成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞分离及培养的优化方案

目的:摸索及优选成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定的实验方法。方法:将成年SD大鼠心脏剪成小组织块,采用以下四种方案(A:0.08%胰酶+0.1%胶原酶II消化15 min,B:0.2%胶原酶II消化15 min,C:0.2%胶原酶II消化60min,D:0.2%胶原酶II消化90 min)提取成年大鼠心脏原代成纤维细胞,再通过差速贴壁分离方法培养原代成纤维细胞。采用倒置显微镜观察成纤维细胞的基本形态特征,并进行Vimentiin免疫荧光染色对培养的原代细胞进行荧光鉴定;采用台盼兰染色对培养的原代成纤维细胞存活率进行鉴定;采用细胞计数对培养的成纤维细胞生长趋势进行鉴定。结果:四种方法均能培养成纤维细胞,但单酶消化60 min可一次性提取较多细胞,并且细胞状态佳,3 d即可传代。72 h成纤维细胞Vimentin免疫荧光染色阳性率高达97%。台盼兰染色可见其细胞死亡率明显降低,并且细胞计数可见细胞生长状态极佳。结论:单酶消化60 min是提取成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞的高效、快速、稳定的实验方法,为心脏疾病的基础及临床研究提供了较为理想的细胞学实验模型。     

中国汉族两个马凡综合征家系FBN1基因的一个新插入突变和一个复发点突变

目的:明确两个中国北方汉族马凡综合征(Marfan syndrome,MFS)家系的临床特点,并对其进行基因诊断。方法:对两个家系进行家系调查和系谱分析,应用聚合酶链式反应-DNA测序方法对原纤维蛋白1基因(Fibrillin-1,FBN1)的所有外显子进行测序。应用Swiss-model、Polyphen-2和SIFT软件对发现的变异位点进行功能预测。结果:两个家系均呈常染色显性遗传特点,在家系1患者中发现一个新的插入突变,即第13外显子1691位碱基处插入碱基A(1691 ins A),导致蛋白在第571位氨基酸处翻译提前终止。此外,在家系2患者中发现一个已知的点突变,即第27外显子第3463位碱基由G变为A(3463 GA),导致第1155位氨基酸由天冬氨酸变为天冬酰胺。这两个变异位点在家系的健康人及50例健康对照中均未出现。功能预测发现这两个变异位点均可能会影响FBN1蛋白的结构或功能。结论:在两个MFS家系中发现一个新插入突变位点(1691 ins A)和一个已知点突变位点(3463 GA),为扩大FBN1基因的突变谱及进一步阐明FBN1基因突变在MFS中的作用提供理论依据。     

黄芪水提取物减轻高脂饮食引起的小鼠肥胖

目的:研究黄芪水提取物(Astragalus radix extract,ARE)对高脂饮食(High fat diet,HFD)引起的小鼠肥胖的作用及可能机制。方法:将30只C57 BL/6小鼠随机分为正常喂养组(ND组,n=10)、高脂喂养组(HFD组,n=10)和高脂喂养+黄芪水提取物处理组(ARE组,n=10)。记录三组小鼠体重及食物摄入。在喂养16周时,对小鼠附睾白色脂肪称重,并进行HE染色观察脂肪细胞大小;对小鼠肝脏进行进行HE染色观察肝脏脂肪变性情况。应用ELISA方法检测血清瘦素及脂联素水平。应用Western Blot检测脂肪组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)表达。结果:1与ND组相比,HFD组体重及热量摄入均显著增加,表明肥胖模型建立成功;ARE处理组的体重较HFD组显著下降,但其热量摄入与HFD组相当。2与ND组相比,HFD组白色脂肪组织重量增加、脂肪细胞增大、肝细胞出现显著脂肪变性;ARE处理组上述指标较HFD组明显改善。3与ND组相比,HFD组瘦素水平升高、脂联素水平下降;ARE处理组与HFD组相比,瘦素水平降低、脂联素水平升高。4与ND组相比,HFD组PPARγ表达显著增加,而ARE处理组较HFD组PPARγ表达下降。结论:黄芪水提取物可能通过抑制PPARγ减轻高质饮食引起的肥胖。     

衰弱对老年射血分数保留的心力衰竭患者左室舒张功能、认知功能和跌倒风险的影响

摘要 目的：观察衰弱对老年射血分数保留的心力衰竭（HFpEF）患者左室舒张功能、认知功能和跌倒风险的影响。方法：选择2021年1月至 2022年11月期间西安交通大学第一附属医院收治的176例老年HFpEF患者。根据衰弱情况将患者分为非衰弱组（n=92）、衰弱前期组（n=48）、衰弱组（n=36）。对比三组左室舒张功能[左心室射血分数（LVEF）、二尖瓣Ｅ峰血流速度（E）/二尖瓣Ａ峰血流速度（A）、左室收缩末期内径（LVESD）、E/二尖瓣环间隔侧和侧壁侧平均组织多普勒速度（e''）、左室舒张末期内径（LVEDD）]、认知功能[简易智能精神状态检查量表（MMSE）、蒙特利尔认知评估量表（MoCA）]、跌倒风险[汉化的预防老年人意外、死亡、伤害工具（STEADI）评分]以及心脏不良事件总发生率。结果：三组LVEF、LVEDD、LVESD、E/A组间对比未见统计学差异（P>0.05）。衰弱组、衰弱前期组的E/e''高于非衰弱组，且衰弱组高于衰弱前期组（P<0.05）。衰弱组、衰弱前期组的MMSE、MoCA评分低于非衰弱组，且衰弱组低于衰弱前期组（P<0.05）。衰弱组、衰弱前期组的跌倒风险评分高于非衰弱组，且衰弱组高于衰弱前期组（P<0.05）。衰弱组、衰弱前期组的心脏不良事件总发生率高于非衰弱组，且衰弱组高于衰弱前期组（P<0.05）。结论：衰弱可在一定程度上影响老年HFpEF患者左室舒张功能，降低患者的认知功能，增加跌倒风险和心脏不良事件总发生率。     

MicroRNA-495对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:探讨MicroRNA-495(miR495)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响。方法:体外分离培养HUVECs,将HUVECs铺至6孔板中,待细胞融合至80%时,将miR495模拟物(miR495 mimics)、miR495抑制剂(miR495 inhibitor)及其相应的对照negative control(NC)、inhibitor NC分别转染到6孔板的HUVECs中,于转染后不同时间点(12 h、24 h和48 h)收集细胞进行RNA及蛋白提取。荧光定量PCR方法检测HUVECs中miR495及ICAM-1基因mRNA表达。Western blotting检测HUVECs中ICAM-1蛋白表达。结果:(1)与NC相比较,miR495 mimics组中miR495水平显著升高;与inhibitor NC组比较,miR495 inhibitor组中miR495表达明显下降。(2)与NC组比,miR495 mimics组明显降低HUVECs中ICAM-1的mRNA及蛋白表达;与inhibitor NC组比,而miR495 inhibitor组能显著增加HUVECs中ICAM-1的m RNA及蛋白表达。结论:MiR495能降低HUVECs中ICAM-1基因mRNA和蛋白表达。     

不同盐浓度对盐敏感性高血压肾脏纤维化及巨噬细胞浸润的影响

目的:探讨不同盐浓度对盐敏感高血压肾脏纤维化及及巨噬细胞浸润的影响。方法:将6周龄Dahl盐敏感大鼠随机分为正盐组(0.3%氯化钠)、4%氯化钠组、8%氯化钠组三组,每组15只,持续喂养8周。在8周时间点应用tail-cuff method方法监测鼠尾血压,Masson三原色法检测三组大鼠肾脏组织纤维化情况,免疫组化及Western blotting方法检测各组大鼠肾脏巨噬细胞浸润情况。结果:1)4%高盐组及8%高盐组大鼠8周时间点血压均较正盐组现在升高,8%高盐组大鼠血压较4%高盐组进一步升高。2)4%高盐组及8%高盐组大鼠8周时间点肾脏相对重量及肾脏纤维化程度较正盐组增加,8%高盐组较4%高盐组进一步增加。3)4%高盐组及8%高盐组大鼠8周时间点肾脏组织巨噬细胞浸润增加,8%高盐组较4%高盐组进一步增加。结论:盐浓度不同对盐敏感性肾脏纤维化及巨噬细胞浸润程度影响不同,盐浓度升高可加重盐敏感高血压时肾脏纤维化及及巨噬细胞浸润。     

黄连素对小鼠心肌梗死后心室重构的作用研究

目的:探讨黄连素(Berberine,BBR)在小鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)后心室重构中的作用,并比较BBR预处理(BBR pre-treatment,preBBR)和BBR后处理(BBR post-treatment,postBBR)给药的效果。方法:将60只C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为假手术组、单纯MI对照组、MI+preBBR组及MI+postBBR组,每组15只。MI模型采用前降支结扎法制备。MI+preBBR组在MI模型制备前2周开始用BBR(100 mg·kg~(-1)·d~(-1))每天灌胃,持续至MI后28 d;MI+postBBR组在MI模型制备后4 h开始用BBR(100 mg·kg~(-1)·d~(-1))每天灌胃,持续至MI后28 d。记录实验期间小鼠生存情况。MI后28天采用小动物超声测定左心室收缩功能;取心脏组织,测定心脏大小和重量;ELISA方法测定血浆BNP水平;Masson染色评价心肌纤维化程度。结果:与单纯MI对照组相比,MI+preBBR组及MI+postBBR组小鼠生存率提高、心脏收缩功能增强、心脏变小、心脏重量减轻、血浆BNP水平降低、心肌纤维化明显改善。其中,MI+preBBR组上述指标的改善程度优于MI+postBBR组。结论:BBR可抑制MI后心室重构,且BBR预处理效果优于后处理。     

老年冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗术后衰弱的影响因素及其对认知功能和预后的影响

摘要 目的：探讨老年冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后衰弱的影响因素及其对认知功能和预后的影响。方法：选取2019年3月~2021年3月期间本院收治的行PCI的老年冠心病患者134例。查阅相关问卷制定调查表,收集、整理患者资料,统计术后衰弱发生情况,衰弱的影响因素采用多因素Logistic回归分析。根据患者是否合并衰弱纳为衰弱组和非衰弱组,对比两组认知功能和预后情况。结果：接受PCI治疗的134例老年冠心病患者中,术后合并衰弱者92例,占比68.66%。未合并衰弱者42例,占比31.34%。合并衰弱的患者纳为衰弱组（n=92）,未合并衰弱的纳为非衰弱组（n=42）。单因素分析显示,老年冠心病患者PCI术后衰弱与婚姻状况、年龄、放入支架数量、家庭人均月收入、饮酒史、文化程度、吸烟史、心功能分级、合并症种类数、体质量指数、营养状况、近1年跌倒史、焦虑情况、抑郁情况有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：有饮酒史、年龄偏大、合并症种类数≥3种、心功能分级III级、有焦虑情况、文化程度小学及其以下、有抑郁情况、有近1年跌倒史、家庭人均月收入≤3000元、营养状况不良是老年冠心病患者PCI术后衰弱的危险因素（P<0.05）。衰弱组的非常规就诊发生率、全因死亡率、主要不良心血管事件发生率均高于非衰弱组（P<0.05）。衰弱组的简易智力状态检查量表（MMSE）评分低于非衰弱组（P<0.05）。结论：老年冠心病患者PCI术后衰弱的发生率较高,且受到年龄、家庭人均月收入、文化程度、饮酒史、合并症种类数、心功能分级、焦虑情况、抑郁情况、有近1年跌倒史、营养状况等因素的影响。衰弱会导致患者的认知功能下降以及不良预后。     

中国纤蚤属一新种记述(蚤目:多毛蚤科)

本文报告了甘肃省纤蚤属Rhadinopsylla似小纤蚤亚属Micropsylloides一新种:扁鬃纤蚤R.(M.)flatterispina sp.nov。新种第8腹板上着生4根长而粗且端段变扁的刺形鬃,易与近似种吻长纤蚤(R.(M.)jaonis,1929)相鉴别。