人HAI-1单克隆抗体的制备   总被引:4,自引:0,他引:4  
制备抗人肝细胞生长因子激活物抑制因子(HAI-1)单克隆抗体,为对HAI-1进行进一步的研究打下基础。将人HAI-1 cDNA分段克隆,构建GST-HAI-1融合蛋白原核表达载体,转化大肠杆菌后加IPTG诱导融合蛋白表达,经制备型SDS-PAGE法分离表达的GST-HAI-1融合蛋白,通过割胶、电洗脱回收融合蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备产生抗人HAI-1单克隆抗体的杂交瘤,以ELISA、Western blot和免疫组织化学染色进行鉴定。最终获得抗人HAI-1单克隆抗体杂交瘤细胞株ZMC6,产生的单克隆抗体可特异性地与表达的GST-HAI-1融合蛋白反应,并可识别大肠组织中的膜型及脱落型HAI-1蛋白。该单克隆抗体的制备成功,为深入研究HAI-1的功能提供了有力工具。  相似文献   
8.
应用表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术和CM10蛋白质芯片从大肠黏液腺癌和非黏液腺癌患者中成功地筛选出了大肠黏液腺癌患者血清特异性相关蛋白.应用美国CipherGen公司CM10蛋白质芯片和PBSⅡ型蛋白质芯片阅读仪检测53例大肠癌患者(黏液腺癌12例,非黏液腺癌41例)患者血清蛋白质指纹图谱.采用ZUCI-Protein Chip Data Analyze System分析软件包进行分析,离散小波去噪音,结合支持向量机筛选肿瘤标志物,建立大肠黏液腺癌的术前诊断模型.12例大肠黏液腺癌患者与41例大肠非黏液腺癌患者的血清蛋白质有12个蛋白质峰强度有显著差异.其中质荷比为24 297和23 434 m/z处的蛋白质峰强度统计学P值分别为0.0067和0.0092,差异有极显著统计学意义.支持向量机筛选出24 297、3 322、3 822和4 353 m/z蛋白质峰作为生物标志物进行检测和预测准确率,其中12例大肠黏液腺癌患者中有10例患者被正确识别,41例大肠癌非黏液腺癌患者中有39例被正确识别,准确率为92.45%(49/53).该方法可以较好地应用于区别大肠黏液腺癌和非黏液腺癌,进行术前病理鉴别,指导进行大肠黏液腺癌的手术和综合治疗.  相似文献   
9.
细胞外基质包括基底膜和间隙基质 ,主要由胶原、糖蛋白和蛋白多糖等一些物质组成 ,具有维持细胞组织形态的作用 ,是细胞间相互作用的重要场所 .在肿瘤细胞的浸润和转移过程中 ,必须有细胞外基质的降解过程 ,研究发现多种蛋白酶与该过程有关 ,包括丝氨酸蛋白酶家族中的纤维蛋白溶酶原和纤维蛋白溶酶系统 ,金属蛋白酶系统中的MMP 2和MMP 9,组织蛋白酶B ,组织蛋白酶D ,以及透明质酸酶 ,胶原酶等[1] .Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶 (TypeⅡtransmembraneserineprotease ,TTSP)ST14具有降解细胞外基质的能力 ,并能激活uPA前体及HGF SF前体 ,参与…  相似文献   
10.
【目的】测定草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda 3个信息素结合蛋白(pheromone binding protein, PBP)(SfruPBP)对草地贪夜蛾及同域近缘种劳氏粘虫Leucania loreyi性信息素及腺体组分的结合特性,探究草地贪夜蛾这3个SfruPBPs在两种昆虫不同性信息素组分识别中的作用。【方法】以pET-30a(+)为载体分别构建草地贪夜蛾3个SfruPBPs的原核表达质粒,导入大肠杆菌Escherichia coli并培养至OD600=0.6~0.8后,加入IPTG进行这3个SfruPBPs的诱导表达,采用Ni-NTA琼脂糖磁珠进行蛋白纯化;利用荧光竞争结合实验测定这3个SfruPBPs与草地贪夜蛾和劳氏粘虫的共14种性信息素和腺体组分的结合特性。【结果】原核表达获得SfruPBP1-3重组蛋白,进一步纯化后电泳检测得到单一且预期大小的目的蛋白。荧光竞争结合实验测定发现,在草地贪夜蛾和劳氏粘虫已报道的总计14种性信息素和腺体组分中,SfruPBP1对这两种害虫的性信息素主组分Z9-14∶Ac特异性强结合,Ki=0.80 μmol/L;SfruPBP2结合谱较广,除对性信息素次要组分Z7-12∶Ac及腺体组分12∶Ac, E7-12∶Ac和Z10-14∶Ac强结合(Ki<1.00 μmol/L)外,还对性信息素主组分Z9-14∶Ac及腺体组分Z9-12∶Ac和11-12∶Ac具中等结合能力(1.00 μmol/L相似文献   
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