分泌型重组铜绿假单胞菌外毒素A基因工程菌的发酵研究

铜绿假单胞菌外毒素A(P .aeruginosaExotoxinA ,PEA)是该菌最重要的致病、致死性物质。目前对PEA已经进行了深入的理论研究 ,PEA的结构、生物学活性以及医学应用前景都已比较明确 ,从而推动了PEA的生产和纯化研究。PEA在天然情况下产量极低 ,通常每毫升培养物中PEA的产量在纳克水平以下。大量制备高纯度PEA的工作有赖于高效表达性工程菌株的建立。本研究将构建好的 pMAL PEA原核分泌型表达载体转化大肠杆菌BL2 1,利用摇瓶发酵研究PEA工程菌的最优表达条件 ,摇瓶发酵的最优培养条件为 :温度 30℃ ,摇床转速16 0r/min ,在含 0 …     

铜绿假单胞菌外毒素A基因表达的研究进展

外毒素A(PEA)是铜绿假单胞菌最主要的一种毒力因子,它具有ADP-核糖基化转移酶活性,通过对延伸因子-2(eEF-2)的ADP-核糖基化抑制细胞的的蛋白质合成而导致细胞死亡。PEA由613个氨基酸组成,分子量66kD;其编码结构基因toxA位于细菌染色体上,为单一顺反子。本文着重综述近年来对PEA的基因表达及表达调控的研究进展,为利用基因工程手段获得高纯度PEA的工作理清一条思路。     

全国大学生生命科学竞赛数据分析与展望

全国大学生生命科学竞赛至今已举办三届,赛事组织好、规模大、参与度高,对促进生命科学教育与研究具有重要作用。文中简述全国大学生生命科学竞赛的模式与现状,并基于前三届竞赛数据分地区分年度统计分析报名数据和竞赛成绩,同时结合生命科学领域的新变化新认识进行展望,以更好地推动赛事发展。     

噬菌体PaP3末端酶大亚单位的克隆表达

末端酶 (terminase)是双链DNA病毒包装过程中 ,将病毒基因组多串联体 (concatemer)与病毒前衣壳连接 ,切割并转移单拷贝基因组进行前衣壳 (procapsid)的异源寡聚体 ,由一个大亚单位及 1～ 7个小亚单位组成。大亚单位具有ATP酶和核酸酶活性 ,在全酶活性中起到重要的作用。由我室分离并完成测序的绿脓杆菌噬菌体PaP3(GeneBank序列号 :AY0 78382 )为双链DNA病毒 ,其中4 0 6 93 4 2 14 1基因编码末端酶大亚单位。本研究采用PCR技术从噬菌体PaP3基因组中扩增出编码噬菌体PaP3末端酶大亚单位的目标片段 ,将目标片段插入原核表达载体 pQE…     

利用废水液体发酵生产单细胞蛋白的实验研究

利用工厂废水或动物血制作培养基,以液体发酵方式培养产朊假丝酵母NCTC3576菌及甘饲8501菌.离心分离菌体,测定菌体生物生长量,并观察蔗糖、温度、酸碱度、发酵时间、种子液接种量对生物生长量的影响.生化方法分析NCTC3576菌单细胞蛋白的品质,氨基酸分析仪分析单细胞蛋白的氨基酸组成.结果表明,玉米淀粉厂废水,不必调pH,不用添加其它任何组分,即可直接用于液体发酵产朊假丝酵母NCTC3576菌;pH4.0～7.0均对生长量无明显影响;24h培养已达到最好生长量,再延长时间已不能提高产量;28℃及37℃培养无明显差别,在3%～17%种子液接种量范围内,接种量与生长量有正相关关系.研究表明,玉米淀粉厂废水单一成分即可用于液体发酵产朊假丝酵母NCTC3576菌,原料成本低,且易于产品分离纯化和工业化生产中的连续培养,是单细胞蛋白生产的良好途径.     

国际基因工程机器大赛在中国

合成生物学是一门新兴的交叉学科,为培养合成生物学后备人才,国际基因工程机器(iGEM)大赛应运而生。2007年中国首次有5支队伍参加iGEM大赛,至今已经有11年的历史。然而,目前尚无全面总结中国iGEM队伍的相关文献。文中全面梳理和总结了iGEM大赛在中国的发展历程,包括参赛队伍的数量、地理分布、竞赛成绩、中国iGEM社群CCiC的发展情况,以及iGEM大赛对中国高等教育的促进和借鉴作用,并深度思考了iGEM大赛在中国的发展前景,提出了发展建议。随着我国高等教育"双一流"战略的实施,iGEM大赛在我国的发展具有光明的前景,可为培养新一代科学家作出更大的贡献。     

细菌生物被膜的耐药机制及控制策略

在特定的条件下,细菌可以形成生物被膜,包被有生物被膜的细菌称为被膜菌.被膜菌无论其形态结构、生理生化特性、致病性还是对环境因子的敏感性等都与浮游细菌有显著的不同,尤其对抗生素和宿主免疫系统具有很强的抵抗力,从而导致严重的临床问题,引起许多慢性和难治性感染疾病的反复发作.细菌生物被膜粘附在各种医疗器械及导管上极难清除,以至引发大量的医源性感染.近年来,随着人们对细菌致病机制认识的逐步深入,控制细菌生物被膜的方法已有较大发展.本文拟探讨被膜菌的耐药机制并着重综述细菌生物被膜控制方法的最新研究进展.     

重组人肽抗生素hPAB—β及其突变体的活性测定与筛选

从人体基因组中克隆了一个编码肽抗生素样的基因。按基因编码产物的氨基酸序列 ,化学合成目的产物 ,药物敏感测定法证实产物具有杀菌活性后 ,又用基因工程法人工表达了目的产物。测定表达的重组人肽抗生素hPAB β及其突变体的抗菌活性 ,筛选理想的活性分子。方法是应用平板法和最小抑菌浓度 (MinimumInhibitionConceng tration ,MIC)测定法检测重组表达的hPAB β及突变体hPAB β38,hPAB β34对 8株实验室保存菌株及 10株临床分离菌株的杀菌能力 ,并以化学合成的肽抗生素hPAB β作对照 ;根据各目的分子抗菌能力的强弱 ,筛选理想的目…     

人源肽抗生素hBD—2表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

为了构建人源肽抗生素hBD－2的表达质粒燕在大肠杆中表达,将化学合成的hBD-2全基因原核融合蛋白靛质粒pinpointXa-3的多克隆位 构建成表达质粒,按常规方法转化大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子并诱导融合蛋白的表达,结果经酶切鉴定获得7个阳性克隆,序列分析表明其中4个克隆的插入序列与hBD-2基因完全一致,另3个克隆插入序列的39位由C突变为5T,89 多了一个Go,正确的阳性克隆子在大肠杆菌中产生了约18kD的特异性诱导蛋白,hBD-2的成功表达为进一步研究hBD-2的抗菌活性,抗菌机理打下了一定的基础。     

野生小家鼠与实验小白鼠杂交世代的血红蛋白电泳分析

两种基因型不同的亲本之间的杂交试验是遗传学家和育种工作者熟悉的手段。杂种优势通常在高度近交系间的杂交子代中是常见的,也是育种学家赖以培养新品种的依据。 实验小白鼠(Mus musculus albino)是从野生小家鼠(Mus musculus)培育而来的。Klein(1975)和Moriwaki等(1979)认为现在广泛应用的实验小白鼠很可能来源于中国和日本的小家鼠。但是这2种近亲系小鼠的杂交试验至今未见报道。