重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶的表达条件优化

通过设计正交实验,考察了培养基中各组分及其浓度对右旋糖酐蔗糖酶工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET28-dexYG诱导产酶结果的影响。在获得最佳培养条件的基础上,考察温度、蔗糖浓度和pH值对右旋糖酐产量的影响。结果表明:菌浓OD600达到2.0时,加入异丙基硫代-β-D-呋喃半乳糖苷(IPTG)至0.25mmol/L,25°C诱导培养4h,产酶活力最高,达到110.16U/mL,蔗糖浓度对产量的影响比较显著。研究结果得到高效表达的培养条件,为实现该酶的工业化应用打下了基础。     

Construction and characterization of a bacterial artificial chromosome library of thermo-sensitive genie male-sterile rice 5460S

In order to develop a detailed physical map of the thermo-sensitive genie male-sterile (TGMS) gene-encompassing region and finally clone the TGMS gene, a high-quality rice bacterial artificial chromosome (BAC) library from TGMS rice 5460S was constructed. The method of constructing BAC library was examined and optimized. The 5460S library consists of 19 584 BAC clones with an average insert size of 110 kb, which represents about 5 times rice haploid genome equivalents. Rice inserts of up to 140 kb and 250 kb were isolated and appeared stable after 100 generations of serial growth. Hybridization of BAC clones with mitochondrial and chloroplastic genes as probes demonstrated that this library has no organellar contamination. The 5460S library was screened with 3 molecular markers linked to tmsl gene as probes and at least 1 BAC clone was identified with each probe. The insert ends of positive clones were successfully isolated using thermal asymmetric interlaced PCR (TAIL-PCR) technique.     

水溶性甘草多糖的分离纯化、结构及生物活性研究进展

甘草是广泛使用的中药材之一.甘草中含有多种活性物质,甘草多糖作为主要的活性大分子,具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗补体以及免疫调节等生物活性.本文对近年来水溶性甘草多糖的分离纯化、结构解析以及生物活性研究的最新进展进行综述.     

温敏核不育水稻5460S细菌人工染色体文库的构建和鉴定

为了构建温敏核不育 (TGMS)基因区域的精细物理图谱并最终分离TGMS基因 ,以温敏核不育水稻 5 46 0S为材料 ,摸索优化了构建植物细菌人工染色体 (BAC)文库的方法 ,构建了一个高质量的BAC文库 .该文库由 1 95 84个克隆构成 ,插入片段平均长度为 1 1 0kb ,相当于水稻单倍体基因组大小的 5倍 ;以分子量分别为 1 40和2 5 0kb的 2个大BAC克隆进行稳定性传代实验 ,经 1 0 0代传代后其插入的DNA片段仍然稳定存在 ;以线粒体和叶绿体基因为探针筛选BAC文库 ,未检验出叶绿体和线粒体DNA的污染 ;以和tms1基因连锁的 3个分子标记作为探针对BAC文库进行了筛选 ,每个探针至少可获得一个阳性克隆 ,利用热不对称性交错PCR(Tail PCR)法成功分离了阳性克隆的左右末端序列 .     

优良水稻品种“明恢63”BAC文库的构建

“明恢６３”是我国许多重要的水稻杂交组合中的恢复系。为了对其进行深入的遗传学研究以及克隆控制重要农艺性状的基因,以细菌人工染色体（ｐＢｅｌｏＢＡＣ１１）为载体,克隆经限制性内切酶消化后部分收集的“明恢６３”基因组ＤＮＡ,将连接混合物转化细菌ＤＨ１０Ｂ,构建了细菌人工染色体（ＢＡＣ）文库。该文库共有２６０００个转化子,插入片段为９０～２４０ｋｂ,平均大小为１５０ｋｂ。经计算该文库覆盖９倍水稻基因组。该文库正在用于构建几个基因所在区段的物理图谱,为图位克隆打下基础     

基于右旋糖酐蔗糖酶转糖基作用的槲皮素葡萄糖苷的合成研究

右旋糖酐蔗糖酶是一种以蔗糖为唯一底物,将蔗糖分子中D-葡萄糖基催化转移到受体分子上的葡萄糖基转移酶。利用右旋糖酐蔗糖酶的转糖基作用,以蔗糖为葡萄糖糖基供体,槲皮素为糖基受体,对槲皮素糖苷的酶法合成进行了探索。通过对该酶催化反应体系、催化反应条件及产物分析的研究,结果表明：在25℃下,右旋糖酐蔗糖酶能够在30％DMSO-70％乙酸-乙酸钙（0.02 mol/L,pH值5.4）的反应体系中催化合成一种槲皮素葡萄糖苷,在这个反应体系下,以10％的蔗糖作为糖基供体,槲皮素为糖基受体,右旋糖酐蔗糖酶活力为40 U/mL,转速为150 r/min,槲皮素糖苷的转化率最高,可达39.5％。通过质谱分析确定是一种槲皮素单糖苷,分子量为464。该研究结果为黄酮类物质的糖基化修饰奠定了基础。     

诱变选育雄烯二酮高产菌株及其发酵条件研究

以一株降解植物甾醇产生雄烯二酮的分枝杆菌为研究对象,先后利用亚硝基胍(NTG)和N+注入技术对其进行诱变处理。通过考察NTG浓度和N+注入剂量对菌株诱变效果的影响,确定了最佳诱变条件为NTG浓度为0.6 mg/mL,N+注入剂量为60×1011ions/cm2。最终选育出一株高产突变株Mycobacterium sp.N-2,其生产雄烯二酮的能力较出发菌株提高了37.8%,且传至第七代仍基本稳定。进一步研究了初始pH值、接种量和摇床转速等对高产突变菌株发酵能力的影响,确定了最佳发酵条件为初始pH值7.5,接种量12%,摇床转速260 r/min。     

一株产右旋糖酐酶青霉的分离及酶的纯化和性质

[目的]从土壤中筛选到一株新的产右旋糖酐酶的真菌F1001,为酶法制备药用级右旋糖酐提供新的右旋糖酐酶产生菌株.[方法]通过形态特征和ITS rDNA序列分析方法鉴定菌株.利用硫酸铵盐析、Sepharose 6B凝胶柱纯化,得到纯度较高的酶蛋白.以右旋糖酐70 kDa为底物,对右旋糖酐酶酶学性质及催化机理进行研究.[结...     

右旋糖酐酶研究进展

右旋糖酐酶是一种将高分子右旋糖酐催化降解为低分子量多糖的水解酶。该酶及其催化产物在医药、食品、化工等工业领域具有重要的应用价值与广泛的工业用途,因此近年来国内外对右旋糖酐酶的研究逐渐增多。结合文献记载及本实验室研究成果,对右旋糖酐酶的研究进展及其工业应用进行综述,并对当前有关该酶研究的热点和重点、国内右旋糖酐酶研究存在的问题以及未来的研究趋势提出了见解。     

α-氨基酸酯酰基转移酶表达纯化、酶学性质及其催化应用

α-氨基酸酯酰基转移酶(α-amino acid ester acyltransferase,AET)能够催化底物L-丙氨酸甲酯盐酸盐、L-谷氨酰胺合成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine,丙谷二肽)。利用重组大肠杆菌saet-QC01表达α-氨基酸酯酰基转移酶,对其表达条件进行了优化,通过Ni-NTA亲和层析法分离纯化重组蛋白,并对其酶学性质、催化应用进行了研究。适合酶表达的诱导条件:温度20℃,诱导阶段(OD_(600)=2.0-2.5),IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导时间12 h。α-氨基酸酯酰基转移酶的最适反应温度27℃,最适pH 8.5,在pH 7.0-8.0很稳定,在酸性条件下相对稳定,低浓度的Co~(2+)、低浓度的EDTA对酶活有促进作用。在底物浓度丙氨酸甲酯盐酸盐600 mmol/L、谷氨酰胺480 mmol/L,丙谷二肽的产量达到78.2 g/L,生产速率达到1.955 g/(L·min),转化率达到75.0%。α-氨基酸酯酰基转移酶具有良好的酸碱耐受性,催化效率高的优良特性,在工业生产中具有较好的应用潜力。