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目的:探讨结直肠癌(CRC)细胞上清外泌体对肝星状细胞(HSC)细胞的影响。方法:通过超高速离心结合过滤法提取和纯化CRC细胞上清外泌体,然后以透射电电子显微镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)和蛋白免疫印迹(WB)实验鉴定所提取的外泌体的形态、大小、粒径分布,以及外泌体表面标志蛋白HSP90和TSG101。再通过激光共聚焦显微镜(LSCM)观察荧光标记的外泌体被HSC细胞摄取的情况。以WB实验验证CRC细胞上清外泌体处理后的HSC中成纤维细胞活化蛋白(FAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结果:TEM显示结直肠癌细胞外泌体呈"茶托样"杯型或类圆形囊泡样结构;NTA分析发现结直肠癌细胞外泌体直径峰值和大小分布范围分别为57 nm和30-150 nm;WB显示外泌体表面标志蛋白HSP90和TSG101均为阳性。LSCM观察发现Di O标记的外泌体(绿色),能够被Dil标记的HSC(红色)摄取。CRC细胞上清外泌体处理后的HSC中FAP和α-SMA表达水平较对照组显著升高。结论:HSC与CRC细胞上清外泌体共孵育后能够被激活成癌相关成纤维细胞。 相似文献
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目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)SNHG4在结直肠癌(CRC)中的表达以及对细胞奥沙利铂耐药性的影响。方法:采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测24例CRC组织及其邻近癌旁组织中LncRNA SNHG4的表达水平,并用费希尔精确检验(Fisher's exact test)分析LncRNA SNHG4表达水平与CRC患者临床病理特征相关性。体外培养HCT116细胞,将HCT116细胞分为sh-SNHG4组(敲减组)、sh-NC组(阴性对照组),qRT-PCR法检测各组HCT116细胞中LncRNA SNHG4表达水平,CCK8法检测两组细胞经梯度浓度(1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L)奥沙利铂(L-OHP)处理24小时后细胞增殖能力变化情况。EdU和免疫荧光(Immunofluorescence,IF)实验检测两组细胞经10μmol/L的L-OHP处理24小时后,细胞增殖能力以及核DNA损伤情况。结果:CRC癌组织中LncRNA SNHG4相对表达水平与癌旁组织相比明显升高(P<0.05),其表达水平与CRC患者淋巴结转移、TNM分期、脉管侵犯显著相关(P<0.05)。与sh-NC组相比,sh-SNHG4组在梯度浓度的L-OHP处理下,相对细胞活性下降更加明显(P<0.05)。在10μmol/L的L-OHP处理条件下,sh-SNHG4组相比sh-NC组,细胞增殖能力减弱(P<0.05),核DNA损伤情况更严重(P<0.05)。结论:LncRNA SNHG4在CRC组织中高表达,敲减LncRNA SNHG4可以减弱HCT116细胞对L-OHP耐药性。 相似文献
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