根霉TC1653产纤维素酶提纯及酶学性质研究

对根霉所产纤维素酶酶系进行了分析并研究了部分酶学性质。实验选择超滤和凝胶柱分离相结合的方式提纯纤维素酶,结果显示根霉TC1653纤维素酶系是一个完全酶系,具有一个较为明显的内切葡聚糖酶组分。β-葡萄糖苷酶组分的最适反应温度为70℃,温度高于70℃时,活性迅速下降,但在这种高温下具有最高反应活性的酶很少见,很可能又是一种新的β-葡萄糖苷酶。     

溶菌酶分离纯化方法的研究进展

对近年来溶菌酶分离纯化的方法,如离子交换法、色谱法、膜处理技术、反胶团萃取法、亲和层析等进行了综述,并讨论了分离纯化方法的应用前景。     

匍枝根霉纤维二糖合成酶胞内糖基供体的初探及结构功能研究

纤维二糖可有效诱导丝状真菌产纤维素酶,前期研究表明匍枝根霉Rhizopus stolonifer TP-02具有纤维二糖合成酶(CBS),可以尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)为糖基供体合成纤维二糖,从而开启纤维素酶的自诱导合成途径。为研究R. stolonifer中纤维二糖的胞内合成途径,通过重叠PCR在GDP-葡糖焦磷酸化酶基因ggp中引入硫胺吡啶抗性基因ptrA,分别转化原菌TP-02和△ugp突变株,构建△ggp和△ugp/△ggp突变株。利用液质联用(LC-MS)检测突变株的胞内糖组分,发现ggp的缺失对胞内纤维二糖合成的影响较弱,但同时缺失ugp则将直接导致二糖合成受阻。RT-qPCR结果显示△ggp突变株中纤维素酶基因转录水平较原株TP-02下调20%左右,而△ugp/△ggp突变株中被测基因的转录水平则出现了高达80%左右的下调。同时对突变株纤维素酶表达水平进行研究,发现△ugp/△ggp突变株中几乎检测不到纤维素酶活力。结果显示,UDPG为R. stolonifer胞内合成纤维二糖的主要糖基供体,而GDPG可能是UDPG的替代物,在UDPG不足时维持胞内二糖合成。此外,利用生物信息学方法对CBS结构功能深入分析,经丙氨酸扫描确定其合成纤维二糖的关键作用残基为Asp210和Asp300,为后续进一步研究及理性改造提供方向和理论依据。     

铅、镉及其复合污染对蚕豆根尖细胞的诱变效应

应用蚕豆根尖微核技术研究了Cd(1mgL^-1～25mgL^-1)、Pb(1mgL^-1～25mgL^-1)及其复合污染对根尖细胞的毒害作用,分析了重金属及复合重金属污染对蚕豆根尖细胞有丝分裂和微核及染色体畸变的影响。结果表明：Cd、Pb及其复合处理对蚕豆根尖细胞有丝分裂及染色体行为存在不同程度的影响。具体表现为：低浓度促进细胞分裂,高浓度则抑制细胞分裂;对染色体畸变的影响表现为：当浓度为1．0mgL^-1时Cd即产生显著效应,而Pb浓度达10．0mgL^-1时,表现出稳定的,强度较大的诱变效应,且随浓度的增加毒害增强。Cd、Pb间存在交互作用,Cd达低浓度时与Pb的交互作用明显而高浓度则不明显,且Cd、Pb间存在部分拮抗作用。     

TiO2膜吸附固定糖化酶特性的研究

分别以醋酸纤维素TiO2膜(AC.TiO2膜)、羧甲基纤维TiO2膜(CMC.TiO2膜)和聚丙烯TiO2膜(PP.TiO2膜)为载体吸附固定糖化酶,并与醋酸纤维素、羧甲基纤维素和聚丙烯固定糖化酶的性能进行了比较,得出以AC.TiO2膜和PP.TiO2膜对糖化酶的吸附性能及稳定性能均较好,PP.TiO2膜固定的糖化酶使用8次后其剩余酶活仍能保持在72%.     

聚丙烯二氧化钛负载膜固定化活性污泥对污水处理的研究

利用聚丙烯二氧化钛负载膜为载体,吸附固定活性污泥微生物,处理有机废水,考察了聚丙烯膜的组成、吸咐固定时间以及聚丙烯二氧化钛活性污泥负载膜对污水有机物的降解。由全有机碳分析仪对降解过程的有机物进行检测;结果表明;活性污泥负载膜处理废水8小时后,废水中的有机物含量下降达50％-60％,对所处理的废水的降解效果明显。     

葡枝根霉TP-02cDNA文库中两种新的β-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

从具有良好降解纤维素能力的葡枝根霉TP-02的cDNA文库中筛选获得两个新的β-葡萄糖苷酶基因bgl1和bgl2,并在毕赤酵母中高效表达.阳性克隆在MM培养基中发酵84 h和1%的甲醇的诱导的情况下,产生的β-葡萄糖苷酶酶活达到峰值分别为8.2 IU/mL 和9.9 IU/mL,分别较原菌株葡枝根霉的β-葡萄糖苷酶酶活...     

蛋白酶产生菌种间原生质体融合的研究

Baci llus属中的一些种是生产蛋白酶的重要菌株。 采用2500u／ml溶菌酶制备的两种芽孢杆菌原生质体在30％聚乙二醇(Mw6000)的作用下,成功地获得了枯草芽孢杆菌(Bacillusfubtilis)和地衣状芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的种间融合重组子。融合频率为7．47 x10—2．28×10-5经过四代的移接验证,融合子的稳定率达到12—20％。结果表明,两种产蛋白酶的芽孢杆菌融台后,营养缺陷和抗药特性方面可以互补;菌落形态发生某些变化;生产性能有较大的改进。     

匍枝根霉组成型内切葡聚糖酶基因的筛选和表达

从匍枝根霉cDNA文库中筛选得到组成型内切葡聚糖酶基因（ zeg1和zeg2）,经比对zeg1和zeg2相似度为86％,有相似的催化活性区域,经CDD（保守序列数据库）分析,该蛋白归属于糖苷水解酶第5家族,对比PDB（蛋白结构数据库）中第五家族的关键催化残基,预测该两个蛋白的第147位的谷氨酸（ E）及199位的色氨酸（ W）为该蛋白的关键催化残基。重组zeg1发酵至20 h时达到最高酶活为0.422 IU/mL;重组zeg2发酵至24 h达到最高酶活为0.509 IU/mL。酶学性质研究表明重组zeg1和zeg2的最适温度均为50℃,最适pH值均为5.0。通过CMC-SDS-PAGE电泳,复性后染色,测得重组zeg1和zeg2的分子量分别约为55 kD和58 kD。     

粘杆菌素发酵液微滤膜分离处理过程研究

粘杆菌素由于其药性强、残留低、对人畜无害被认为是最安全的畜禽抗生素之一。利用微滤对粘杆菌素发酵液进行预处理,根据发酵液的特性,选择孔径为0．2μm、膜面积为0．06M。的管式陶瓷膜为微滤膜,研究了操作参数的适宜值：压力为0．2MPa,流量为20L／min,在浓缩倍数达到3．5倍时连续两次加入与浓缩液体等量的水,得率为96％。经微滤处理后,滤液的吸光度Abs（470nm）为0．394,N-NH,含量为115mg／100mL,有效地去除了菌体、胶体蛋白及部分色素等,效果优于工业生产中板框过滤滤液的质量标准。