IGFBP3通过癌旁脂肪细胞促进肾癌细胞生长与转移的作用研究

目的:探讨肾透明细胞癌的分泌蛋白IGFBP3对癌旁脂肪细胞分化的作用及通过脂肪细胞促进肾透明癌细胞生长与转移的作用。方法:通过肾细胞癌的基因数据库发现过表达的基因IGFBP3,免疫组化和RT-PCR确认IGFBP3在标本中的表达。RT-PCR和Western Blot检测IGFBP3对脂肪细胞分化成熟特征标志物表达的影响。以过表达IGFBP3的786-O细胞为模型,Western Blot检测IGFBP3的促脂肪细胞分化作用与TGFβ-smad1/5/8及TGFβ-p38MAPK信号通路的关系。将过表达IGFBP3的786-O细胞与脂肪细胞共培养得到条件培养基,通过油红染色检测条件培养的肾癌细胞中脂滴含量,迁移实验和CCK8实验分别检测脂肪细胞对肾癌细胞侵袭性及增殖的影响。结果:相较于正常组,肾癌标本中IGFBP3的表达增加(P=0.017)。IGFBP3使脂肪细胞分化成熟相关标志物PPARγ、PGC1α、c/EBPα、Prdm16、UCP1表达增加。以IGFBP3处理脂肪细胞时,可以增加TGFβ下游蛋白表达水平,30 min后p-smad1/5/8表达增加(P=0.024),60 min后p-p38MAPK表达明显增加(P=0.013)。条件培养后的786-O细胞内的脂滴形成增加(P=0.028),脂肪细胞促进786-O细胞的增殖和迁移能力。结论:IGFBP3是肾透明细胞癌中过度表达的蛋白,能够促进前脂肪细胞分化,其机制主要通过激活TGFβ通路中的smad1/5/8、p38MAPK。成熟的脂肪细胞能够促进肾癌细胞质脂滴形成,并且促进肿瘤的增殖、提高肿瘤的侵袭性。     

Eritoran对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察eritoran对大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型的.方法:建立SD大鼠缺血再灌注模型,给予eritoran治疗而对照组给予生理盐水治疗,观察各组的肾功能情况、肾组织光镜病理,并采用核糖核酸酶保护测定检测肾组织炎症因子/趋化因子的表达.结果:与模型组相比,eritoran预处理可显著改善大鼠的肾功能,减轻缺血再灌注引起的肾小管损伤,减轻肾组织病变,减少肾组织单核细胞浸润并下调多种炎症因子的表达(TNF-α,IL-6,IL-1β和MCP-1).结论:本研究证实通过eritoran抑制Toll样受体4,可减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的炎症反应,减轻肾脏缺血再灌注损伤,eritoran可望成为肾脏I/R损伤的新治疗手段.     

Spautin-1通过抑制自噬可增强舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡

目的:研究spautin-1(一种自噬抑制剂)是否能抑制舒尼替尼诱导的肾癌细胞的自噬以及对舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡的影响。方法:以肾癌细胞系786-O细胞为模型,Western Blot检测spautin-1对舒尼替尼诱导786-O细胞自噬的影响;Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测spautin-1和舒尼替尼对786-O细胞增殖的影响;应用流式细胞术,检测spautin-1对舒尼替尼诱导的786-O细胞凋亡的影响;Western Blot检测spautin-1的促凋亡作用与PI3K/AKT/GSK3β信号通路及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的关系。结果:与舒尼替尼单独处理组相比,spautin-1能通过降低Beclin-1的表达显著抑制舒尼替尼在786-O细胞中诱导的自噬;Spautin-1和舒尼替尼联合作用明显增强舒尼替尼对786-O细胞增殖的抑制作用;Spautin-1能进一步增强舒尼替尼诱导的786-O细胞的凋亡;Spautin-1和舒尼替尼联合处理786-O细胞时,可以显著降低p-AKTSer473和p-GSK3βSer9的蛋白表达水平,增强GSK3β的活性,进而下调Bcl-2、Mcl-1的表达。结论:Spautin-1能通过抑制AKT活性并活化GSK3β,进一步降低抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1的表达,增强舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡。