5种杂交粳稻亲本SCAR标记的建立及其在真伪纯度鉴定中的应用

选用36个随机引物对"寒丰A"、"寒丰B"、"8204A"、"8204B"、"R161"等5份杂交粳稻亲本材料进行RAPD扩增,对其中特异RAPD标记片段进行克隆和测序.根据获得的特异DNA序列设计序列特征扩增区(SCAR)特异的引物,将18个RAPD标记转化成6个稳定的SCAR标记.用这些SCAR标记对亲本和杂种F1代单株进行检测,实验室检测种子纯度的结果与海南田间种植的结果基本一致.此外,应用水稻细胞质雄性不育特异的1对PCR引物,分辨出2对不育系/保持系亲本:"寒丰A"与"寒丰B"、"8204A"与"8204B".     

华东三省转Bt基因棉花种植对边际水体中Cry1Ab/c蛋白残留的影响

为调查转基因棉花种植地区边际水体中的Cry1Ab/c蛋白残留情况, 在华东地区的山东、江苏、安徽三省棉田设置采样点, 连续3年在棉花的花铃期和收获季节, 对棉区地块内部及周围边际水体随机采样, 进行去杂及纯化处理后, 利用ELISA (酶联免疫吸附测定)方法检测水样中的Cry1Ab/c蛋白含量。结果表明: (1)在花铃期和收获季前后两周, 分别在5个布控点边际水体中检出Cry1Ab/c蛋白, 其中1个布控点阳性蛋白残留浓度最高达到0.4 ppb, 另外4个布控点检测出的阳性蛋白量均在0.04 ppb以下; (2)距离棉田越近, 蛋白检出阳性率越高, 其中棉田内水渠阳性率为13.3%; (3)连续种植时间超过7年的田地周围水体中蛋白阳性率为12.4%。在所有取样时间点中, 与花铃期相比, 收获季更容易检测到阳性结果。这表明在转基因棉花产区, 应在收获季进行适当的指导和监控, 以预防和降低转基因棉花中Cry1Ab/c蛋白对边际水体的潜在影响。     

转基因(SAG12-IPT)青菜的迟衰特性

利用根癌农杆菌感染方法将融合基因SAG12 IPT导入青菜 ,转基因植株明显表现出衰老延迟的生理现象。SAG12 IPT的抗衰老作用表现为 :在衰老过程中转基因青菜叶片中叶绿素含量高于未转基因的青菜 ,PCR分析结果表明该融合基因已经转入青菜中。激素检测结果表明转基因青菜叶片中细胞分裂素含量高于未转基因植株 ,说明抗衰老与叶片内细胞分裂素含量提高有关。另外 ,转基因植株不仅表现出活体植株衰老延迟 ,而且长在植株上的与离体的叶片滞绿时间延长。这些为蔬菜的耐储存育种提供了新的思路 ,同时为该融合基因在十字花科经济作物中的应用提供了理论依据。     

16S rDNA克隆文库法探索转基因香石竹对土壤细菌群落的影响

【目的】通过研究转基因香石竹对土壤细菌群落的影响,为转基因香石竹的环境安全性评价提供依据。【方法】通过构建16S rDNA克隆文库,分析种植转基因和非转基因香石竹的土壤中细菌的群落结构组成。【结果】转基因和非转基因香石竹土壤中,共有的菌群有变形菌门(Proteobacteria)、浮霉菌门(Planctomycetes)、酸杆菌门(Acidobacteria),其中α-变形菌门、β-变形菌门、浮霉菌门为优势菌群;而在放线菌门(Actinobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobia)及未培养菌(Uncultured bacterium clone)等菌群存在部分差异。【结论】通过16S rDNA克隆文库方法揭示了转基因香石竹的土壤中细菌多样性十分丰富,其栽培对土壤细菌群落结构影响有限。     

霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析

构建了霍乱毒素B亚单位(choleratoxinBsubunit,CTB)与胰岛素(insulin)B链的融合基因CTB-INSB,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIB;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后的表达产物经15％SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,其分子量约为15.4kDa,且主要以包涵体形式存在,约占全菌蛋白的30％。含CTB-INSB重组蛋白的包涵体经变性和复性后,可在体外自组装成五聚体结构。Westernblotting分析结果显示CTB-INSB可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别,表明该蛋白具有霍乱毒素B亚单位与胰岛素的双重抗原性。同时GM1-ELISA分析结果表明CTB-INSB在体外可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异结合,进一步证实了它能够形成类似CTB五聚体的高级结构,具有生物活性。     

转基因香石竹中F3’5’H基因的克隆、表达和免疫学鉴定

在研究转基因香石竹品系月之霓裳（Moonshade）、月之伊人（Moonlite）中外源基因F3’5’H的表达中,本文克隆了F3’5’H全长基因1.5kb,构建获得工程菌株Escherichia coli BL21（DE3）（＋F3＇5＇H）。SDS-PAGE分析的结果显示,该菌株高效表达出F3’5’H重组蛋白,约占菌体总蛋白的30%。用经纯化的F3’5’H重组蛋白作为抗原,制备F3’5’H重组蛋白的抗血清,经ELISA免疫学分析表明,该抗血清的效价为1：25600。Western blot结果表明F3’5’H重组蛋白具有良好的IgG结合活性,且抗血清与转基因香石竹品系月之霓裳和月之伊人中的外源基因F3’5’H所表达的蛋白发生明显的抗原抗体反应。这样,月之霓裳和月之伊人用于评价转基因香石竹品系的环境安全性在我国也得到了验证。     

正常和异常的人精浆中甘油-3-磷酸胆碱、总唾液酸及化学元素含量的比较研究

用酶法和过碘酸 -硫代巴比妥酸法对正常男性和异常男性患者精浆甘油 3 磷酸胆碱(GPC)、总唾液酸 (TSA)量进行了测定 .通过电感耦合等离子直读光谱仪 (ICP)测定精浆中多种化学元素的含量 .结果表明 :正常男性与异常男性患者精浆中GPC的含量有显著性差异 (P <0 0 5) ;正常男性与异常男性患者精浆中TSA的含量无显著性差异 ;正常男性与异常男性患者精浆中钙、镁、磷、硒和锌元素的含量具有显著差异 ,而正常男性与异常男性患者精浆中铝、钡、铁和铅元素的含量无显著差异 .这些结果提示精浆中GPC、钙、镁、磷、硒和锌元素的含量可能与男性不育有关 ,而精浆中TSA、铝、钡、铁和铅元素与男性不育关系还需进一步探讨 .     

进口肉骨粉中牛成分检测研究

根据18S核糖体基因保守序列设计引物,对牛骨粉,鱼粉,牛肉,羊肉,猪肉,鸡肉,鸭肉,鱼肉的DNA样品进行PCR扩增,均得到137bp的扩增片段;根据牛线粒体的特异基因片段设计引物,对上述材料DNA样品进行PCR扩增,结果只在牛肉和牛骨粉中出现271bp的扩增,本实验建立了从进口肉骨粉中检测牛成分的PCR方法,检测灵敏度达到牛成分含量为0．1％（W／W）的水平,用建立起来的方法对进口肉骨粉,鱼粉和饲料添加剂进行了检测,结果在5批肉骨粉中检测出含有可能导致疯牛病的牛成分。     

水稻秸秆还田时间对土壤真菌群落结构的影响

为揭示水稻秸秆还田对土壤真菌群落结构的长期影响,采用荧光定量PCR和PCR-DGGE技术分析了秸秆还田90,180,270 d和360 d的土壤真菌基因丰度和群落结构组成演变趋势,并利用冗余分析(RDA)研究土壤真菌群落结构变化与环境因子的关系。结果表明:随着秸秆还田时间的增加,土壤真菌群体数量和多样性指数(H、R和E)显著增加,在360 d时达到最高。对DGGE图谱的特征条带进行胶回收、测序,系统进化分析表明,土壤真菌主要种群包括:接合菌(Zygomycete sp.)、盐腐霉菌(Pythium salinum)、肉盘菌(Uncultured Sarcosomataceae)、牛粪盘菌(Ascobolus stercorarius)、大链壶菌(Lagenidium giganteum)、青霉菌(Penicillium sp.)、曲霉属真菌(Aspergillus sp.)和疏绵状丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)、灰绿曲霉菌(Aspergillus glaucus)、禾谷多粘菌(Polymyxa graminis)和枝顶孢霉菌(Acremonium sp.),其中青霉菌(Penicillium sp.)、曲霉属真菌(Aspergillus sp.)和枝顶孢霉菌(Acremonium sp.)具有纤维素降解能力,而枝顶孢霉菌(Acremonium sp.)在90 d时成为新的优势菌群。RDA分析表明,90 d和180 d秸秆还田与对照土壤的真菌群落结构较为类似,270 d和360 d的秸秆还田与对照土壤的真菌群落结构发生了明显变化。土壤有机碳、pH和速效磷是引起土壤真菌群落结构及多样性变异的主要因素。