基于多尺度协同的长沙市生态网络构建与层级优化

城市化背景下人类与自然环境的矛盾呈现出多尺度、层级化特征，而传统生态网络的构建方式较少考虑不同尺度下生态要素的关系，无法从区域落实到中心城区，难以形成系统性的解决方案。研究在综合梳理各尺度生态网络构建方法的基础上，以长沙市为例，基于形态学空间格局分析（Morphological Spatial Pattern Analysis，MSPA）、景观连通性原理和生态斑块重要性评价识别生态源地，并通过多层级生态阻力面的确定，综合运用最小费用路径（Least-cost path method，LCP）、电路理论、层级传导理论、尺度嵌套等方法对市域、都市区、中心城区的生态网络进行了协同构建和层级优化，最后基于不同尺度生态网络的特点应用并落实到多层级的国土空间规划体系中。研究结果表明：（1）长沙市域生态网络和都市区生态网络具有较好的层级嵌套特征；共识别两尺度生态叠合源地14个、生态叠合廊道15条，主要通过中心城区内的湘江、浏阳河和捞刀河部分河段与外围生态绿圈相衔接，形成"外环内楔"的空间格局。（2）确定市域重要廊道、市域潜在廊道、生态叠合廊道、都市区重要廊道、都市区潜在廊道的核心保护面积共501.14 km²，并提取位于生态廊道核心保护区范围内的生态夹点和生态障碍点，以进一步落实生态保护修复策略。（3）得到具有重要生态连通功能的中心城区生态绿道长度441.2 km，生态修复单元56个，并结合生态阻力值划分为5级进行针对性修复。（4）基于不同尺度生态网络的衔接、嵌套，最终构建"市域总体生态安全格局-都市区城市生态空间发展格局-以城市绿道为基础的中心城区生态修复单元"，并与不同层级的国土空间规划体系相对应。研究结果将为以大城市为中心的跨尺度生态系统修复和生态安全格局构建提供科学参考。     

基于易错PCR技术的短小芽孢杆菌YZ02脂肪酶基因BpL的定向进化

利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究, 分别获得最佳突变株BpL1-7和BpL2-1369, 其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍。序列分析表明, 突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变: T61C/C147T/A334G/T371A, 其中有3个碱基突变导致了氨基酸的改变。通过SWISS-MODEL数据库模拟脂肪酶的结构显示, 3个突变氨基酸分别位于第1个a螺旋的第3个氨基酸、第4和第5个b折叠之间的转角以及第5个b折叠的第1个氨基酸位置。将野生型脂肪酶基因BpL和进化后的基因BpL2-1369的高效表达产物经Ni-Agarose柱和Sephadex-G75纯化后, 酶学性质测定表明: 突变脂肪酶的比活力比野生型脂肪酶提高了1.31倍, Km值由8.24 mmol/L降低至7.17 mmol/L; 在pH>8.0时的稳定性较野生型脂肪酶有所提高。     

兰州大尾羊MAPK13基因cDNA克隆及生物信息学分析

克隆兰州大尾羊促分裂素原活化蛋白激酶MAPK13基因,并分析其序列及其编码蛋白的生物学特性,为研究绵羊MAPK13基因的功能和生产应用提供参考。根据绵羊MAPK13基因CDS序列设计特异引物,利用RACE和RT-PCR技术克隆获得兰州大尾羊MAPK13基因全长序列,并结合生物信息学方法分析其生物学特性。克隆获得兰州大尾羊MAPK13基因cDNA序列全长1 397 bp,其CDS区片段长1 102 bp,编码367个氨基酸。预测兰州大尾羊MAPK13蛋白分子量为42.29 kD,理论等电点为8.82,为非跨膜的疏水性蛋白,亚细胞定位主要在细胞质中,无信号肽,不属于分泌蛋白。预测其氨基酸序列有19个磷酸化位点,3个糖基化位点,3个磷酸化功能结构域,4个其他结构域,1个LCR片段,二级结构以α-螺旋为主。同源性分析显示兰州大尾羊MAPK13基因序列与已发布的绵羊MAPK13 mRNA序列(登录号:NM_001139455.1)相比,其第852位发生碱基转换(CA),导致编码蛋白第265位氨基酸发生碱基转换(ST),同时,第951位发生碱基转换(TG),但其所编码氨基酸不变。构建的基因进化树分析结果显示兰州大尾羊与牛亲缘关系最近。兰州大尾羊与其他物种MAPK13基因在结构上相似性较高,说明该基因具有高度的保守性,其序列包含的S_TKc结构域可将ATP的γ磷酰基转移到蛋白质丝氨酸/苏氨酸残基上,导致一系列肥胖相关基因的功能失调和表达变化,为进一步研究MAPK13基因与成脂分化过程的相关性提供了参考。     

非洛地平缓释片对轻中度原发性高血压患者的降压疗效和对脉搏波速度的影响，

目的：探讨非洛地平缓释片对轻中度原发性高血压患者的降压疗效和对脉搏波速度的影响。方法：根据纳入标准选取我院260例原发性高血压患者,按计划方案给予非洛地平缓释片口服治疗。观察患者入院后、治疗2周末、14周末降压疗效及脉搏波传导速度的改变情况,并进行对比分析。结果：本组研究中接受治疗研究者共260例,其所有受检者在治疗2、6、10、14周后血压水平均有不同程度改善,与基线比较差异明显,有统计学意义（P〈0,01）。脉搏波变化分析所有受试者脉搏波速度变化分析,基线脉搏波速度为（10．9±2．4）m／s,经过治疗后2周、14周基线脉搏波速度为（10．3±2．1）m／s,差异明显具有统计学意义（P〈0．01）;心率变化分析表明非洛地平缓释片在降压同时对心率影响不大,安全性评价表示,接受治疗期间曾有68例发生不良事件,占总数26．2％。笔者认为与药物无关,且均为轻度,经过适当处理后均缓解,对本研究无影响。结论：非洛地平缓释片降压效果良好,可同时降低颈动脉．股动脉脉搏波传导速度,改善大动脉僵硬度。     

单用超声、CT及联合应用诊断甲状腺肿块的效果分析

目的:探讨超声、CT检查及两者联合应用对甲状腺肿块的诊断,以提高甲状腺肿块的诊断准确率.方法:回顾性搜集213例甲状腺肿块患者的临床、超声资料,及其中的127例患者CT资料,并分析各自的临床、超声和CT表现特点,并将相关的超声、CT与手术病理对照比较.结果:超声、CT在诊断良、恶性肿块在结节数目差异无统计学意义(P＞0.05);在钙化、包膜侵犯、边界、病灶形态等差异具有显著性(P＜0.05).甲状腺肿块的超声诊断符合率与CT比较,差异无统计学意义(P＞0.05);联合诊断符合率明显高于超声、CT单项诊断符合率(P＜0.05).联合诊断肿块的定性能力优于超声、CT单项检查(P＜0.05).结论:超声和CT均能较好的诊断甲状腺肿块病变,两者联合应用,可提高甲状腺肿块的诊断准确率.     

雌激素对大鼠肾上腺皮质中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

利用免疫组织化学SP法检测摘除卵巢及补充17β-雌二醇后大鼠肾上腺皮质各层Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果表明,摘除卵巢后肾上腺皮质束状带和网状带Bcl-2和Bax表达都增加;球状带中Bax表达增加,而Bcl-2表达阴性。补充17β-雌二醇后,束状带和网状带中Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax在束状带中表达极显著降低,而在网状带中没有阳性产物;在球状带中Bcl-2表达上升,而Bax表达下降。表明雌激素在肾上腺皮质各层发挥着复杂的作用。     

藏山羊与藏绵羊肺组织结构的对比研究

为了探讨藏山羊（Capra hircus）与藏绵羊（Ovis aries）在高原低氧环境中肺组织结构的差异,采用Gomori醛品红染色及H.E染色对藏山羊和藏绵羊肺组织进行对比研究。结果表明,藏山羊与藏绵羊肺被膜厚度无显著差异（P > 0.05）,但肺被膜中弹力纤维藏山羊显著多于藏绵羊（P < 0.05）。肺泡面积藏山羊与藏绵羊无显著差异（P > 0.05）,但肺泡隔宽度和肺泡隔中毛细血管的数量藏山羊显著高于藏绵羊（P < 0.05）。肺细支气管黏膜皱襞厚度藏山羊与藏绵羊无显著差异（P > 0.05）,但细支气管平滑肌厚度藏山羊显著高于藏绵羊,细支气管黏膜上皮1 mm2中杯状细胞数量藏山羊显著高于藏绵羊（P < 0.05）。外径小于100 μm的肺微动脉中,藏山羊血管平滑肌占外径百分比显著高于藏绵羊（P < 0.05）,而当外径大于100 μm时,两者间差异不显著（P > 0.05）。     

酶的定向进化策略

定向进化技术已成为改造酶分子的一种有效策略,是在体外模拟自然进化进程,通过随机突变和（或）体外重组产生基因的多样性．再经筛选（或选择）获得所需性能大幅提高的酶。该文介绍近几年来酶定向进化技术研究的最新进展以及一些成功实例。     

HLAMatchmaker软件分析Eplets的配型在临床肾移植配型中的应用

目的：评估基于Eplets错配的HLAMatchmaker软件的方法在临床肾脏移植的应用。方法：针对239例肾移植供受者甩A—Ⅰ、Ⅱ抗原的血清学和基因型,比较传统的HLA六抗原配型标准、交叉反应组配型标准和基于HLA Matchmaker软件Eplets配型三种方法优劣关系。结果：239例供受者用三种方法得出错配数,按照高中低错配分组,结果显示HLAMatchmaker软件配型方法能明显增加低错配组别中的人数22．6％（54）,相比较于HIA配型的7．9％（19）和CREGs配型的13．4％（32）,三种方法之间有统计学意义（P〈0．01）;此外对三种方法所得的错配数两两比较也显示出统计学差异（P〈0．01）。结论：采用基于Eplets的HLAMachmaker软件配型进行供受者配型的方法,是一种更高效省时高灵敏度的同种异体肾移植的配型方案。     

同时检测人多瘤病毒和巨细胞病毒PCR技术的建立及在肾移植受者中的初步应用

建立同时检测人多瘤病毒(BKV)和巨细胞病毒(CMV)载量的实时定量荧光PCR技术(FQ-PCR),并探讨其在肾移植术后感染监测中的应用。选择BKV和CMV核酸保守性序列作为靶基因,PCR扩增靶片段与质粒pcD-NA3.1(+)连接。通过测序技术对进行克隆筛选。提取质粒并采用10倍梯度稀释(5×103～107拷贝/mL)作为BKV和CMV核酸序列的标准品,并评价其灵敏度;采用对比正常人DNA、BKV阳性质控和CMV阳性质控评价其特异性;通过对标准品DNA分别进行批内和批间各20次重复实验,以其循环阈值(Ct)的变异系数(CV)评价其精密度。对480例肾移植受者外周血样本,进行FQ-PCR检测BKV和CMV DNA拷贝数,检测FK506血药浓度,并对两者进行相关性分析。重组质粒经测序检测显示含有靶BKV和CMV核酸序列。所建立的FQ-PCR方法,其最低检测下限均为5.0×103拷贝/mL的DNA标准品。正常人DNA的BKV和CMV拷贝数检测为阴性,而阳性对照能够发现荧光值显著变化,证实为针对靶DNA的特异性扩增;重复性检测显示批内差异分别为3.44%(BKV)和2.23%(CMV),批间差异分别为4.98%(BKV)和3.76%(CMV)。肾移植患者CMV感染的阳性率为27.08%(130/480),明显高于BKV的阳性率(13.33%,64/480,P<0.05),并且感染程度与免疫抑制剂FK506用量呈正相关。建立的同时检测BKV和CMV两种病毒载量的FQ-PCR方法具有快速、重复性好、灵敏的优点,可为临床监测肾移植术后病毒感染提供技术平台。