用线性梯度平板准确测定药物敏感性和分离抗药性菌株

菌群在药物的最低抑菌浓度附近的动力学过程是抗生素药理学研究的核心问题.建立一种能确定精确的MIC且又能准确分离抗药性菌株的方法,是目前临床对药敏实验新的要求.根据Fick扩散定律制备了线性梯度平板：将15mL含适当浓度恩诺沙星的琼脂培养基在9cm培养皿中倾斜凝固,刚好覆盖整个平板底面,然后水平放置,再在其上层加入同样体积的无药琼脂培养基,凝固12h后,药物浓度达到扩散平衡而呈均匀连续线性梯度.通过实测验证药物浓度在平板表面呈线性梯度分布.将待检E.coli菌群均匀涂布在梯度平板上,培养12h后,随恩诺沙星浓度提高依次形成连续密集小菌落区和离散大菌落区,根据两区域的分界线可以确定菌群自然形成的真实的MIC,与常规药敏实验方法测定结果一致.大菌落重新涂布高梯度平板,分界线显著上升,并检测出抗药性基因突变,表明该方法很容易筛选出菌群中的抗药性菌株.梯度平板可以方便地呈现整个菌群在MIC附近的动力学过程和遗传生理变化,并预警该抗生素使用后可能出现的抗药性,从而指导临床抗菌药物的选择和使用.     

灰葡萄孢丝裂原活化蛋白激酶编码基因bmp1和bmp3的功能

【背景】植物病原真菌丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径参与病菌有性生殖、细胞壁完整、菌丝侵染、致病力、胁迫响应等过程,灰葡萄孢MAPK信号途径参与病菌生长发育、致病力以及胁迫响应,但MAPK信号途径基因在灰葡萄孢中的功能尚未完全阐明,该信号途径对灰葡萄孢的生长发育和致病力的调控机制尚不明确。【目的】明确灰葡萄孢MAPK编码基因bmp1、bmp3在病菌生长发育、致病力以及氧化胁迫响应过程的功能,为进一步阐明MAPK信号途径调控灰葡萄孢生长发育和致病力的分子机制奠定基础。【方法】利用RNAi技术构建灰葡萄孢MAPK编码基因bmp1和bmp3的RNAi突变体,并以野生型BC22菌株为对照,对bmp1和bmp3基因的RNAi突变体的表型、致病力以及对氧化胁迫的敏感性进行分析。【结果】灰葡萄孢bmp1和bmp3基因的RNAi突变体其菌落形态、菌丝形态均与野生型BC22菌株没有明显差别;bmp1基因的RNAi突变体生长速率明显减慢,分生孢子产量明显降低;bmp3基因的RNAi突变体的生长速率与野生型BC22菌株没有明显差别,不能产生分生孢子。bmp1和bmp3基因的RNAi突变体在番茄果实的表面均不能产生明显的致病症状,而且不能穿透玻璃纸。bmp1基因的RNAi突变体在含有H_2O_2的培养基上受抑制的程度显著低于野生型,而在含甲萘醌的培养基上受抑制的程度显著高于野生型;bmp3基因的RNAi突变体在含有H_2O_2和甲萘醌的培养基受抑制的程度均显著高于野生型。【结论】灰葡萄孢bmp1基因正调控病菌生长、分生孢子形成、致病力和穿透能力,参与调控病菌对氧化胁迫的响应;灰葡萄孢bmp3基因正调控病菌分生孢子形成、致病力、穿透能力以及对氧化胁迫的响应。     

温热磁场治疗脑外伤综合症24例

临床资料1　一般资料脑外伤后综合症患者 2 4例 ,男 1 4例、女 1 0例。年龄最小 6岁、最大 63岁、其中 6- 2 5岁 4例 ,2 6- 35岁 1 3例 ,36- 5 0岁 5例 ,5 1 - 63岁 2例 ,其中以 2 0 - 5 0岁为多见。病程最短 3个月 ,最长2 0年 ,其中 3个月 - 1年 2 0例 ,1 - 5年 2例 ,6- 1 0年 1例 ,1 1 - 2 0年 1例。2　治疗方法采用日本伊藤公司产HM - 2SC -A型电脑温热磁场治疗仪 ,温度 40°- 70°可调节 ,电极 30 0cm2 XⅡ一电极置于枕部及颈肩背部 ,另一电极置于太阳神经丛区或胃部。每日一次 ,每次 2 0分钟 ,2 0次一疗程。治疗期间不配合其它治疗…     

糖尿病肾病患者血浆基质金属蛋白酶-2和同型半胱氨酸水平及其临床意义

目的:探讨糖尿病肾病患者血浆基质金属蛋白酶-2和同型半胱氨酸水平及其临床意义。方法:选取糖尿病患者71例,其中并发糖尿病肾病组(n=35)和未并发肾病组(n=36),同时选取健康人群40例为对照组。检测患者MMP-2、Hcy、MAU及Scr水平。结果:糖尿病肾病组、糖尿病无肾病组血浆MMP-2、Hcy及MAU水平均显著高于健康对照组(P0.01);与糖尿病无肾病组比较,糖尿病肾病组患者MMP-2、Hcy及MAU水平较高(P0.05);糖尿病肾病组患者的血浆SCr水平明显高于其他两组(P0.05)。糖尿病肾病患者血浆MMP-2与MAU呈显著正相关(r=0.522,P0.05),与Hcy呈显著负相关(r=-0.007,P0.05),与Scr不相关(P0.05);Hcy与MAU(r=0.012,P0.05)、Scr均(r=0.031,P0.05)呈正相关。结论:糖尿病肾病患者MMP-2水平降低,Hcy水平升高,有望作为糖尿病肾病患者的诊断和预后预测参考指标。     

抑制E.coli的SOS应答对恩诺沙星抗药性的影响

通过敲除SOS应答启动蛋白基因rec A,探讨SOS应答对E.coli恩诺沙星抗药性的影响,并体外评价Rec A抑制剂和恩诺沙星联用对细菌协同抑制作用的影响.利用Red重组系统,构建E.coli ATCC 25922的rec A缺失菌株E.coli ATCC 25922/?rec A;在恩诺沙星压力下,利用荧光定量PCR测定SOS应答系统相关基因rec A和umu C表达量的变化.用微量肉汤稀释法测定恩诺沙星等常用抗生素对两个菌株的MIC变化;利用梯度平板法测定恩诺沙星对两个菌株抗药性变异的影响;合成Rec A抑制剂,并评估其与恩诺沙星联合抑制E.coli生长及其抗药性的作用.结果表明,E.coli ATCC 25922/?rec A菌株对恩诺沙星的最低抑菌浓度值降低至原始菌株的1/8;经药物处理后,在梯度平板上,rec A缺失菌株较野生型不易产生抗药性;荧光定量PCR表明,rec A缺失菌株或在Rec A抑制剂作用下,SOS应答系统受到一定的抑制.敲除rec A,使菌株对恩诺沙星的抗药性和抗药率均明显降低;Rec A抑制剂在一定程度上能抑制SOS应答,起到协同抑菌作用.     

温热磁场治疗脑外伤综合症24例

1 一般资料 脑外伤后综合症患24例,男14例、女10例。年龄最小6岁、最大63岁、其中6—25岁4例,26—35岁13例,36—50岁5例,51—63岁2例,其中以20—50岁为多见。病程最短3个月,最长20年,其中3个月-1年20例,1—5年2例,6—10年1例,11—20年1例。     

动物生殖器疱疹的实验治疗研究

探讨观察中药MAG抗HSV效果.建立实验动物HSV感染模型,分组进行局部治疗与局部、全身联合治疗对比研究.局部、全身联合治疗有效.中药MAG对家兔阴道局部黏膜无刺激作用和毒性反应,对HSV有一定的直接灭活性作用.     

丹红注射液对急性冠脉综合征患者血浆脑钠肽及心率变异性的影响

目的:探讨丹红注射液对急性冠脉综合征患者血浆脑钠肽水平及心率变异性的影响。方法:选取我院收治的急性冠脉综合征患者72例,并将其随机分为实验组和对照组。对照组36例,予以阿司匹林肠溶片100 mg/日一次口服、低分子肝素钠200 IU/kg体重,每日一次皮下注射及普萘洛尔20 mg/日3次口服等常规治疗,2周为一个疗程,治疗两个疗程;实验组36例,在常规治疗的基础上加用丹红注射液,30 m L,加入5%葡萄糖注射液250 m L滴注,每日二次,2周为一个疗程,治疗两个疗程。治疗结束后,比较治疗前后两组患者的血浆脑钠肽水平及心率变异性中SDNN、SDANN、RMSSD、PNN50%变化。结果:1治疗后,两组患者血浆脑钠肽水平均有所改善,且实验组血浆脑钠肽(96.72±19.43 ng/L)较对照组血浆脑钠肽(147.53±26.89 ng/L)明显下降,差异有统计学意义(P0.05);2治疗后,两组患者心率变异性中SDNN、SDANN、RMSSD、PNN50%各指标均有所改善,且实验组改善情况明显优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:丹红注射液能够明显降低急性冠脉综合征患者的血浆脑钠肽水平,并显著改善心率变异性各项参数,从而可能有助于改善记性冠脉综合征患者的预后。     

耳压治疗心脏神经症120例疗效观察

资料与方法 心脏神经症患者120例,男33例,女87例,年龄在11-68岁,病程2月-25年。心律正常95例,窦性心动过速100-108次/分23例。窦性心动过缓56-60次/分1例,间歇脉1例,其中ST段压低0.55-0.1mV经心得安试验阴性10例。 方法:用耳穴探测器探找反应点,并以探捧用