毕赤酵母工程菌人hepcidin的纯化及部分铁代谢活性研究

采用摇瓶培养重组毕赤酵母(Pichia pastoris)表达并分泌重组人hepcidin至胞外,经等电沉淀,凝胶过滤纯化,电泳检测样品纯度,通过Western blot检测小鼠内皮细胞中hepcidin对GFP-FPN1及TfR1表达的影响.研究发现发酵hepcidin产量达150 mg/L,纯化后经Tricine-SDS-PAGE检测为单一条带,分子质量与理论质量一致,具有抗菌活性,转染内皮细胞证实重组hepcidin可影响内皮细胞GFP-FPN1及TfR1的表达,具有调节铁代谢活性,对研究hepcidin与铁代谢的相关分子吸收机制及药物开发应用奠定了基础,对潜在的医学诊断治疗具有重要意义.     

玫瑰微球菌中treZ基因在毕赤酵母中的表达研究

首次将玫瑰微球菌中麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)treZ基因序列连接到表达载体pPICZαA中,通过电转化法将构建好的表达载体分别转入巴斯德毕赤酵母GS115和KM71菌株中.利用含有Zeocin的YPD平板筛选到阳性转化子,并经PCR、SDS-PAGE电泳以及Western blot最终验证海藻糖水解酶基因treZ已经整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,并且得到了预期的表达.     

角鲨烯合成酶特异性mU6-siRNA真核表达载体的构建及鉴定

利用RNA干扰技术靶向构建角鲨烯合成酶基因ERG9特异性真核表达载体。将针对粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe Linder)ERG9不同部位所设计的3对siRNA序列通过重组技术克隆到质粒mU6 pro中构建真核表达重组体mU6 ERG9 siRNA1、2、3,转化DH5α菌株扩增,提取质粒通过限制性酶切和测序分析对重组表达载体进行鉴定,分析结果表明3个表达载体的设计基因插入正确,成功构建了ERG9特异性真核表达载体mU6 ERG9 siRNA,重组体的成功构建为在裂殖酵母细胞中靶向RNA干扰角鲨烯的合成从而提高辅酶Q10合成途径的代谢通量打下基础。     

人类抗菌肽hepcidin在毕赤酵母中的分泌表达和纯化

报道了一种低分子量的人类抗菌肽hepcidin基因的克隆、表达以及纯化.试验证明在毕赤酵母中能成功分泌有活性的hepcidin,hepcidin在重组菌株中的表达量约为3 mg/L,Western blot显示2.2 kD的重组hepcidin条带,重组hepcidin通过凝胶过滤及反向高效液相色谱纯化,质谱验证,重组蛋白对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌表现出抗菌活性.     

来源于玫瑰微球菌的麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因在大肠杆菌中的融合表达

设计引物克隆玫瑰微球菌QS412中麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)的基因treZ,通过与pET-28a( )载体相连,转化入宿主菌E.coli BL21,进行发酵诱导。通过SDS-PAGE检测到外源基因在大肠杆菌中有很高的MTHase表达量,但大部分都以不溶性包含体形式存在。对菌体超声破碎全菌液检测酶活,结果显示了水解酶酶活。这是来源于微球菌属的麦芽寡糖基海藻糖水解酶首次获得基因克隆和活性表达,为进一步提高酶活、增大海藻糖产量奠定了基础。     

少根根霉脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的诱导表达

利用PCR技术从少根根霉基因组中扩增出脂肪酶成熟肽基因ral,并从枯草芽孢杆菌基因组中扩增出sacB基因的启动子-信号序列(SacB);通过搭桥PCR将SacB序列与ral基因融合,并将该基因表达盒连接到枯草杆菌分泌表达载体pGJ103中构建了脂肪酶基因的诱导表达载体pGJ103-SacB-ral。将重组载体转化至枯草芽孢杆菌后,少根根霉脂肪酶成熟肽基因在SacB启动子-信号序列的调控和蔗糖的诱导下获得表达,产物分泌至胞外。     

风险预判与主动干预在综合ICU患者多重耐药菌医院感染防控中的关键作用研究

目的:阐述风险预判与主动干预的综合防控措施对综合重症监护病房(GICU)患者多重耐药菌(MDRO)医院感染的防控效果。方法:对2018年1月~2019年12月入住GICU病房(分为A、B两个病区)>48 h的737例患者进行回顾性调查,其中A病区监测患者286例,MDRO防控参照院感科常规制度要求;B病区监测患者451例,MDRO防控采用入GICU时预判患者感染风险,再根据感染风险及患者自身状况对患者采取鼻腔去定植或肠道去定植的综合防控策略。用卡方检验比较两病区患者的感染结果与MDRO感染菌种分布情况,以验证不同防控策略的效果。结果:本研究共监测GICU住院患者737例,研究期间共发生MDRO医院感染85例。其中A病区监测患者286例,MDRO医院感染66例,感染率为23.1%;B病区监测患者451例,MDRO医院感染19例,感染率为4.2%,低于A病区(P<0.001)。单菌种感染结果显示,两病区感染菌种分布存在差异,CR-AB、CR-PA和MASR的感染率都为B病区低于A病区,两病区患者的共患病类型无差异。说明B病区MDRO防控效果优于A病区。结论:感染风险预判与主动干预的综合防控策略,有利于降低GICU患者MDRO医院感染发病率。     

巴氏杀菌对餐厨垃圾高温厌氧发酵的影响

通过对杀菌、未杀菌餐厨垃圾高温发酵对比试验的研究分析,阐述了餐厨垃圾杀菌处理对发酵的影响。杀菌方式为巴氏消毒法,温度70℃,持续时间10 min,接种物为德青源实验室自行培养的高温发酵菌,底物为餐厨垃圾,有机负荷5 gVS/L,污泥负荷(F/M)为0.5,试验持续32 d,结果显示:杀菌组累计产气量895 mL/gVS,未杀菌组累计产气量795 mL/gVS;杀菌样品产气速率高于未杀菌样品,其VS去除率略低于未杀菌样品。     

骨盆骨折患者住院日及预测因子分析

目的:分析上海市某三甲医院创伤中心骨盆骨折患者住院日及其预测因子。方法:抽取上海市第一人民医院南院创伤中心2013年全部62名骨盆骨折住院患者病历,对住院日进行单因素分析、相关分析和有序logistic回归。结果:研究对象中位住院日为19.00天。单因素分析显示受伤原因、骨盆骨折数、患侧和是否输血是住院日的预测因子(P0.05)。相关分析显示手术次数、手术时长、输血量、手术失血、检验次数、CT检查次数和超声检查次数分别与住院日存在相关关系(P0.05)。有序logistic回归表明手术次数、CT检查次数和手术失血量是住院日的独立预测因子(P0.05)。结论:骨盆骨折住院患者平均住院时间长,住院日主要受手术次数、CT检查次数和手术失血量影响,减少不必要的影像学检查和术中出血可缩短住院日。