慢病毒载体系统介导hUC—MSC绿色荧光蛋白和荧光素酶共表达技术体系的建立

目的建立慢病毒载体系统介导的人脐带间充质干细胞（hUC-MSC）绿色荧光蛋白（GFP）和荧光素酶共表达技术体系。方法 GFP和荧光素酶共表达慢病毒载体与相应包装质粒psPAX2和pMD2.G经聚乙烯亚胺介导共转染HEK293T细胞以包装病毒;病毒感染P4代hUC-MSC 12 h后,再行嘌呤霉素筛选24 h,普通光学显微镜观察细胞形态,荧光显微镜下观察GFP的表达情况,IVIS Kinetic成像系统拍照以观察和记录慢病毒感染后hUC-MSC荧光素酶的表达情况;MTS法行细胞生长曲线作图,同时,普通和实时定量RTPCR法检测细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF1/CIP1的表达。采用方差分析和t检验进行统计学分析。结果慢病毒感染并不会造成体外培养hUC-MSC形态的明显改变,而荧光显微镜和IVIS Kinetic成像系统的观察结果则分别证实,GFP和荧光素酶经慢病毒载体系统的介导可在hUC-MSC中成功地共表达。此外,细胞生长曲线作图结果表明,对照和GFP及荧光素酶共表达慢病毒感染后hUC-MSC的生长增殖速率相仿（P〉0.01）;实时定量RT-PCR法检测结果则显示,与对照慢病毒感染相比,GFP和荧光素酶共表达慢病毒感染后其细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF1/CIP1mRNA表达水平分别是对照组的1.11倍（P=0.130）、0.54倍（P=0.000）和0.78倍（P=0.005）,表明外源GFP和荧光素酶共表达对体外培养的hUC-MSC生长增殖等表型无显著影响。结论慢病毒载体系统可有效介导外源基因在hUC-MSC中的表达;同时,GFP和荧光素酶在hUC-MSC中的共表达也将极大地方便其体内转归的示踪。     

松嫩平原两种碱蓬群落土壤种子库通量及幼苗死亡的分析

角碱蓬和翅碱蓬都是１ａ生耐碱性较强的藜科植物。在松嫩平原碱化草甸２个固定的单优碱蓬群落土壤中有活力种子的数量动态和种群动态的研究结果表明：土壤种子库存量在尚未萌发输出以前为最大,角碱蓬群落为２２２６０粒／ｍ＾２,翅碱蓬群落为３７２３０粒／ｍ＾２。整个生长季均有种子输出,２群落的种子库存率随着时间呈渐近形式规律地下降。现存植株数量角碱蓬种群以５月上旬最大,为１９４８０株／ｍ＾２,翅碱蓬则在４月上旬最     

松嫩平原碱化草甸星星草种群营养繁殖及有性生殖的数量特征

根据对星星草单优群落独立株丛的大样本取样和对正常花序随机取样的调查与测定,分析了松嫩平原碱化草甸星星草种群的营养繁殖及有性生殖特征．结果表明,星星草种群诸营养繁殖数量性状之间有明显的规律性,丛植株数、丛地上生物量、丛生殖株数及丛生殖株重分别随丛径呈指数形式增加．星星草种群的圆锥花序大多为９—１６个节,花序上各节位上的小穗数量呈γ密度函数分布．随着节位的增高,各节位上的小花数量呈Ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲线形式减少．小穗数和小花数均随节位增高呈饱和型指数曲线形式累积增长．     

硬骨鱼中vasa基因的研究

vasa基因编码一个DEAD-box家族的ATP依赖性RNA解旋酶,最早在果蝇中发现.在绝大多数的脊椎动物和非脊椎动物中,vasa基因的杂交信号仅在生殖细胞系中特异性表达,因此它可以作为一种分子标签,广泛用于性腺发生、配子发生、原生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的起源、迁移、分化等方面的研究.综述了国内外有关硬骨鱼类vasa基因结构,表达与功能等方面的研究报道,并对其应用前景作了展望.     

乳腺癌细胞QSOX1的CRISPR/Cas9基因编辑及其对增殖侵袭的影响研究*

目的:乳腺癌细胞的恶性增殖和易于侵袭转移特性与其对患者的危害直接相关,因此,探究其产生的分子机制,对其有效防治具有重要意义。静息巯基氧化酶-1(QSOX1)是巯基氧化酶家族成员之一,有研究证明其对细胞内蛋白质折叠过程中二硫键形成及细胞外基质的形成发挥重要作用。由于QSOX1在乳腺癌和胰腺癌等多种癌细胞中过表达,将探索QSOX1对乳腺癌细胞过度增殖和侵袭转移方面的可能作用。方法:通过利用CRISPR/Cas9技术构建QSOX1基因敲除和敲入的乳腺癌细胞模型,检测分析QSOX1对乳腺癌细胞MCF-7的分裂增殖、侵袭迁移能力等方面的影响。结果:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了QSOX1基因敲除和敲入的乳腺癌MCF-7细胞株,其与对照野生型组细胞相比,QSOX1基因敲除株的增殖能力显著下降,癌细胞在体外的迁移和侵袭能力受到明显抑制;而QSOX1基因敲入株的增殖能力和体外迁移侵袭能力却明显有提高。结论:初步揭示了QSOX1在癌症发生与发展中的作用,为进一步阐明其作用的分子机制和设计靶向药物奠定了重要基础。     

间充质干细胞促进Luminal B型乳腺癌细胞生长增殖及其分子机制

目的分析人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对Luminal B型乳腺癌细胞生长增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机理。方法绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶共表达慢病毒感染人Luminal B型乳腺癌细胞BT474,并经嘌呤霉素筛选两周后,于荧光显微镜下观察GFP的表达情况,IVIS Kinetic成像系统拍照以观察和记录慢病毒感染后BT474细胞荧光素酶的表达情况;荧光显微镜下直接观察,结合MTS实验分析hUC-MSCs共培养或其浓缩上清处理对GFP和荧光素酶共表达BT474细胞生长增殖的影响;Western blot法检测hUC-MSCs浓缩上清处理对BT474细胞Akt和MAPK信号通路激活情况以及下游细胞周期调控蛋白Cyclin D1表达的影响;常规RT-PCR法检测hUC-MSCs中NRG-1、NRG-2、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ和EGF等配体的表达。荧光素酶表达强度与细胞数量的相关性经由Excel软件行统计学分析,MTS实验数据则经由SPSS13.0统计软件行统计学分析。结果荧光显微镜和IVIS Kinetic成像系统的观察结果分别证实,GFP和荧光素酶经慢病毒载体系统的介导可在BT474细胞中成功地共表达,且荧光素酶的表达强度与细胞数量呈直线相关。MSCs共培养或其浓缩上清处理均可显著促进Luminal B型乳腺癌细胞BT474的生长增殖,其细胞存活比例分别为各自对照组的148.06%(P0.005)和147.99%(P0.001);MSCs浓缩上清处理同时激活BT474细胞内Akt和MAPK信号通路,并上调细胞周期调控蛋白Cyclin D1表达。此外,RT-PCR结果显示,hUC-MSCs中NRG-1和EGF的mRNAs水平呈高表达,而NRG-2、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ等配体的mRNAs表达也可见。结论 MSCs可通过表达并分泌NRG-1等配体,从而激活Luminal B型乳腺癌细胞BT474的下游Akt和MAPK信号转导通路以上调细胞周期调控蛋白Cyclin D1的表达,进而促进其生长增殖。