c-MYC调节的miRNA-92b在结直肠癌发生发展中的功能及机制探究

microRNAs(miRNAs)在参与癌症发生、发展过程中起着十分重要的作用．目前,miR-92b在结直肠癌中的作用及相关机制还未见报道．本研究探讨了miR-92b在结直肠癌发生发展中的功能及潜在机制．采用RT-qPCR方法发现,miR-92b在人结直肠癌临床样本中与癌旁组织相比显著高表达．通过结肠癌细胞株SW620稳转细胞及裸鼠皮下成瘤模型,发现过表达miR-92b可以显著促进细胞增殖及体内肿瘤生长．同时还发现miR-92b可以分泌形式存在于胞外及外周血中,提示miR-92b是一个具有分泌特性的microRNA． 在分子机理方面,c-MYC可通过调节miR-92b的启动子活性从而促进后者转录,并且c-MYC在结直肠癌组织样本中也存在高表达．进一步,通过在线预测、报告质粒活性检测及蛋白质印迹技术证实FBXW7是一个新的miR-92b靶基因．由于FBXW7已报道为c-MYC泛素降解过程中的关键泛素化连接酶之一,本研究结果提示结直肠癌中c-MYC、miR-92b及FBXW7三者间可能存在分子调节环路．综上所述,本研究为miR-92b在结直肠癌中的功能及机制提供了新的视角,并为miR-92b在结直肠癌早期诊断中的应用提供了新的参考．     

三种连接子多肽对抗癌融合蛋白翻译后剪切效果比较研究

IL-24和Smac为靶向癌症的多基因治疗研究中重要的候选基因.在构建IL-24和Smac双基因表达载体过程中,选择一个稳定高效的连接子非常关键.利用三个不同的连接子多肽序列IETD、EEED、F2A构建三个真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IL-24-IETD-Smac、pcDNA3.1(+)-IL-24-EEED-Smac、pcDNA3.1(+)-IL-24-F2A-Smac,并联合5-氟尿嘧啶(5-FU)处理研究各连接子介导的融合蛋白剪切效果.上述实验结果表明,在三种IL-24-linker-Smac双基因表达载体中,F2A连接子剪切效果最佳且与caspase活性成正相关.IETD、EEED连接子介导的融合蛋白都有一定的剪切,但IETD/EEED多肽影响了上游IL-24蛋白的半衰期,加速了剪切后IL-24蛋白的泛素化降解.本研究为构建靶向癌症应用的双基因或多基因载体提供了设计参考.     

携带mK5基因的重组腺病毒联合多西他赛对LNCaP细胞的体外抗癌作用探究

该文通过携带mK5基因的溶瘤腺病毒Onco~(Ad)-mK5联合多西他赛(docetaxel, DTX)处理前列腺癌细胞株LNCaP,以探究两者联合作用的体外抗癌效果。采用CCK-8法分别检测Onco~(Ad)mK5、docetaxel以及两者联合用药对LNCaP增殖的抑制作用;用显微镜分别观察Onco~(Ad)-mK5、多西他赛单独作用及两者联合作用引起的细胞形态学变化;利用Hoechst 33258染色、流式细胞术检测各处理组细胞的凋亡情况; Western blot检测E1A、m K5以及凋亡相关蛋白Caspase-8、XIAP、PARP的蛋白质表达水平;实时荧光定量PCR(Q-PCR)分析处理组细胞的血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA水平变化。结果表明:感染复数(multiplicity of infection, MOI)=4的溶瘤腺病毒Onco~(Ad)-mK5与5 nmol/L的docetaxel能够协同抑制LNCaP的生长,且两者联合处理组的细胞凋亡现象比单独作用的效果更明显,这一新的药物组合为前列腺癌的临床治疗提供了参考。     

雷帕霉素联合ZD55-TRAIL病毒对肿瘤抑制及其机制探讨

溶瘤腺病毒的肿瘤靶向性研究一直是一个热点。目前已有商业化的ONYX-015、H101溶瘤腺病毒。在此基础上,科学家又进一步发展形成基因-病毒治疗方案,如文中应用的ZD55-TRAIL病毒。本研究利用刘新垣实验室提供的携带TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TNF相关的凋亡诱导配体)的溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL联合雷帕霉素杀伤肿瘤     

A33启动子结肠癌特异性探究及SV40增强子对其转录活性影响

为了探究A33核心启动子结肠癌特异性及SV40增强子对其转录水平的影响,该研究通过构建A33核心启动子和带SV40增强子的A33核心启动子(eA33)的荧光素酶报告基因载体pGL3-A33和pGL3-eA33,与内参照pRL-SV40质粒共转染至不同的细胞系中,利用双荧光素酶检测系统检测分析了A33和eA33启动子在不同细胞系中的转录活性。结果显示,A33核心启动子在结肠癌细胞系中具有转录活性低,但结肠癌特异性好的特点,而在其他类型癌细胞中基本没有活性。同时发现,eA33在各类癌细胞中的转录水平与A33相比,均呈大幅度提高,有显著性差异(P<0.01),但SV40增强子能显著增强A33启动子转录活性的同时减低了其结肠癌特异性。这为靶向癌症基因—病毒治疗策略在结肠癌的生物治疗应用中寻找结肠癌特异性的启动子奠定了研究基础。     

MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制研究

MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO) 是一种蛋白酶体抑制剂,它可逆地抑制蛋白酶体活性,从而抑制泛素-蛋白酶体通路所介导的蛋白质降解,诱导细胞凋亡．实验研究MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制．采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、透射电子显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术、Western blot分别检测MG132 对Bel-7404细胞的形态学变化、细胞内质网压力变化、自噬泡形成、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡及自噬信号途径中相关蛋白质表达的影响．结果显示,MG132能明显抑制Bel-7404细胞生长．通过增加内质网压力激活Caspase-12,也可通过线粒体途径调节Bcl-2/Bax水平,促进细胞色素c的释放,两者皆可激活下游效应Caspase-3,剪切PARP,诱导细胞凋亡．同时,MG132可诱导Beclin 1 和LC3B的上调,促使Bel-7404细胞发生自噬,可在透射电镜下观察到自噬泡形成．上述结果表明,MG132作用Bel-7404细胞涉及两类细胞程序性死亡途径：细胞凋亡和自噬．     

BATF2对Wnt信号通路影响的研究

摘要wnt信号通路在各种生物体内高度进化保守,与癌症的发生发展密切相关。BATF2是一个新近发现的基因,研究表明其具有抑癌基因的作用。目前,BATF2与wnt信号通路的关系尚不清楚,该文用荧光素酶报告基因检测、Real－timePCR和Western blot发现BATF2能影响wnt信号通路。过表达BArF2可明显下调TCF4／p－catenin的转录活性和Wnt信号通路下游基因的表达,可以下调细胞核中的β-caenin。推测BATF2可能通过下调细胞核中的p－catenin来实现对wnt信号通路的下调。上述结果为抑制Wnt信号通路用于肿瘤治疗提供了一定的依据。