严重急性呼吸综合征冠状病毒2膜蛋白对宿主细胞pre-mRNA 3"UTR加工的影响

目的 研究严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）膜蛋白对宿主细胞mRNA前体（pre-mRNA）3"非翻译区（UTR）加工的影响。方法 本研究以人肺上皮细胞系A549为模型，利用瞬时转染在细胞内过表达SARS-CoV-2膜蛋白；利用RNA-Seq测序技术及生物信息学分析方法，系统性描绘宿主细胞选择性多聚腺苷酸化（alternative polyadenylation，APA）事件；Metascape数据库对发生显著APA变化的基因进行功能富集分析；RT-qPCR验证靶基因3"UTR长度变化；蛋白质免疫印迹（Western blot）检测目的蛋白表达水平。结果 SARS-CoV-2膜蛋白外源表达后宿主细胞内共813个基因发生显著APA变化。GO和KEGG分析显示，差异APA基因广泛参与有丝分裂细胞周期、调节细胞应激等生物过程，涉及病毒感染和蛋白质加工等。从中进一步筛选出AKT1基因，在IGV软件中显示3"UTR延长；RT-qPCR验证AKT1基因的3"UTR长度变化趋势；Western blot结果显示AKT1蛋白磷酸化水平增加。结论 SARS-CoV-2膜蛋白潜在影响宿主pre-mRNA的3"UTR加工，其中参与多种病毒性生物过程的AKT1基因 3"UTR延长，且其编码的蛋白质功能在细胞内被激活。     

凯特杏花粉的离体培养及影响因子分析

采用离体培养法,在不同培养基组分含量、pH值、温度及植物生长调节物质的培养条件下,对凯特杏(Prunus armeniacaL.cv Katy)花粉的离体萌发和花粉管生长状况进行观察研究。结果表明:(1)凯特杏花粉离体萌发及花粉管生长的适宜培养基为20%蔗糖 0.04%硼酸 0.01?Cl2,最适pH为6.0,最适温度为20℃,培养20 h后,花粉的萌发率达68.76%,花粉管长度达1 083.53μm。(2)不同植物生长调节物质对花粉萌发和花粉管生长作用不同,赤霉素浓度为5~8 mg/L、矮壮素浓度为10~150 mg/L、多效唑浓度为5~10 mg/L时对凯特杏花粉萌发和花粉管生长都有促进作用,但国光丁酰肼对凯特杏花粉萌发和花粉管生长均有抑制作用。     

介绍一个半微量单向混合白细胞培养方法

人类混合白细胞的反应，主要受控于组织 相容性复合体HLA中的D区基因^[3]o D区基 因产物在器官移植中起重要作用，并直接参与 T淋巴细胞的激活和免疫调节^[6]。运用同位素 掺人技术作混合白细胞培养（MLC）比培养后 作形态计数，能更有效地以淋巴细胞的增殖强 度来判别这些基因产物的个体差异。目前国外 所采用的微量技术需要配备半自动细胞收集器 及其它微量设备^[4]，国内一时还难以普遍运用。 为此我们采用国产塑料小管，以常规技术发展 了一个相应的半微量单向混合白细胞培养方 法，发现利用最适条件并作倾斜培养使细胞充 分接触，能够提高实验系统的分辨力，从而有可 能缩短培养时间，以利尽快检测出不同遗传背 景个体间反应性的差异。     

便携多路环境数据采集系统

便携多路环境数据采集系统姜仕仁，常杰，葛滢（杭州大学生物科学与技术系，３１００１２）ＡＰｏｒｔａｂｌｅＭｕｌｔｉ－ＰａｓｓａｇｅＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＤａｔａＡｕｔｏ－ＳａｍｐｌｉｎｇＳｙｓｔｅｍ．￥ＪｉａｎｇＳｈｉｒｅｎ；ＣｈａｎｇＪｉｅ；Ｇｅ...     

基于飞行质谱分析技术对小鼠肠道菌群蛋白组分分析的初步探讨

目的应用飞行质谱分析技术对小鼠肠道菌群蛋白组分进行分析,探讨肠道菌群定性、定量和蛋白组学分析方法。方法实验分为抗生素干预组与正常对照组。抗生素干预组小鼠用400 mg/ml头孢曲松钠灌服,每次0.2 ml,每日2次,间隔6 h,连续8 d。收集2组小鼠盲肠内容物菌群细胞,采用飞行质谱分析技术进行肠道菌群蛋白组分分析,采用传统培养法对2组优势菌群进行定量分析。结果抗生素干预组的肠道菌群菌细胞的有效蛋白峰出峰的数量与正常对照组比对差异有统计学意义,2组小鼠的肠道菌群蛋白成分有明显的不同。抗生素干预组的肠道优势菌群数量显著低于正常对照组。结论应用飞行质谱分析技术可以快速明显区分抗生素干预小鼠与正常小鼠的肠道菌群,对肠道菌群研究和临床合理应用抗生素具有指导意义。     

基于显微图像的牛蛙肠系膜微循环观察

在动物活体上进行微循环观察是微循环研究的主要手段,肠系膜是脏器微循环的良好观察部位。通过医学图像分析系统可直接观察、录像、测量并记录正常状态下牛蛙肠系膜微血管的口径及开放数量、血流流态与流速、血流量等指标,并可观察滴加药物后上述指标发生的变化,探讨微循环的功能状态及药物等因素对微循环的影响。     

赏鲸 人与自然的双赢之路

自然和生物多样性对人类还有着一种非常的美学影响。峰峦起伏的轮廓、灿烂漫天的晚霞、一条鲸鱼沿海岸边疾掠而过让人感受到的那股生机……对大多数人而言,任何形式的美学体验都能引起他们一种强烈的感情共鸣,激发起强烈的愉悦感,甚至会对自然界的壮丽生出畏惧。S·R·凯勒特(美国当代学者)     

白藜芦醇抑制嗜水气单胞菌毒力作用研究

为探索白藜芦醇(Resveratrol, Res)在水产动物细菌病防控中的应用价值, 实验以淡水养殖中重要的细菌病原嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)为研究对象, 通过设置药物浓度梯度, 检测其对嗜水气单胞菌生长、生物膜形成和溶血活性的抑制作用, 和对毒力及群感调控系统相关基因表达的影响; 同时通过人工感染异育银鲫(Carassius auratus gibelio)试验检测其对鱼体保护作用和对鱼体炎症相关因子基因表达的影响。结果显示: 白藜芦醇对嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)>1024 μg/mL; 浓度低于64 μg/mL时, 对菌株生长影响不显著; 浓度≥32 μg/mL时, 对病原菌株生物膜形成和溶血活性具有显著抑制作用(P<0.05), 且随剂量增加而增强。荧光定量RT-PCR结果分析发现白藜芦醇能引起嗜水气单胞菌群感调控系统中luxR和luxS基因分别显著上调和下调表达; 外膜蛋白基因omp表达显著下降。人工感染试验发现攻毒前两小时腹腔注射25、50和100 mg/kg白藜芦醇处理组的异育银鲫死亡率显著下降, 鱼体炎症相关的肿瘤坏死因子(TNF-α)和Ⅱ型干扰素(IFN-γ)的mRNA表达量也显著下降。研究表明药用植物大黄、虎杖等所含白藜芦醇成分能有效抑制嗜水气单胞菌毒力, 降低鱼体炎症反应的功效; 腹腔注射25—100 mg/kg白藜芦醇对感染病原菌的异育银鲫有一定保护作用。     

产妇阴道微生物群变化与早产风险相关性研究

目的探讨产妇阴道微生物群与早产风险的相关性。方法选取2017年6月-2018年6月在大连市妇幼保健院产科出生并在新生儿科住院治疗的早产孕妇133例作为早产组。在早产孕妇分娩后42 d收集产妇阴道分泌物,通过实时荧光定量PCR法检测样本菌群数量。同时,选取同期生产足月新生儿的孕妇130例为足月组。结果早产孕妇阴道菌群中,普雷沃菌、吲哚嗜胨菌和阴道加德纳菌的数量要明显高于足月生产孕妇,乳杆菌数量低于足月生产孕妇。相关性检验显示,早产组中普雷沃菌、吲哚嗜胨菌、阴道加德纳菌的阳性数要明显大于足月组,具有明显的相关性(均P0.05);早产组中乳杆菌的阳性数要明显小于足月组,具有明显的相关性(P0.05)。结论阴道菌群失调与早产存在相关性。     

TNFalph 和 IL-1bet 靶点抗炎药物筛选细胞模型的构建

目的:构建两个高表达人TNFα和IL-1β细胞系,建立抗炎药物筛选细胞模型。方法:运用PCR的方法从载体pCMVSport-TNFα和p CMVSport-IL1β上扩增目的基因,以亚克隆方法将目的基因分别插入真核表达载体pcDNA3.1和pFLAG-CMV中,用单酶切、PCR扩增和基因测序的方法鉴定重组效果,然后将重组成功的质粒转入HEK293细胞系内,挑选能够稳定表达并遗传的单克隆细胞株,用蛋白免疫印迹(Western blot)法分析其表达效果。结果:三种鉴定方法均显示重组质粒构建成功。Western blot结果显示,细胞株T3、T4均能较高表达炎症因子TNF-α;细胞株I2、I3、I5均能较高表达炎症因子IL-1β。结论:成功构建了TNFα和IL-1β靶标的药物筛选细胞模型,为筛选具有抗炎作用的中药提供了一个新平台。