ESBLbla SHV-12基因片段的克隆和序列分析

分析黑龙江省分离的肺炎克雷伯菌产超广谱 β 内酰胺酶基因片段的序列 ,确定该基因所产ESBLs的亚型。用双纸片法初筛检测产ESBLs菌株 ,聚合酶链反应扩增ESBLs编码基因片段 ,并将其克隆至pUC19载体中 ,双脱氧链终止法测定核苷酸序列以确定亚型。测序结果证实所获得的ESBLs基因片段含10 4 7个核苷酸 ,其基因型为SHV型 ,与SHV 12型ESBLs编码基因相同。上述结果表明 ,黑龙江省内分离的产超广谱 β 内酰胺酶肺炎克雷伯菌含有SHV 12编码基因。     

哈尔滨地区假丝酵母菌DNA异质性及药物敏感性分析

研究假丝酵母菌的DNA异质性及药物敏感性,为预防和监控院内假丝酵母菌感染奠定基础。将临床分离的假丝酵母菌菌株,用科玛嘉显色培养基鉴定菌种,经纸片扩散法进行药敏试验,应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对这些菌株进行基因分型。结果显示：93株假丝酵母菌中白假丝酵母菌68株,非白假丝酵母菌25株,所有菌株对制霉菌素,两性霉素B两种药物的敏感率最高（100％）,酮康唑其次（70．9％）,氟康唑的敏感率最低（50．5％）,引物1和引物2将来源不同的68株白假丝酵母菌分别分成4型（A1、B1、C1、D1）和6型（A2、B2、C2、D2、E2、F2）。哈尔滨地区的假丝酵母菌感染以白假丝酵母菌为主,且主要为A1、B1型（引物1）或A2、B2型（引物2）;基因型与药敏谱无明显相关性。     

产ESBL克雷伯菌与大肠埃希菌质粒分布的初步研究

比较产超广谱 β 内酰胺酶克雷伯菌与大肠埃希菌质粒的表型与分布。用BlaTEM引物经PCR技术将 5 1株克雷伯菌与 2 9株大肠埃希菌编码产超广谱 β 内酰胺酶的质粒扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分离目的片段后得到完整的质粒电泳图谱。克雷伯菌与大肠埃希菌存在有相同大小的产超广谱 β 内酰胺酶的质粒。 2种细菌有产ESBL相同质粒 ,PCR技术可用于产超广谱 β 内酰胺酶细菌质粒的分析。     

采用RAPD分析臭鼻克雷伯菌临床菌株的基因型

臭鼻克雷伯菌是重要的条件致病菌 ,常引起老人及婴幼儿重症护理病房的交叉感染及爆发流行 ,对其进行流行病学监测有重要的医学意义。用随机引物聚合酶链式反应 (RAPD)对 37株臭鼻克雷伯菌临床菌株基因组DNA进行分型 ,分析扩增产物的指纹图谱。实验结果表明 ,37株臭鼻克雷伯菌RAPD后可出现不同的指纹图谱 ,根据特异泳带C ,J ,F ,Q的有无 ,可将其分 7型 (I～VII)。RAPD可用于检测臭鼻克雷伯菌基因组DNA的异质性 ,是医院内感染分子流行病学研究的好方法。     

常规培养与缺氧条件下BCG菌体内外sRNA的表达检测

近期发现细菌的sRNA在菌体内和菌体外均具有一定的生物学功能。为研究结核分枝杆菌菌体内外sRNA的表达情况,通过分析卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin Vaccine, BCG)菌体和外泌体RNA测序结果,采用RT-qPCR法检测常规培养与缺氧条件下BCG菌体内外sRNA相对表达量,分析菌体内外sRNA谱的差异。结果显示,常规培养时,菌体内丰度较高的sRNA为MTS2823、MTS1338与ASdes,菌体外丰度较高的为Mcr3、MTS2823和AS1890。菌体内受缺氧诱导表达增加的是MTS2823、MTS1338、MTS0997和G2。其中MTS1338与G2的启动子区发现了DosR的结合基序。无论是否缺氧,MTS0997、G2、Mcr7和AS1890在菌体外的相对表达量均高于菌体内,而C8只在缺氧时菌体外表达增高。研究揭示了BCG菌体内外sRNA表达谱不同,且一部分sRNA在常规培养和缺氧应激时向菌体外释放,同时发现了细菌受缺氧诱导的sRNA种类。     

高通量测序技术在阴道感染性疾病的病原鉴定及诊断中的应用

阴道感染性疾病是育龄妇女最常见的妇科疾病,其主要的类型有细菌性阴道病和外阴阴道假丝酵母菌病。目前的临床诊断主要包括病原体的显微镜观察以及病原体代谢物的检测等,但因其诊断阳性率低、敏感性低等限制,导致抗感染药物选择困难、治愈率低、复发率高等。本综述在比较阴道感染性疾病,特别是细菌性阴道病以及外阴阴道假丝酵母菌病临床常见诊断方法的基础上,介绍了高通量测序技术在细菌性阴道病和外阴阴道假丝酵母菌病的病原体鉴定及诊断中的应用,以期为阴道感染性疾病的诊断、治疗及愈后提供实验依据。     

norD对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响

目的探究norD编码的超家族转运蛋白NorD对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响。方法使用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MW2野生株和norD基因缺失株及norD互补菌株,微孔法培养形成生物膜,同时使用番红染剂对形成的生物膜染色,通过酶标仪检测特定波长下的A值,对细菌生物膜形成定量分析。结果常规培养时,MW2野生株和MW2 norD缺失株生物膜的形成比较差异无统计学意义(P0.05)。低Fe~(2+)离子环境下,MW2 norD基因缺失株培养48h,生物膜形成的量少于MW2(t=3.878,P=0.0082)。结论MW2 norD基因缺失株在低Fe~(2+)离子环境下引发生物膜分解,提示NorD可促进Fe~(2+)离子环境下生物膜的形成。     

肺炎克雷伯菌临床分离株的庆大霉素耐药性和细菌铁载体的作用

目的研究临床分离的肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素庆大霉素的耐药性与其产铁载体的关系。方法采用K-B纸片法和肉汤稀释法确定70株临床分离的肺炎克雷伯菌对庆大霉素的药物敏感性;CAS琼脂实验检测肺炎克雷伯菌是否产铁载体;紫外可见分光光度法确定细菌产铁载体的量,根据中位数法将70株临床分离菌分为铁载体高产组(35株)和低产组(35株);应用SPSS统计学软件分析抗生素耐药性与其产铁载体是否相关。结果药物敏感性试验检测出菌株对庆大霉素的耐药率为50.00%(35/70);铁载体检测实验确定70株肺炎克雷伯菌均产生铁载体,肺炎克雷伯菌对庆大霉素的耐药性与铁载体产量呈正相关关系(r=0.3154,P0.05),对庆大霉素耐药菌株铁载体产量明显高于敏感菌株(t=3.1650,P0.05),且铁载体高产组耐药率及lgMIC值明显高于低产组(x~2=9.6570,t=3.1360,P0.05)。结论 70株临床分离的肺炎克雷伯菌均产生铁载体,铁载体可能参与肺炎克雷伯菌对庆大霉素的耐药,干扰庆大霉素的抑菌或杀菌过程。     

肺炎克雷伯菌gyrA基因与parC基因的突变研究

目的探讨肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性,及对喹诺酮敏感和耐药菌株中gyrA与parC基因的突变情况。方法收集肺炎克雷伯菌临床分离株231株,采用K-B纸片法测定肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的敏感性,随机选取对环丙沙星和左氧氟沙星均耐药菌株4株和均敏感的菌株3株,分别PCR扩增gyrA基因和parC基因的耐药决定区,扩增片段长度分别为625、319bp,PCR扩增产物经纯化后测序并做序列分析。结果肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为51.1%（118/231）和45.9%（106/231）;gyrA和parC基因经序列分析显示,耐药株均有gyrA基因的突变,其中1株出现第83、87和27位氨基酸的改变,2株出现第83位氨基酸的改变,1株出现第47位点的改变;环丙沙星敏感株中未出现gyrA基因的突变。4株耐药株均有parC基因的突变,引起相应氨基酸Ser80→Arg的改变,2株环丙沙星敏感株也发生了同样的改变。结论哈尔滨地区肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药性显著,在喹诺酮耐药株中有gyrA和parC基因的同时突变,在敏感株中也发现了parC基因的突变。     

聚乙二醇小檗碱液对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌生长的抑制作用

目的 明确聚乙二醇小檗碱液在琼脂培养基表面的抑菌特点,及其对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的标准菌株、抗生素敏感菌株与多重耐药菌株生长的抑制作用,研究评价药物在皮肤黏膜表面的抑菌作用的合理实验方法.方法 以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌(标准菌株、抗生素敏感菌株和多重耐药菌株)为研究对象,用常量肉汤稀释法测定聚乙二醇小檗碱液的最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC);用平皿琼脂培养法和试管肉汤培养法测定不同浓度聚乙二醇小檗碱液的抑菌作用.结果 在不同浓度的聚乙二醇小檗碱液的作用下,在琼脂培养基表面上或肉汤培养基中细菌的生长受到明显抑制,抑制作用与小檗碱浓度正相关,且对抗生素敏感菌株和多重耐药菌株的抑制作用差异无统计学意义;聚乙二醇小檗碱液在平皿琼脂表面和试管肉汤中对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌抑制100％菌株的浓度分别为1 500和375 mg/L、1 500和375 mg/L.聚乙二醇小檗碱液在琼脂培养基表面的抑菌作用明显低于在肉汤培养基中的抑制作用,在琼脂培养基表面的抑菌浓度是肉汤培养基中的抑菌浓度的4倍.并且金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌之间差异无统计学意义.聚乙二醇小檗碱液必须达到肉汤培养基中4倍以上浓度时,才能获得抑制100％细菌在琼脂培养基表面生长的效果.结论 高浓度的聚乙二醇小檗碱液可以抑制皮肤黏膜表面的细菌,包括抗生素耐药菌株的生长;皮肤黏膜表面应用聚乙二醇小檗碱液的适宜浓度为1 500 mg/L.琼脂培养基法适用于评价药物在皮肤黏膜表面的抑菌作用.