三氧化二砷对人胃腺癌细胞株SGC-7901细胞核及线粒体作用的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As203)对人胃腺癌细胞株SGC-7901的生物效应及其对线粒体和半胱氨酸蛋白酶家族-3(caspase-3)的作用.方法:通过MTT比色实验检测不同浓度As2O3对该细胞株的生长抑制作用;经Hoechst 33258染色后用荧光显微镜观察细胞核的形态变化;经过细胞线粒体膜电位检测区分凋亡细胞与正常细胞,并经流式细胞仪分析;caspase-3吸光度检测法测定As2O3组caspase-3的活化程度.结果:As2O3明显抑制SGC-7901人胃腺癌细胞的生长,抑制作用的强度呈时间依赖性(方差分析,P<0.01);Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞核固缩碎裂边集呈强蓝色荧光;线粒体膜电位检测法,流式细胞仪检测法,caspase-3吸光度检测法均检测到胃腺癌细胞的凋亡.结论:As2O3破坏线粒体跨膜电位和激活caspase-3活性可能是As2O3诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的重要机制.     

miRNA-383对急性胰腺炎腺泡细胞自噬的影响作用

目的:检测转染mi RNA-383的急性胰腺炎细胞模型中自噬标志蛋白LC3及Beclin1的表达情况,研究mi RNA-383对急性胰腺炎腺泡细胞自噬功能的影响作用。方法:在前期工作中利用生物信息技术筛选出在急性胰腺炎中表达下调的mi RNA-383。培养AR42J细胞,转染mi RNA-383类似物、抑制物以及阴性对照。使用牛磺胆酸钠盐以浓度200μM刺激细胞20 min制造急性胰腺炎细胞模型,使用BZi PAR检测胰酶激活程度证明此造模方法成功后,以此条件在转染完成后刺激AR42J细胞制造急性胰腺炎细胞模型。牛磺胆酸钠盐以浓度200μM刺激细胞20 min后提取细胞蛋白,利用western blot技术检测各组自噬标志蛋白Beclin1的表达情况及LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值的变化。结果:急性胰腺炎细胞模型造模成功,western blot技术检测mi RNA-383抑制物转染组AR42J细胞自噬标志蛋白Beclin1表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的值上调(P0.05),mi RNA-383类似物转染组细胞Beclin1表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的值下调(P0.05)。结论:mi RNA-383可以降低急性胰腺炎时细胞自噬水平,下调mi RNA-383的表达可以提高急性胰腺炎时细胞自噬水平。     

沉默MAPK1对牛磺胆酸钠诱导的胰腺腺泡细胞内胰蛋白酶原的细胞内激活及自噬流的影响

目的:探讨沉默丝裂素活化蛋白激酶(MAPK1)对牛磺胆酸钠诱导的胰腺腺泡细胞内胰蛋白酶原激活及自噬流的影响。方法:选择体外培养的AR42J细胞分为AR42J细胞+空白对照组,AR42J细胞+牛磺胆酸钠(TLC)(200μM的TLC作用40 min),AR42J细胞+RNA1(MAPK1)。分别转染MAPK1 si RNA以及阴性对照,采用BZi PAR、流式细胞术及激光共聚焦显微镜检测胰蛋白酶原激活,western blot技术检测各组自噬相关蛋白LC3、Beclin1、Cathepsin L,组织蛋白酶L(Cathepsin L,CTSL,也称为CTSL1)和溶酶体膜蛋白(Lysosomal associated membrane protein 2,LAMP2)。结果:TLC处理AR42J细胞后,胰蛋白酶原激活显著增加(阳性细胞相对比:15.12%±1.46%vs.7.82%±1.86%,P0.05,平均荧光强度:7.65±0.72 vs.3.76±0.57,P0.05),MAPK1 si RNA转染后TLC处理AR42J细胞后细胞内胰蛋白酶原激活则较TLC组明显降低(阳性细胞相对比:9.25%±1.16%vs.15.12%±1.46%,P0.05,平均荧光强度:4.31±0.27 vs.7.65±0.72,P0.05)。TLC组Beclin1与LC3表达显著性高于对照组(Beclin1:2.237±0.097 vs.1.103±0.057,P0.05。LC3:1.908±0.039 vs.0.973±0.081,P0.05),TLC+MAPK1si RNA组Beclin1与LC3的表达显著低于TLC组(Beclin1:1.214±0.049 vs.2.237±0.097,P0.05。LC3:1.315±0.037 vs.1.908±0.039,P0.05);而TLC组LAMP2及CTSL1表达较对照组显著下调(LAMP2:0.462±0.025 vs.1.009±0.039,P0.05。CTSL1:0.563±0.028 vs.1.135±0.041,P0.05),TLC+MAPK1si RNA组LAMP2及CTSL1表达显著高于TLC组(LAMP2:1.007±0.019 vs.0.462±0.025,P0.05。CTSL1:0.921±0.030 vs.0.563±0.028,P0.05)。结论:沉默MAPK1对TLC诱导的AR42J细胞中的胰蛋白酶原激活具有抑制作用,可能通过抑制MAPK1通路抑制自噬发生,同时使LAMP2及CTSL1的表达增强,自噬溶酶体的功能正常,自噬过程顺利进行,从而抑制胰蛋白酶原的激活,减轻急性胰腺炎。     

面向精准医学时代的胆总管结石影像学及内镜诊断

胆总管结石是胆道外科一种常见病、多发病。随着"精准医学"时代的到来,因人因病而异的胆总管结石精准诊断及精准的个体化治疗意义重大。影像医学作为胆总管结石精准治疗的"导航"手段,其检查方法种类多样且各种方法有着各自的优点及局限性,对于满足精准治疗需要有特殊的要求。因此,本文对胆总管结石的各种影像学及内镜检查方法的优点及局限性进行综述并提出精准医学时代影像学诊断策略,以期能为胆总管结石精准诊断的提供一定的参考。     

自噬在胰腺炎中的研究及进展

自噬是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性降解途径,作为细胞生存的一种机制,在很多生理过程如清除损伤、衰老细胞器以及冗余蛋白上发挥重要作用。自噬在人类胰腺炎的研究最早由Helin等人早在1980年提出,随着不断深入研究,发现自噬在胰腺炎发生发展过程中起主导作用。急性胰腺炎是一种发病率和死亡率极高的疾病,目前表明这种疾病始于胰腺腺泡细胞,主要诊断指标为高淀粉酶血症,胰腺腺泡细胞内消化酶的激活、液泡的大量堆积和炎症因子的聚集,最终胰腺炎症细胞侵润及引起的全身炎症反应导致腺泡细胞的凋亡和坏死,在其发病机制和治疗方面仍需进一步研究探讨。本文综述近年最新研究成果,深入探讨自噬在胰腺炎中的研究及进展。