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MAST方法采用人工文库的DNA标签序列鉴定mRNA的可接近位点。大量的标签序列通过扩增和克隆测序达到阐明mRNA结合位点图。设计了单一引物的PCR,其引物在标签序列两端结合搭桥,在扩增中DNA标签序列在搭桥引物的作用下进行连接,连接的标签序列再克隆和测序。十几条这样的连接产物包含了上千条标签序列。该PCR方法简单、高效以用于高通量的方式对标签序列测序。 相似文献
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目的: 真核细胞表达小鼠淋巴细胞抗原CTLA-4胞外段肽,研究表达肽段与抗原呈递细胞B7分子结合后减轻小鼠淋巴细胞刺激后的增殖抑制,从而启动T淋巴细胞进一步增殖。方法:从小鼠脾脏淋巴细胞获得总RNA,通过逆转录PCR扩增出CTLA-4全长基因,克隆并测序。依据胞外段序列和真核表达载体pcDNA3.1序列,合成引物扩增胞外片段,两者经内切核酸酶处理、连接构建重组表达pcDNA3.1载体,重组质粒经测序验证后,采用lipofectamine 2000转染入小鼠肝癌细胞Hepa1-6,经G418筛选获得稳定表达细胞株。结果:获得小鼠CTLA-4胞外段真核表达载体和小鼠肝癌细胞Hepa1-6稳定表达转染细胞株,制备了CTLA-4胞外肽段,经His标签抗体和小鼠CTLA-4抗体Western blot检测表达蛋白带均呈阳性。结论:获得CTLA-4胞外段肽,为进一步研究该肽的作用打下基础。 相似文献
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荒漠绿洲边缘不同粒径砂砾凝结水量 总被引:2,自引:0,他引:2
根据临泽荒漠绿洲边缘的凝结水观测数据,分析了砂砾粒径与凝结水形成量的关系。结果表明:粒径<0.02 mm的粉砂凝结量最大,7—10月日平均凝结量为(0.097±0.032) mm,其次是砂壤土,日平均凝结量(0.072±0.026) mm;而粒径为5.0~2.0 mm、2.0~0.2 mm和0.2~0.02 mm的砂砾凝结量较小,日平均凝结量分别为(0.052±0.021) mm、(0.057±0.018) mm和(0.059±0.016) mm。总之,凝结量随砂砾粒径的减小而增大,同时本文还分析了旱季农田砂土覆盖对土壤水分蒸发的抑制作用。 相似文献
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目的:枯草杆菌的包装RNA分子pRNA是新型纳米分子载体,将其同锤头型核酶Ribozyme重组可以构建结构稳定、能进入细胞、主动识别结合和剪切基因RNA的pRNA-Ribozyme.由于目前100 nt以上的RNA分子采用化学合成制备较为困难,实验采用基因重组构建并体外转录制备170 nt的pRNA-Ribozyme.... 相似文献
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【目的】通过对51个产甲烷古菌基因组中成簇的规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的组成和来源进行研究,推测产甲烷古菌与环境中其他微生物的物质交换和相互作用,在基因组水平上阐述产甲烷古菌之间的遗传差异。【方法】利用CRISPRdb和CRISPRFinder,找出产甲烷古菌基因组中所有潜在的CRISPR簇。对CRISPR簇的基本组成部分进行分析:利用BLASTCLUST对重复序列(Repeat)进行分类;分别将间隔序列(Spacer)与Refseq病毒基因组、Refseq质粒基因组和Refseq产甲烷古菌基因组进行比对,从而获得间隔序列的物种来源和功能信息的注释。【结果】在51个产甲烷古菌中共找到了196个CRISPR簇,这些CRISPR簇中包含了总共4 355条间隔序列。在这些产甲烷古菌中,CRISPR簇的分布是不均匀的,且每个物种的间隔序列数量与其CRISPR簇数量是不成正比的。在对重复序列进行分类之后,发现Mclu1是分布最广且最具代表性的一类重复序列。在4 355条间隔序列中有388条具有物种注释信息,266条具有功能注释信息。从CRISPR簇间隔序列的来源来看,产甲烷古菌曾受到来自Poxiviridae、Siphoviridae以及Myoviridae属病毒的攻击,并且产甲烷古菌之间存在比较广泛的遗传物质交换。【结论】产甲烷古菌基因组中的CRISPR簇在组成和来源上存在较大的差异,这些差异与它们的生存环境有较大的关系。从CRISPR簇的角度阐述了产甲烷古菌之间基因组序列的差异。 相似文献
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目的:比较研究巴西莓果粉Herbal Clean Energy和诺尼果粉Noni GIA通过消除自由基、降低造血细胞凋亡等作用对8Gy大剂量γ线照射后小鼠活存的影响。方法:将C57BL/6J小鼠随机分组、每组雌雄各半,单一果粉在相同灌胃剂量下采用照前灌胃10天、照后灌胃10天以及照前照后灌胃10天三种灌胃方式,首先观察了小鼠在用钴60γ线8Gy致死剂量照后40天活存率;其次在上述相同条件处理下,照后10天对小鼠外周血白细胞计数、CD4+和CD8+淋巴细胞类型、活性氧、骨髓造血细胞凋亡率等分析。结果:生理盐水灌胃组C57BL/6J小鼠受8Gy照射在第18天全部死亡(n=20,下同),死亡率100%,而照前10天灌胃后照射8Gy试验组:巴西莓和诺尼果粉组照后40天活存10/20只,诺尼果粉组第40天活存9/20,巴西莓果粉组第40天活存8/20。在照后灌胃的组别中,诺尼果粉组第40天活存7/20,巴西莓和诺尼果粉组第40天活存4/20只,巴西莓果粉组第40天活存2/20。照射前后单独或联合灌胃两种果粉组外周血白细胞均有升高,而骨髓造血细胞凋亡降低,而且果粉灌胃小鼠外周血Th/Tc比率同对照组相比明显保持于正常值范围。红细胞和血小板数据无明显变化,活性氧含量则呈现无规律表现。结论:巴西莓和诺尼果粉对小鼠抗辐射有预防作用,其细胞学表现为保持造血增殖能力、降低造血细胞凋亡,并维持Th/Tc免疫平衡;显示果粉对保持造血和免疫能力是提高抵抗辐射损伤、提高活存的基础。同时表明,服用巴西莓果粉和诺尼果粉,对人体防止辐射损伤有预防作用。 相似文献
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本文报道产于沱江的大口鲇Silurusmeridionalis成鱼阶段食性和生长等生物学资料。食物以鱼类为主,4龄前生长迅速,体长与体重相关关系方程式为:W=11.5509BL2.9801,r=0.9914,原因可能与沱江饵料丰富有一定关系。 相似文献
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生长抑素在齐口裂腹鱼消化道和脑中的定位 总被引:3,自引:0,他引:3
采用链霉亲合素一生物素过氧化物酶复合物免疫组化法研究生长抑素(Somatostatin,Som)在齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)脑和消化道中的定位。在消化道中,口咽腔和食道为阴性反应;肠道有Som强阳性细胞,其中前肠密度最高,后肠最低。这些Som阳性细胞多分布于粘膜上皮,形态多样。肠道巨噬细胞呈Som强阳性反应。Som广泛分布于各脑区的神经元或神经纤维中,呈弱或强阳性反应,其中下丘脑下叶乳头体内Som阳性细胞密度最高,背嗅核、侧嗅核、原始纹体、视前核、内嗅沟旁、缰核下区、前丘脑核、前圆核、下丘脑中叶、下丘脑下叶、中脑室侧次之;小脑分子层和延脑VI、V核较少。端极和脑上腺有阳性神经纤维。这说明Som在肠道中的分布与该鱼食性、消化道结构和功能密切相关;Som在下丘脑中的分布特点为鱼类GH调控提供了形态学证据;Som在脑中广泛分布,提示可能作为一种神经递质或调质,发挥更为广泛的生理功能。 相似文献
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目的:在细胞培养下检验加入龙脑液诱导癌细胞凋亡的作用.方法:采用人鼻咽癌、肺鳞癌、肺腺癌,乳腺癌细胞和正常细胞株,保持细胞正常培养基浓度下,用不同浓度稀释的龙脑液培养细胞,培养不同时间用四唑盐(MTT)比色试验观察龙脑液对癌细胞增殖的影响,采用细胞涂片染色观察细胞死亡性质,在流式细胞仪分析其凋亡率和性质.结果:二倍稀释浓度的龙脑液能快速导致癌细胞凋亡,四倍稀释浓度的龙脑液培养,均有细胞凋亡发生,凋亡程度从高到底依次为肺鳞癌、肺上皮癌和鼻咽癌,正常细胞293T则只有基础水平的凋亡发生;在撤出龙脑液回到正常培养环境下正常细胞能较快恢复到正常生长状态,而癌细胞则在一定时间内继续发生凋亡.在形态学上出现胞膜起泡或出芽,染色质凝聚分裂、细胞质减少,细胞碎片化等.早期细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻明显导致细胞凋亡,也通过Caspases3凋亡通路变化而引起癌细胞凋亡.结论:龙脑对癌细胞有促凋亡作用. 相似文献