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1.
2.
杜氏盐藻rbcS启动子的克隆和功能分析 总被引:2,自引:0,他引:2
为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的小亚基基因rbcS 的5'上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用Dra I、EcoR V、Pvu II和Stu I四种平端限制内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建基因组步行文库GWL 1、GWL 2、GWL 3和GWL 4;设计特异引物从这四种文库中扩增rbcS基因的5'上游调控序列。在GWL 1、GWL 4中分别扩增出约1.2 kb的片段。对该序列的分析表明,它的3'端与已知盐藻rbcS cDNA 的5'端序列完全一致,说明是该基因的5'端上游区,并且包含多个与转录调控有关的保守序列(如TATA-box、CAAT-box),富含GT的重复序列。此序列EcoR I下游的片段与除草剂抗性基因bar相融合,构建表达载体,电击法转化盐藻。通过对转化藻株的抗性筛选以及PCR和Southern blot检测,表明该区域能驱动外源基因bar在转基因盐藻中的表达,推断是盐藻rbcS基因的启动子调控区。 相似文献
3.
目的:将带有DNA聚合酶iota(DNA Polymerase iota,Polι)目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,建立DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中的高表达体系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础.方法:用脂质体2000(Lipofectamine2000)将带有目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,通过G418筛选抗性克隆,用一步法提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测出高表达克隆.结果:通过G418筛选筛选出了具有G418抗性的克隆,通过RT-PCR技术检测出高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系.结论:建立了高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系.为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础. 相似文献
4.
我科自 1 998年初至 2 0 0 0年 1 0月在临床上按全国蛇毒酶临床应用研究协作组建议的降纤酶治疗方案 ,治疗内耳性眩晕症 2 6例 ,疗效肯定 ,现将临床疗效报告如下。1 临床资料1 .1 一般资料 2 6例患者发病 2~ 1 2年 ,最少发作数 2次 ,最多发作数 1 5次 ,均为反复眩晕发作 ,感音性听力减退 ,伴有不同程度的耳鸣、耳聋 ,曾行头颅 CT及颈椎正侧位片检查未见异常。全部病例均符合内耳眩晕症的诊断 [1] 。其中男 1 9例 ,年龄1 9~ 62岁 ,平均 36岁 ;女 7例 ,年龄 32~ 5 8岁 ,平均 44.6岁。1 .2 治疗方法 降纤酶 (广西医科大学生物制品研… 相似文献
5.
生物耐铜的分子机理及铜污染环境的生物联合修复 总被引:2,自引:0,他引:2
铜是动植物和人类必需的微量元素,缺乏或过多都将产生不良影响。随着社会经济的发展,人类活动对环境的干扰日益加剧,工业和农业生产活动常可导致土壤铜污染,铜已成为土壤重金属污染的主要元素之一。总结了铜在植物体内的自发内稳态调节机制,在细菌和真菌体内的吸收、分布、解毒和调节因子,同时以蚯蚓为例简要阐述了土壤动物对铜的解毒机理;从分子生物学角度对重金属铜在生物体内的代谢机理及生物对环境中过量铜的联合修复研究进展进行了综述,以期为铜污染环境的植物、微生物和动物联合修复的分子机理研究提供借鉴。 相似文献
6.
不同启动子驱动下转基因盐藻外源基因的稳定表达 总被引:7,自引:2,他引:5
摘要:为了探讨外源性与内源性启动子对转基因盐藻外源基因表达的影响,将含外源性启动子CMV35S的表达载体CMV35S-bar(G12)和含内源双拷贝碳酸酐酶启动子DCA1的表达载体DCA1-bar(D-B)分别转化盐藻,筛选稳定转化株后,观察在不同启动子驱动下外源基因的表达情况及对转基因盐藻生长的影响。 通过电击法分别将表达载体G12 和D-B转化盐藻,经PPT筛选后,各得到了3株PPT抗性藻株,经PCR及测序分析证实外源基因bar已经整合到盐藻的基因组中,半定量RT-PCR结果显示,在内源性启动子DCA1驱动下,bar基因的表达强度明显高于在外源性启动子驱动下bar的表达,并且D-B转化株的bar基因表达在盐诱导下其表达明显提高,而G12转化株中bar基因的表达对盐诱导无反应。Southern blot 分析显示,外源基因的拷贝数与不同启动子间无相关性。转化株的生长特性分析显示,D-B转化株的生长速度明显高于G12转化株。本研究的结果指出,内源诱导型启动子在驱动转基因盐藻外源基因的高效稳定表达中比外源组成型启动子更具有优势。 相似文献
7.
基于Linux的cDNA文库序列分析平台的构建与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究构建了基于Linux的cDNA文库序列分析平台,该分析平台可大批量自动处理测序后的序列,包括载体序列的去除、序列格式的转换、序列的自动拼接、序列对数据库的相似性搜索及全长ORF的预测等,可加速对大规模测序数据的分析和利用。用该平台对构建的野生大豆盐胁迫全长cDNA文库部分测序结果进行分析和利用。用该平台对构建的野生大豆盐胁迫全长cDNA文库部分测序结果进行分析,获得了较好的结果,已得到多个具有潜在价值的新基因序列。 相似文献
8.
蠊卵荚内寄生啮小蜂的生物学 总被引:2,自引:0,他引:2
本文报道了寄生于烟色大蠊Periplaneta fuliginosa(Serville)卵荚内的两种啮小蜂:Tetrastichus hagenowii和Tetrastichodes sp.,并讨论了Tetrastichus hagenowii的生物学特性。所收集的(虫非)蠊卵荚中,该蜂的自然寄生率为50.38%。观察14枚卵荚的出蜂数,最多为202只/枚,最少为10只/枚,平均为74.92只/枚。雌雄性比为1:0.42。该蜂4月上旬开始出现,5—8月是繁殖高蜂期,11月上旬则少见。接蜂的8枚卵荚孵出的成蜂平均存活12.8天(14.4天.10.2天)。蜂在卵荚内的发育时间与温度有关,在夏季比在秋冬季显著为短。成蜂的产卵期较长:而且除产卵于新鲜(虫非)卵荚内,也产卵于已产出7天以上的卵荚内。本文的观察结果为人工繁殖该啮小蜂用以防治室内(虫非)蠊提供了科学依据。 相似文献
9.
研究了西芹种子浸提液对黄瓜枯萎病菌菌落生长的抑制作用及浸提液处理后病菌致病力的变化.结果表明:在连续5代浸提液作用下,50 mg·mL-1的西芹种子乙醇、丙酮浸提液处理与其对照相比,显著抑制了黄瓜枯萎病菌菌落的生长;50 mg·mL-1的西芹种子蒸馏水浸提液处理在1~3代培养过程中,显著抑制了黄瓜枯萎病菌菌落的生长,而在4~5代培养过程中,与其对照相比,抑制菌落生长的差异不显著;用各代经西芹不同浸提液处理的黄瓜枯萎病菌接种到黄瓜上进行致病力测定,并于1周开始发病后调查病情,西芹种子丙酮、乙醇和蒸馏水浸提液处理的病情指数分别由第1代的26.7%、20.8%和22.5%降为第5代的17.5%、3.3%和18.3%;3种浸提液与其对照相比,其病情指数也表现降低,其中,乙醇浸提液处理与其对照差异达显著水平;接种至第5代时,乙醇浸提液处理的病情指数为3.3%,病菌毒力的致弱作用最强.综上所述,西芹种子浸提液不但抑制黄瓜枯萎病菌菌落的生长,而且还能弱化病菌的毒力.实验通过浸提液的连续处理获得了黄瓜枯萎病菌的弱毒菌株. 相似文献
10.
应用微核技术对北京三海水域污染状况的研究 总被引:16,自引:0,他引:16
2003和2004年于北京三海(西海、后海和前海)分别采集21、22个样品,利用蚕豆根尖微核技术对水体的污染状况进行了遗传毒性分析。结果表明,水体总体显示出不同程度的遗传毒性特征。2003、2004两年中,微核相对率〈1.5的样本分别占4.7619%、18.1818%,主要分布于前海和后海湖心区域;微核相对率为1.5~2.0的样本分别占28.5714%和13.6364%;微核相对率为2.0~3.5的样本分别占28.5714%和45.4545%;微核相对率〉3.5的样本分别占38.0952%和22.7273%。其中。在民居密集的西海区域,两年重度污染率均达到40%。结果表明,水体污染程度与人为因素具有显著相关。本文对试验方法亦进行了讨论。 相似文献