复方五倍子有效成分的分离鉴定及抑菌活性研究

对渔用抗菌剂复方五倍子有效成分进行薄层色谱与柱层析分离检测,以鉴定出复方中的各种有效成分;选用几种水产动物常见致病菌进行体外抑菌和联合用药试验,以确定各有效成分抑菌活性强弱和各成分间的药物关系,为分析复方五倍子抗菌剂的药物作用机理奠定理论基础,并为其质量控制提供参考依据。用薄层析硅胶GF254制板,以苯:乙醇:甲酸(7:3:1)为展开剂,用氨熏-三氯化铁显色,日光下观察层析结果;通过干法装硅柱,以苯:乙醇:甲酸(7:3:1)作为洗脱液进行洗脱,分离得到各单体,参照理化性质分析及薄层分析,鉴定出复方五倍子抗菌剂总有效成分。结果表明;复方五倍子抗菌剂有效成分为鞣质、没食子酸、槲皮素、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄素和1,8-二羟基蒽醌,其中没食子酸含量最大,紫外分光光度法测定为10.47%。用复方的各有效成分别对温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、迟缓爱德华菌和柱状黄杆菌进行抑菌试验,以温和气单胞菌为菌种将复方主要有效成分两两配对进行体外联合抑菌试验,得出复方五倍子各有效成分抑菌活性顺序为:没食子酸>蒽醌(含1,8-二羟基蒽醌、大黄素、芦荟大黄素)>黄芩苷>槲皮素>鞣质。没食子酸和蒽醌具有协同作用,没食子酸和黄芩苷、没食子酸和槲皮素、蒽醌和黄芩苷三组同属于累加作用。       

基于mtDNA Cyt b序列分析齐口裂腹鱼群体遗传多样性

研究测定了长江上游4个齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)野生群体(重庆巫溪、重庆城口、四川雅安、四川阿坝)共104个个体的线粒体Cyt b基因部分序列, 以探讨齐口裂腹鱼野生群体的遗传多样性和遗传结构。结果表明: 在104个个体Cyt b序列中共检测到43个多态性位点, 25个单倍型。4个齐口裂腹鱼群体的单倍型多样性介于0.704—0.884, 核苷酸多样性介于0.007—0.012。群体间Kimura双参数遗传距离介于0.008—0.017, 其中四川雅安群体与四川阿坝群体间遗传距离最近, 基因交流频繁。重庆城口群体与四川雅安群体间遗传距离最远, 基因交流受阻。AMOVA分析表明, 齐口裂腹鱼的遗传分化主要来自群体内部, 且组群间、组群内群体间和群体内存在显著的遗传分化。中性检验得到Tajima’s D和 Fu’s F_s的值不显著, 且歧点分布图呈多峰, 表明长江上游4个齐口裂腹鱼野生群体未经历过种群扩张。研究旨为齐口裂腹鱼野生资源保护提供必要参考意见, 同时为齐口裂腹鱼种质资源合理开发和利用提供理论依据。     

宽叶血心兰的组织培养与快速繁殖

植物名称　宽叶血心兰 (Ａｌｔｅｒａｎｔｈｅｒａｒｅｉｎｅｃｋｉｉ)。2　材料类别　带 1个茎的节。3　培养条件　芽苗诱导培养基 :( 1 )ＭＳ 6 ＢＡ0 .5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 0 .1 ,( 2 )ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5 ＮＡＡ 0 .3,( 3)ＭＳ 6 ＢＡ 1 .0 ＮＡＡ0 .1 ,( 4 )ＭＳ 6 ＢＡ 1 .0 ＮＡＡ 0 .3,( 5 )ＭＳ 6 ＢＡ1 .5 ＮＡＡ 0 .1 ,( 6)ＭＳ 6 ＢＡ 1 .5 ＮＡＡ 0 .3;壮苗培养基为 :( 7)ＭＳ ＮＡＡ 0 .5 ,( 8)ＭＳ ＮＡＡ1 .0 ,( 9)ＭＳ ＮＡＡ 1 .5 ,( 1 0 )ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5 ＮＡＡ 0 .5 ,( 1 1 )ＭＳ…     

双须骨舌鱼卵黄蛋白原基因vtg的克隆、组织表达和原核表达分析

为探究双须骨舌鱼(Osteoglossum bicirrhosum)卵黄蛋白原vtg基因的结构和表达特征,本研究运用RACE技术克隆双须骨舌鱼vtg全长c DNA序列。序列分析发现,双须骨舌鱼vtg的c DNA全长为5 325 bp,开放阅读框(ORF)为5 121 bp,其5′和3′非编码区(UTR)分别为46 bp和159 bp,共编码1 706个氨基酸,预测蛋白质分子量约为186.79 ku。同源性分析发现,双须骨舌鱼与同科的美丽仆骨舌鱼(Scleropages formosus)相似度达到84.78%,与鲤形目、鲈形目、鲱形目、鲽形目鱼类的相似度均高于50%。系统进化树分析结果显示,本文获得的双须骨舌鱼vtg基因与骨舌鱼目聚为一类,与鳗鲡目硬骨鱼类亲缘关系较近,与双须骨舌鱼进化地位相符。荧光定量PCR检测结果表明,在雌雄鱼性腺和肝中vtg均有表达,且在雌鱼肝中的相对表达量显著高雄鱼(P0.05),卵巢和精巢表达量无显著差异(P0.05);在雌雄鱼鳃、脾、肾、肌肉、心、头肾、脑等7个组织中均极微量表达,且无显著差异(P0.05)。在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期卵巢中vtg相对表达量依次增加,Ⅳ期显著高于Ⅱ和Ⅲ期(P0.05),也显著高于精巢Ⅳ期(P0.05);在雌鱼肝组织中呈先增后减趋势,且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期之间无显著差异(P0.05),但每个时期都显著高于雄性(P0.05)。成功构建了原核表达载体p EASY-Blunt E2-vtg,并转入Transetta(DE3)表达感受态细胞中成功诱导出融合蛋白。Western-blotting检测显示,融合蛋白可被抗His标签特异性识别。综上表明,vtg表达水平高低与性别相关,并与性腺发育程度有关。此外,本研究结果也为后续深入研究卵黄蛋白原的生理功能打下基础。     

铜鱼和圆口铜鱼的DNA含量

有关鱼类细胞核DNA含量的研究,国外有较多的报道,国内自八十年代初陆续开展了这方面的工作,并通过测量DNA含量来探讨鱼类种群关系〔2〕、倍性关系〔1〕和杂交育种等。现采用血涂片,Feulgen染色,显微吸收光度法对长江中的铜鱼Coreius heterodon和圆口铜鱼Coreius guichenoti的红细胞核DNA含量进行了初步测定。1材料与方法材料于1989年5月取自长江上游的四川省泸州市,每种鱼各取5尾。1.1制片用肝素作抗凝剂,用注射器从鱼尾静脉取血,涂布于洁净载玻片的一端,用公鸡血细胞作对照标准,即从公鸡腋静脉取血,涂布于该载玻片上的另一端。涂片空…     

饲料蛋白质和能量水平对齐口裂腹鱼生长、体组成和蛋白质利用的影响

齐口裂腹鱼（Schizothorax prenanti Tchang）隶属鲤科、裂腹鱼亚科,俗称“雅鱼”,为长江上游重要经济鱼类,也是川西高原特有的冷水性鱼类。其肉质细嫩,味道鲜美,是名贵野生经济鱼类。近年来由于过度捕捞、环境污染等因素的影响,齐口裂腹鱼种群数量不断下降,分布区域日趋缩小,而随着人们生活水平的不断提高,对齐口裂腹鱼等名优水产品的需求却在不断增加。为保护和持续利用这一野生动物资源,     

华鲮鳃表面形态结构扫描电镜观察

应用扫描电镜对华鲮Sinilabeor rendahli鳃耙、鳃弓、鳃丝和鳃小片的形态结构进行了观察.鳃耙和鳃弓表面凹凸不平,分布着大量丘突.鳃丝和鳃耙表面有大量粘液细胞分布,鳃丝上皮细胞表面密布微嵴,氯细胞附着在鳃丝表面和鳃小片侧表面.鳃小片薄、表面凹凸不平,垂直排列在鳃丝上.鳃丝和鳃小片的表面形态结构特征有助于提高鱼鳃的气体交换效率.     

华鲮受精早期的电镜观察

采用扫描和透射电镜观察了华鲮(Sinilabeo rendahli)成熟卵子、精子的形态特征和精子入卵的过程。结果显示:华鲮成熟卵子直径1.2 mm左右,仅有一个受精孔,卵膜表面有大量的不规则褶皱,精孔器表面平整;成熟精子全长约30μm,头部圆形无顶体;授精1 s精子大量附着于精孔器周围,仅有一个精子进入卵中,授精30~60 s受精孔内形成“受精栓”,精子开始溶解,卵膜逐渐隆起,褶皱消失。     

橘色双冠丽鱼体色相关基因mc1r的组织表达分析

黑素皮质素受体1基因(mc1r)是动物体色形成的关键调控因子,为探讨mc1r基因在橘色双冠丽鱼(Amphilophus citrinellus)体色褪黑过程中的调控作用,本研究利用cDNA末端快速克隆(RACE)技术首次获得橘色双冠丽鱼mc1r的cDNA全序列,并利用荧光定量PCR分析了橘色双冠丽鱼体色变化不同时期和不同组织中mc1r基因的表达差异。获得cDNA全长序列1 699 bp,共编码氨基酸325个,开放阅读框(ORF)为978 bp,5′非编码区(UTR)497 bp,3′非编码区(UTR)224 bp。氨基酸序列和系统发育分析表明,橘色双冠丽鱼与人(Homo sapiens)、斑马鱼(Danion rerio)、大黄鱼(Larimichthys crocea)和尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)相似度分别为55.1%、77.1%、90.15%和96.92%。荧光定量PCR结果表明,mc1r在橘色双冠丽鱼胚胎发育9个时期均有不同程度的表达,且随着胚胎发育表达量逐渐减少,推测在胚胎发育的早期阶段该基因的基础表达水平即可启动参与体色细胞形成的腺苷酸循环。在"黑色-灰白色-黄色"三个体色蜕变期,mc1r在尾鳍、鳞片、皮肤的表达均呈先降低再稍升高的变化趋势,均在灰白色过渡期呈现最低值,推测这与mc1r和Agouti存在竞争性结合,及mc1r、tyr、tyr1三者是否处于适当、平衡状态有关。橘色双冠丽鱼长至近成鱼期,非正常褪黑鱼(即未完全褪黑)各组织mc1r表达量均比正常褪黑鱼(完全褪黑)高,其中皮肤组织的相对表达量显著高于正常褪黑鱼(P 0.05),可见鱼体体表褪黑程度与mc1r表达量呈负相关。在成熟鱼体11个组织中mc1r均有不同程度的表达,其中,鳞片显著高于其他组织(P 0.05),说明橘色双冠丽鱼mc1r的主要表达部位是鳞片。本研究通过了解体色变异相关基因表达特征,为鱼类体色遗传和体色改良研究积累资料。     

甲基睾酮对孔雀鱼,玛丽鱼性逆转的试验

孔鱼（PoeciliareticulatusPeters）、玛丽鱼（MollienesialatipnnaLeSueur）是世界上颇受欢迎的淡水热带观赏鱼。两种鱼均为卵胎生,雄鱼都比雌鱼体色更为艳丽,背鳍、尾鳍更大且美丽,从而具有更大的观赏价值。因此全雄鱼的生产具有较大的经济意义。应用性激素诱导鱼类性逆转