TNF-α转化酶酵母双杂交系统"诱饵"质粒的构建及鉴定

目的：构建酵母双杂交系统“诱饵”质粒载体pGBKT7-TACE,并检测其是否具有自身激活及毒性作用。方法：从小鼠肝组织提取总RNA,用RT-PCR的方法获得TACE,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-TACE在MATH-MAKER GAL4 Two-Hybrid System 3中的自激活和毒性作用。结果：本实验成功构建了“诱饵”质粒载体pGBKT7-TACE,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。结论：构建的诱饵质粒pGBKT7-TACE可应用在酵母双杂交系统中,为筛选小鼠cDNA文库中与TACE相互作用的蛋白奠定实验基础。     

非体外循环下冠脉搭桥术后急性肾损伤的危险因素及术前尿酸、白蛋白的预测价值分析

摘要 目的：探讨非体外循环下冠脉搭桥术（OPCAB）后急性肾损伤（AKI）的危险因素,并分析术前尿酸（UA）、白蛋白（ALB）对OPCAB术后AKI的预测价值。方法：纳入我院2018年5月～2020年5月收治的134例行OPCAB术的冠心病患者,收集其临床资料。术后观察48h,根据患者是否发生AKI分成AKI组和非AKI组,分析患者OPCAB术后AKI发生的影响因素,绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析术前血清UA、ALB对OPCAB术后AKI的预测价值。结果：在134例患者中,有37例患者行OPCAB术后发生AKI,发生率为27.61%（37/134）。单因素分析结果显示,AKI组年龄≥65岁、高血压史、糖尿病史、术前心功能Ⅳ级人数占比和术前血清UA较非AKI组升高,而术前血清ALB较非AKI组降低（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥65岁、高血压史、糖尿病史、术前心功能Ⅳ级、术前血清UA≥350.71 μmol/L是术后发生AKI的危险因素,而术前血清ALB≥39.22 g/L是AKI的保护因素（P＜0.05）。术前血清UA、ALB及二者联合预测OPCAB术后AKI发生的曲线下面积（AUC）分别为0.771、0.722、0.881。结论：OPCAB术后AKI发生率较高,AKI主要与患者年龄、高血压史、糖尿病史、术前心功能分级以及术前血清UA、ALB水平有关,其中术前血清UA、ALB对AKI发生有一定预测价值,临床可通过测定术前UA、ALB水平,辅助评估OPCAB术后AKI的发生风险。     

羧基化石墨烯/半胱胺修饰金电极对多巴胺的电化学行为研究

为了基于羧基化石墨烯/半胱胺修饰金电极建立更为先进的多巴胺生物传感器，以定量检测儿茶酚胺类神经递质多巴胺，利用自组装技术将半胱胺修饰于金电极上，再利用1-乙基-\[3-二甲基氨基丙基\]碳酰二亚胺盐酸化物/N-羟基琥珀酰亚胺（EDC/NHS）交联剂将羧基化石墨烯固定在修饰后的金电极上制成多巴胺电化学传感器。先对修饰电极进行表征以检验其灵敏度，再利用循环伏安法研究该电极在多巴胺溶液中的电化学行为，包括检测条件的优化和传感器性能的测定。修饰电极表征结果表明，羧基化石墨烯/半胱胺修饰金电极提高了电极传递电子的能力，具有较高的灵敏度。经单因素实验得出，最佳检测条件为利用pH 6.00的0.30 mol·L-1磷酸盐缓冲溶液（PBS）配制多巴胺溶液，扫描速率设定为200 mV·s-1。在最佳检测条件下，制备的多巴胺电化学传感器电流的大小随着多巴胺浓度的增大而增大，在1.0×10-3~3.5×10-3 mol·L-1范围内呈现良好的线性关系，线性回归方程为I=8.120 6C+7.017，相关系数R2为0.999 5。且该传感器精密度好，稳定性强，具有一定的抗干扰能力。研究结果为药物盐酸多巴胺注射液中多巴胺含量测定提供了支撑。