低温几丁质酶基因在乳酸克鲁维酵母中的重组表达及酶学性质表征

【目的】通过构建假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp.DL-6)低温几丁质酶(chitinaseA,chi A;chitinase C,chi C)的重组乳酸克鲁维酵母菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质表征,为低温几丁质酶潜在工业化生产几丁寡糖奠定理论基础。【方法】人工合成密码子优化的几丁质酶基因,构建重组乳酸克鲁维酵母表达质粒(p KLAC1-chi A、p KLAC1-chi C)并用电脉冲法转化到乳酸克鲁维酵母中,实现低温几丁质酶的可溶表达。利用镍柱亲和层析纯化得到高纯度的重组几丁质酶。【结果】成功构建产低温几丁质酶的重组乳酸克鲁维酵母并纯化获得高纯度的重组几丁质酶。经SDS-PAGE分析在110 k Da与90 k Da附近出现符合预期大小的蛋白条带。铁氰化钾法测得Chi A和Chi C的酶活分别为51.45 U/mg与108.56 U/mg。最适反应温度分别为20°C和30°C,最适p H分别为8.0和9.0。在低于40°C,p H 8.0–12.0时,Chi A和Chi C重组酶较稳定。Chi A和Chi C对胶体几丁质以及粉状底物α-几丁质与β-几丁质具有明显的降解活性,且具有一定协同降解能力。【结论】首次实现假交替单胞菌来源的低温几丁质酶在乳酸克鲁维酵母中的重组表达、纯化、酶学性质及其降解产物分析,为其他低温几丁质酶的研究提供借鉴意义。     

破色期番茄果实均一化cDNA沉默文库的构建和功能基因筛选模型的初步建立

番茄果实的成熟是由多基因精细调控的一个过程．利用破色期番茄果实,根据复性动力学原理在mRNA水平进行均一化操作使高丰度和低丰度的mRNA丰度接近．然后把均一化之后mRNA反转录得到cDNA,再与基因沉默载体pTRV重组,最后把构建好的载体通过电转化的方法转入到GV3101农杆菌中,从而建立起破色期番茄果实均一化cDNA沉默文库．通过番茄果实中病毒诱导基因沉默技术,对cDNA沉默文库进行初步筛选,从而确定功能基因筛选模型．在模型建立阶段,以番茄红素合成途径相关的PDS基因作为内标基因,在100个混合农杆菌样中,成功筛选到了PDS基因．     

高产纤溶酶菌株CNY16发酵条件优化及其酶学特性初步研究

【目的】通过响应面试验对产纤溶酶菌株CNY16发酵条件进行优化,并对其酶学特性进行初步研究。【方法】采用Plackett-Burman设计得出酵母膏、氯化钠、转速3个最重要影响因素,通过最陡爬坡实验逼近酶活的最高区域,然后根据Box-Behnken中心组合设计实验对显著因素进行优化分析,最后对该酶学性质进行初步分析。【结果】最终得到3个因素的最优组合:酵母膏3.28%,氯化钠1.14%,转速166 r/min,在此培养条件下,纤溶酶活达到875.932 U/mL,比优化前提高了46%;该菌株产纤溶酶最适温度为30°C,最适pH为6.5。【结论】确定了高产纤溶酶菌株CNY16的最优发酵条件及其部分酶学性质,为该酶的进一步深入研究及中试实验奠定基础。     

两种非甾体类抗炎药对清醒状态血管源性头痛模型大鼠颅内Fos表达的影响

目的通过观察血管源性头痛清醒动物模型中Fos阳性细胞在三叉神经节及三叉神经脊束核尾侧亚核的分布情况,明确两种非甾体类抗炎药NSAID对乙酰氨基酚及布洛芬在头痛控制中,在颅内特定区域的作用机理。方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照组(生理盐水组)、对乙酰氨基酚组、布洛芬组,每组给药后50 min分别给予频率为20 Hz、电流为3~5 mA和脉宽为0.25 ms的电刺激,刺激后给予大鼠灌注固定取脑,分别在颅内取三叉神经节及三叉神经脊束核尾侧亚核制作石蜡切片,进行免疫组织化学染色,利用Image J软件对阳性细胞进行计数统计。结果电刺激后盐水组与非甾体类药物组在双侧三叉神经节、三叉神经脊束核尾侧亚核Fos蛋白表达的差异具有显著统计学意义,对乙酰氨基酚组与布洛芬组在双侧三叉神经节、三叉神经脊束核尾侧亚核Fos蛋白表达未见统计学差异。结论给予非甾体类抗炎前后在双侧三叉神经节、三叉神经脊束核尾侧亚核的Fos表达的改变提示三叉神经节、三叉神经脊束核尾侧亚核参与了疼痛的传递和表达以及药物对疼痛控制的药理过程。     

微生物学教学在知情意行结构中的探索与实践

阐述了认知结构、情感结构、意志结构和行为结构在当代大学生教育的微生物学学科教学中的探索与实践,包括这种体系的发展基础和建立理念,着重强调其在微生物学教学实践中的实施和所反映出的教学效果。具体来说就是用智给予学生知识,全面提高认知基础;用情关怀学生成长,平稳搭建情感桥梁;用爱启迪学生心灵,迅速增强意志动力;用心培养学生能力,充分施展行为表现。在这种"知情意行"结构的渗透下,大学生的素质教育得到了全面提升,使微生物学教学得到学生的充分肯定并取得比较理想的教学效果。     

HAV病毒液的3种浓缩方法比较

目的:对HAV病毒液的3种常见浓缩方法进行分析比较,为HAV病毒研究及规模化疫苗生产提供参考。方法:使用MILLIPORE PELLICON超滤、PEG 6000沉淀、蔗糖-甘油垫三种方法对纯化HAV病毒液进行浓缩,用ELISA方法对浓缩液进行抗原滴度检测,计算不同浓缩方法的回收率。结果:HAV病毒液经过7次超滤循环浓缩,平均回收率为86%;PEG浓缩方法回收率平均72.5%;蔗糖-甘油离心浓缩方法平均回收率53.3%。结论:蔗糖/甘油超离心法,集纯化浓缩一体,适用于样品量较少,需要高浓度样品的试验;PEG浓缩得率适中,操作简单,应用范围较广;超滤膜浓缩在大规模疫苗生产或样品量较大时适用,但需控制样品浓度及浓缩倍数不能太高,以免样品损失。     

兰索拉唑与奥美拉唑治疗活动期胃溃疡的效果及对血清抗氧化因子的影响

目的:观察和比较兰索拉唑与奥美拉唑治疗活动期胃溃疡的临床效果及其对患者血清抗氧化因子水平的影响。方法:选取2016年1月至2017年1月我院收治的活动期胃溃疡患者88例,将其随机分成研究组和对照组,每组各44例。对照组给予奥美拉唑于睡前口服治疗,一次20mg,每日1次。研究组给予兰索拉唑于睡前口服治疗,一次30mg,每日1次。两组患者均以7d为一个疗程,连续治疗8个疗程。比较两组患者的临床总有效率和治疗前后血清超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Methylene dioxyamphetamine,MDA)、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)和一氧化氮(Nitric oxide,NO)水平的变化。结果:(1)研究组治疗总有效率为97.73%,对照组治疗总有效率为79.55%,研究组治疗总有效率显著高于对照组(P0.05);(2)治疗前,两组患者血清SOD、MDA、ET-1和NO水平比较差异无统计学意义(P0.05),研究组患者治疗后血清MDA、ET-1水平均明显低于对照组,血清SOD、NO水平均显著高于对照组(P0.05)。结论:兰索拉唑治疗活动期胃溃疡的临床效果明显优于奥美拉唑,可能与其显著提高患者血清SOD、NO水平及降低血清MDA、ET-1水平有关。     

维生素E对TCDD染毒小鼠白细胞介素和T细胞亚群的影响

为研究维生素E(VE)对2,3,7,8四-氯代二苯并-对-二噁英(TCDD)染毒雄性小鼠白细胞介素(IL)和T细胞亚群的影响,我们设计了5个实验组,将40只小鼠随机分为5组,5组动物给予TCDD和维生素E的水平依次为:TCDD 0 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD 100 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD 100 ng/kg和VE20 mg/kg、TCDD 100ng/kg和VE100 mg/kg、TCDD 100 ng/kg和VE500 mg/kg。灌胃7周后取其血液和脾脏,用酶联免疫法测小鼠血清IL的水平,用流式细胞仪法测定脾脏T淋巴细胞亚群的变化。结果表明:TCDD染毒组小鼠血清IL-1α水平明显高于对照组;VE20 mg/kg和100 mg/kg的两组,其血清IL-1α水平均明显低于染毒组;而VE500 mg/kg组,其血清IL-1α水平与染毒组间差异没有统计学意义;TCDD染毒组小鼠血清IL-2水平明显低于对照组;VE100 mg/kg和500 mg/kg两组,其血清IL-2水平明显高于染毒组;TCDD染毒组CD4 T淋巴细胞百分比明显低于对照组;给予VE的三组,其脾CD4 T淋巴细胞百分比与TCDD染毒组相比有升高的趋势,但没有统计学意义;TCDD染毒组小鼠脾CD8 T淋巴细胞百分比明显高于对照组;VE为100 mg/kg组,其脾CD8 T淋巴细胞百分比明显低于染毒组和VE20 mg/kg两组;VE500 mg/kg组,其脾CD8 T淋巴细胞百分比明显低于染毒组。表明TCDD能导致机体白细胞介素分泌的紊乱以及脾脏T淋巴细胞亚群的变化,而适当剂量的VE对TCDD所致的毒性有拮抗作用。     

双针刺疗法在孕足月初产妇催产中的应用效果及对应激反应和内源性神经递质的影响

摘要 目的：研究双针刺疗法在孕足月初产妇催产中的应用效果及对应激反应和内源性神经递质的影响。方法：选取2020年3月~2022年5月期间我院妇产科收治的孕足月初产妇102例。根据随机数字表法分为对照组（51例）和研究组（51例）。产妇在临产宫口开至3 cm（T0）后,对照组不予以任何镇痛方法干预,研究组给予双针刺疗法干预。比较两组催产疗效、产程情况、宫颈成熟指标、应激反应和疼痛、内源性神经递质指标的变化情况。结果：研究组的临床总有效率高于对照组（P<0.05）。研究组的总产程、第一产程、第二产程、第三产程时间均短于对照组（P<0.05）。研究组的宫颈口扩张、宫颈管消退、先露位置、宫颈硬度、宫口位置大于对照组（P<0.05）。两组宫颈口开10 cm（T1）的血糖、皮质醇水平升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。两组T1的视觉疼痛模拟（VAS）评分、P物质（SP）、β-内啡肽（β-EP）、神经肽Y（NPY）升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。结论：孕足月初产妇采用双针刺疗法可提高催产疗效,促进宫颈成熟,缩短产程时间,同时还可减少内源性神经递质的释放,减轻产妇应激反应。