HMCES蛋白促进猪流行性腹泻病毒在Vero细胞中的复制

【目的】鉴定能够调控猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)复制的关键宿主蛋白。【方法】利用LC-MS/MS技术结合串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)，分析PEDV感染Vero细胞36 h后和未感染组的蛋白组学差异。鉴定筛选了114个显著差异表达蛋白，其中宿主胚胎干细胞特异性5-羟甲基胞嘧啶结合蛋白(5-hydroxymethylcytosine binding,ES cell-specific protein,HMCES)显著上调。进一步构建HMCES真核表达质粒，通过蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR检测过表达HMCES对PEDV复制的影响；合成针对HMCES基因的特异性si RNA，利用Western blotting和RT-q PCR检测si RNA对HMCES表达的干扰效果及HMCES被干扰后对PEDV复制的影响。【结果】过表达HMCES能显著促进PEDV在Vero细胞中复制，并且复制水平随着HMCES的剂量递增呈现剂量依赖式增加；si RNA-341下调内源性HMCES表达进而抑制PEDV复制。【结论】H...     

天祝白牦牛与黄牛NGB蛋白三级结构比较分析

通过比较天祝白牦牛(Bos grunniens)与黄牛(Bos taurus)NGB蛋白三级结构,分析天祝白牦牛NGB蛋白氨基酸位点突变对其三级结构的影响。利用生物信息学在线分析网站及软件对天祝白牦牛和黄牛NGB蛋白的同源性、系统发育进化、三级结构进行比较分析。结果显示,天祝白牦牛NGB蛋白进化趋于保守,83号位点为未知突变,97号位点为保守替换;83号位点突变使得NGB蛋白Ser突变为Pro,主要为R侧链由醇羟基突变为四碳环,侧链结构发生改变,使得83号位点由α-螺旋突变为无规卷曲,突变位于E、F链之间,使得E、F链之间的距离由11.79?变为8.21?,致使与卟啉环中心铁原子相连远端His 64距离由2.17?变为2.10?;97号位点突变使得NGB蛋白Arg突变为Gln,主要为R侧链由氮原子突变为氧原子,且与碳原子通过双键连接,侧链结构未发生改变,使得97号位点突变后仍为α-螺旋,突变基团指向亲水相,羧基端与近端His 96位点相连,致使His 96与卟啉环中心铁原子距离由1.98?变为2.00?。经比较天祝白牦牛两处突变未发生在NGB蛋白核心功能区,对NGB蛋白功能未产生影响;突变造成R侧链基团发生改变,可能对NGB蛋白稳定性、柔韧性及溶解度造成一定影响;核心His 64、His 96与卟啉环中心铁原子距离发生改变,说明突变极有可能会对血红素外源配体结合造成一定影响。     

赛加羚羊部分器官组织学结构观察

为了解世界濒危物种、国家Ⅰ级保护野生动物赛加羚羊（Saiga tatarica）主要器官组织的结构特征,本研究利用石蜡组织切片技术,对1只因胎衣不下死亡的雌性成年赛加羚羊心、肝、脾、肺、肾的组织结构进行了观察。赛加羚羊心肌纤维发达,呈圆柱状,有分支,其胞核位于细胞边缘,各心肌纤维分支末端相互连接构成肌纤维网,闰盘明显。肝组织致密,间质少,肝小叶分界不清,切面呈不规则的多边形,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列。脾的被膜较厚,脾小梁由被膜和脾门的结缔组织伸入脾实质形成,相互连接构成脾的粗支架;实质部分可明显分为白髓和红髓,白髓主要分布在脾内小动脉周围,其内部脾小结形状为圆形或椭圆形;红髓主要分布于白髓区周围,其内充满大量的红细胞。肺实质导气部主要可见细支气管和终末细支气管,其中,细支气管的管腔面富含纵行皱襞,黏膜上皮为假复层柱状纤毛上皮;呼吸部可见大量的肺泡管、肺泡囊和肺泡,肺泡结构清晰可见。肾为平滑单乳头肾,由被膜和实质构成,实质可明显分为皮质与髓质,皮质内可见大量肾小体和少量结缔组织。总体而言,与其他同类型反刍动物相比较,赛加羚羊各主要器官的组织结构未见有明显差异。