云南干热河谷地区种子植物资源与开发利用初探

云南干热河谷植被均为耐旱的旱生植被,主要有以下三种类型：1）半稀树草原（Semi-savanna）型植被;2）肉质多刺灌丛;3）在金沙江上游滇西北的亚热带性的干热河谷地区分布着类似马基(Maquis-like）型的多刺小叶矮生灌丛。按其产物和用途可分为6类：药用植物、纤维植物、树脂和树胶植物、芳香油植物以及淀粉植物等。资源破坏性开发和环境的变化,使现存资源的保护和开发利用成为目前的主要问题。     

蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2基因的克隆

从蝮蛇毒腺中抽提总ＲＮＡ．利用人工合成寡核苷酸引物作逆转录,以ｃＤＮＡ为模板进行体外扩增,获得磷脂酶Ａ２（简称ＰＬＡ２）基因,克隆至ｐＢＳ－ｋｓ载体中。通过对３个碱性ＰＬＡ２（简称ＢＰＬＡ２）基因单独克隆分别作ＤＮＡ全序列分析,推导ｐｒｏ－ＢＰＬＡ２由１３８个氨基酸残基构成,与已测定的部分氨基酸序列比较,基本相符。该基因成功的克隆,不仅推导出ＢＰＬＡ２的蛋白质全序列,也为进一步开展蛇毒功能肽蛋白质工程的研究工作打下了良好的基础。     

日本血吸虫虫卵、童虫和雌雄成虫膜蛋白的双向电泳

血吸虫寄生生活复杂,中间宿主和终末宿主转换,有性繁殖和无性繁殖交替,由其感染引起的血吸虫病仍严重危害人畜健康(陈贤义等,2002).研究表明,血吸虫不仅能利用宿主的免疫信号分子伪装自己获得宿主的免疫兼容(Salzet et al.,2000),而且还在血吸虫中克隆到宿主信号分子的受体(Ahmed et al.,2001).     

日本血吸虫真核翻译起始因子5基因的cDNA克隆和免疫保护功能分析

利用抑制削减杂交法筛选日本血吸虫雌雄虫差异基因,从中获得真核翻译起始因子5基因(eIF5)的 表达序列标。对该序列进行生物信息学分析:对其5’端进行电子延伸,获得含完整开放阅读框的cDNA序列 (AY686501)。将其亚克隆到表达载体pET-28c,进行重组表达。免疫保护效果实验表明,重组表达蛋白具有显著 抑制血吸虫卵在寄主肝脏中的沉积效果。     

编码日本血吸虫抱雌沟蛋白及肌动蛋白的基因性别间的表达差异性

研究了所克隆的日本血吸虫两个基因的性别间的表达差异性。分别将所克隆到的编码日本血吸虫抱雌沟蛋白的cDNA(SjGCP1)和肌动蛋白的cDNA(SjAct)制成DNA探针,利用Southern blotting,Northern blotting和斑点印迹法对其相应基因性别间的表达差异性进行了研究。结果显示,日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因在雄虫中转录而雌虫中不转录,血吸虫肌动蛋白基因在雄虫中转录量高于雌虫,表现出转录量的差异。证明这两个基因转录具有性别间的表达差异性。     

日本血吸虫中国大陆株21.7kD蛋白编码基因的克隆和表达

根据日本血吸虫菲律宾株编码21.7kD蛋白的基因设计引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR法扩增出大小为558bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段为编码日本血吸虫中国大陆株21.7kD蛋白基因的完整阅读框,与菲律宾株该基因的碱基序列同源性为98%。将其克隆到表达载体pET28a(+)中,在大肠杆菌BL21中获得表达,融合表达产物分子量约为25.4kD。利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western印迹检测,在预测位置出现了明显的识别条带,说明该基因的表达产物具有抗原性。     

厚朴叶和皮不同提取部位的药理作用比较研究

通过小鼠最大耐受量测定法进行厚朴叶的急性毒性研究,采用小鼠浓氨水引咳法、炭末推进法对厚朴叶和皮不同溶剂部位提取物的镇咳和胃肠推进作用进行了比较研究。结果显示厚朴叶小鼠最大耐受量为112g/kg,为厚朴成人每日用量的747倍,且7日内均未出现中毒和死亡现象。厚朴叶石油醚提取部位低剂量组、厚朴皮乙醚提取部位低剂量组和石油醚提取部位能明显延长氨水致小鼠咳嗽潜伏期或减少咳嗽的频率。同时,厚朴叶乙醚提取部位低剂量组能明显提高炭末在小肠中的推进率,厚朴皮乙醚提取部位低剂量组能显著减少炭末在胃中的残留率。以上结果表明:在实验剂量范围内,厚朴叶几无毒性;其低剂量的石油醚和乙醚提取部位有较强的镇咳和胃肠推进效果。提示其药用价值有深入研究的必要。     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A2中的色氨酸荧光

以往有关江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A2(下文称N-PLA2)氨基酸组成和一级结构的研究均没有报道过该酶含有色氨酸残基。最近我们用荧光光谱学方法研究了该酶,非常肯定地观察到该酶具有色氨酸特征的荧光,特作简要报道如下:     

钙离子对江浙蝮蛇蛇毒中性磷脂酶A2溶液构象的研究

用荧光光谱方法研究了钙离子对江浙蝮蛇毒中性磷脂酶Ａ２（简称ＮＰＬＡ２）构象的影响。结果表明,Ｃａ２＋能使酶中唯一的色氨酸残基的荧光增强：只有在Ｃａ２＋存在时,底物卵磷脂才明显改变酶分子中Ｔｒｐ周围的环境,使其光谱的兰移达７ｎｍ,荧光增强约一倍：酶中唯一的Ｈｉｓ残基被修饰以后,则没有上述两种现象发生;结合在ＮＰＬＡ２上的ｂｉｓＡＮＳ的荧光强度,随Ｃａ２＋浓度的增加而增强,提示Ｃａ２＋对ｂｉｓ－ＡＮＳ结合区域的构象有明显影响。