一种多基因串联共表达载体的构建

为了构建一种可用于串联共表达多个基因的原核表达载体,通过PCR引入点突变,对商业载体pET-22b的酶切位点进行定向改造,设计独特的XbaⅠ/SpeⅠ模块。获得改造成功的载体pET-m22b,测序结果显示启动子、核糖体结合位点、多克隆位点及终止子均位于XbaⅠ和SpeⅠ两酶切位点间。选取不同来源的基因进行串联组合及表达鉴定,四个基因成功组合于同一载体中,表达效果良好,各基因表达效率不受明显影响。研究构建的载体pET-m22b,使多基因的共表达更加便捷,为蛋白复合物的表达与纯化、代谢通路的异源重建及其优化等研究奠定了良好的基础。     

棉花种间杂交渐渗系SSR及农艺性状分析

利用87对多态性SSR和EST-SSR引物,对57份棉属种间杂交渐渗系及其6个代表性血缘亲本进行了鉴定分析.共检测到540个等位变异,多态性等位变异占98.5%,EST-SSR变异占63.9%,41个SSR标记定位在棉花基因组的22条染色体上.种质间成对相似系数为0.553～0.937,平均为0.748.渐渗系的SSR聚类与种质材料的系谱来源基本吻合,而和农艺性状聚类结果相差很大,前者更能反映其亲缘关系.     

全身麻醉下达芬奇机器人手术在老年腹部手术中应用观察

目的:探究全身麻醉下达芬奇机器人在老年腹部手术中的应用效果。方法:选择2019年1月至2020年12月于我院接受腹部手术治疗的200例老年患者,将其按照术式分为研究组(100例)与对照组(100例),研究组选择达芬奇机器人开展手术,对照组选择常规腹腔镜手术,对比两组患者的手术时间、术中出血量、中转开腹率、术后排气时间、总住院费用、住院时间、术后患者自我效能及抑郁情况、术后疼痛度情况以及术后并发症发生情况。结果:(1)比较显示研究组患者的术中出血量、中转开腹率、术后排气时间均低于对照组(P<0.05),但其手术时间、总住院费用高于对照组(P<0.05);(2)术后研究组患者自我效能得分高于对照组,抑郁得分低于对照组(P<0.05);(3)术后24 h及48 h研究组疼痛得分均低于对照组(P<0.05);(4)研究组患者术后各类并发症发生率为4.00%,明显低于对照组的12.00%(P<0.05)。结论:全身麻醉下应用达芬奇机器人对老年患者实施腹部手术可行性较好,能够显著减小对患者的创伤,加快其术后康复,同时还能够降低其术后不良情绪和并发症发生,提高其自我效能,值得临床推广应用。     

人类胚胎干细胞系H9培养和分化中细胞异质性的发现

目的:在人类胚胎干细胞系H9培养和分化过程中探讨该细胞系的异质性。方法:对人类胚胎干细胞系H9进行体外未分化培养和诱导分化,鉴定其多潜能性和分化状态;在诱导其向拟胚体细胞的分化过程中,检测多潜能相关基因及分化特异基因的表达情况。结果:发现多潜能相关基因(Oct4、SOX2和Nanog)和种系特异性基因(Cdx2、Bachurary、SOX1、Fgf5和AFP)并不限于分别在未分化细胞和分化细胞中表达。结论:提示H9细胞系在培养过程中的非基因异质性现象,为进一步认识胚胎干细胞的自我更新和多潜能性提供了有意义的参考。     

超声引导下腹横肌平面阻滞与静脉镇痛在腹股沟疝气手术中的应用价值

摘要 目的：分析超声引导下腹横肌平面阻滞与静脉镇痛在腹股沟疝气手术中的应用价值。方法：选择2019年1月～2020年12月我院的120例腹股沟疝气手术患者为研究对象,按照麻醉镇痛方法的差异分为两组,对照组采用静脉镇痛,观察组采用腹横肌平面阻滞。记录两组患者术中丙泊酚、麻黄碱以及芬太尼的使用剂量以及手术后不同时间的VAS评分和芬太尼追加次数;比较两组术后恶心呕吐的发生率,并比较进食时间、肠道功能恢复时间以及下床活动时间。结果：观察组患者丙泊酚、麻黄碱以及芬太尼的使用剂量均显著少于对照组(P<0.05);观察组疝气手术后1 h(T0)、5 h(T1)、10 h(T2)、1d (T3)、2 d(T4)的VAS评分均明显低于对照组(P<0.05);观察组的芬太尼追加次数为4次/人,明显低于对照组的11次(P<0.05);观察组疝气手术后恶心呕吐的发生率（6.67%）、进食时间、肠道功能恢复时间以及下床活动时间均明显低于对照组(P<0.05)。结论：腹横肌平面阻滞对腹股沟疝气手术后患者的镇痛效果明显优于静脉镇痛,且更有助于促进术后恢复。     

转单、双Bt基因741杨外源基因表达和抗虫性比较

【目的】研究联合使用两种或两种以上的抗虫基因的抗虫效果, 同时鉴定并筛选出转双Bt基因741杨对鳞翅目和鞘翅目害虫有较强抗性的株系。【方法】选取转三基因（Cry3Aa+Cry1Ac+API）741杨8个株系、 转双基因（Cry1Ac+API）741杨1个株系和转单基因（Cry3Aa）741杨3个株系为试材, 从外源基因PCR检测、 毒蛋白表达和抗虫性三方面对转基因株系进行对比分析。【结果】经PCR扩增后各转基因株系出现了预期的电泳条带。ELISA蛋白检测显示转基因株系中都有与所含基因相应的Bt杀虫蛋白表达。用转基因株系新鲜叶片进行柳蓝叶甲Plagiodera versicolora和美国白蛾Hyphantria cunea室内饲虫实验表明： 转入不同抗虫基因的杨树对昆虫的抗性具有选择性, 对非靶标昆虫没有毒杀作用。转双Bt基因741杨具有双抗性, 不同转基因株系表现出高中低的抗性水平： 在对柳蓝叶甲的抗性上, 筛选出的其中5个高抗株系（pCCA1, pCCA2, pCCA5, pCCA6和pCCA9）的抗性水平明显比含Cry3Aa单Bt基因的3个高抗株系（pCC11, pCC53和pCC84）高; 在对美国白蛾的抗性上, 有7个株系（pCCA2~pCCA7和pCCA9）的抗性水平与含Cry1Ac单Bt基因株系（pB29）表现一致, 只有1个株系（pCCA1）对美国白蛾表现出了极低的抗性。【结论】多个抗虫基因在741杨上的联合使用, 不仅扩大了抗虫谱, 其中的高抗株系还具有了更高的抗虫能力, 有效地发挥了基因的叠加效应。     

沉默信息调节因子2在瑞芬太尼诱发的大鼠切口痛觉过敏中的作用及其机制研究

摘要 目的：探讨沉默信息调节因子2（Sirt2）在瑞芬太尼诱发的大鼠切口痛觉过敏中的作用及其机制。方法：18只SD大鼠采用随机数字表法分为I组（切口组,n=6）,RI组（瑞芬太尼+切口组,n=6）和RI+Sirt2过表达组（瑞芬太尼+切口+Sirt2过表达组,n=6）。I组在大鼠足底制作切口痛模型的同时在腹部注射等容量生理盐水30 min,RI组和RI+Sirt2过表达组在足底进行切口痛模型制作的同时并泵注瑞芬太尼30 min,RI+Sirt2过表达组在脊髓水平提前1周注射Sirt2过表达慢病毒处理。各组大鼠分别于泵注瑞芬太尼或生理盐水术前24 h,泵注结束后2 h、6 h、24 h和48 h测定机械刺激缩足反应阈值（MWT）及热缩足潜伏期（TWL）。行为学测试结束后处死大鼠,取L_3-5脊髓节段,采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测Sirt2表达,超氧化物歧化酶2（SOD2）活性采用酶联免疫吸附法（ELISA）法测定,超氧阴离子水平和NADPH氧化酶活性采用化学发光法测定。结果：各组大鼠MWT和TWL的时间效应（F=683.602,624.033,均P<0.001）和组别×时间交互效应显著（F=9.142,4.550,均P<0.001）,说明MWT和TWL有随时间变化的趋势并且时间因素的作用有随组别的不同而不同,组间比较差异有统计学意义（F=93.157,25.176,均P<0.001）。与I组比较,RI组T_1-4时MWT降低,TWL缩短（P<0.05）;RI+Sirt2过表达组T₂、T₄时间点MWT降低,T_2-4时间点TWL缩短（P<0.05）。与RI组比较,RI+Sirt2过表达组T_3-4时间点MWT升高,T_2-4时间点TWL延长（P<0.05）。三组大鼠Sirt2蛋白表达比较差异有统计学意义（F=265.643,P<0.001）;与I组比较,RI组和RI+Sirt2过表达组术后48 h脊髓组织Sirt2表达水平减少（P<0.05）;与RI组比较,RI+Sirt2过表达组术后48 h脊髓组织Sirt2表达水平增加（P<0.05）。三组大鼠脊髓组织SOD2活性、NADPH氧化酶活性、超氧化物阴离子表达比较差异有统计学意义（F=13.543,14.813,19.675,均P<0.001）;与I组比较,RI组和RI+Sirt2过表达组术后48 h脊髓组织SOD2活性水平降低,NADPH氧化酶活性和超氧化物阴离子水平增加（P<0.05）;与RI组比较,RI+Sirt2过表达组术后48 h脊髓组织SOD2活性水平增加,NADPH氧化酶活性和超氧化物阴离子减低（P<0.05）。结论：Sirt2通过调节氧化应激水平参与瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏过程。     

右美托咪定辅助麻醉对老年腹部重症病患术后谵妄以及Ramsay镇静评分的影响

目的:探讨右美托咪定辅助麻醉对老年腹部重症病患术后谵妄以及Ramsay镇静评分的影响。方法:将2018年6月-2019年6月我院收治入院的48例拟行手术的老年腹部重症患者为研究对象,随机分为观察组和对照组各24例,分别给予负荷剂量1μg/kg右美托咪定和等量盐水注入。术中观察组继续泵入右美托咪定0.2μg/(kg·h),对照组输注等量生理盐水。记录不同时间段神经元特异性烯醇化酶(NSE)、血清S100β蛋白、白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,拔管时间,苏醒时间,术后1、2、3d谵妄发生情况及术后不同时间段的Ramsay镇静评分。结果:T0时,两组NSE、血清S100蛋白、TNF-α及IL-1β的浓度比较,差异均无统计学意义(P0.05);T1-T3时,两组NSE、血清S100蛋白、TNF-α及IL-1β的浓度持续升高,且观察组NSE、血清S100蛋白、TNF-α及IL-1β的浓度均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);T4时,两组均显著下降,且观察组低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。观察组患者拔管时间及苏醒时间均短于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。观察组患者在术后谵妄总发生率少于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与术后30 min时相比,两组术后1 h、6 h、12 h、24 h、48 h时均显著降低,且观察组在术后30 min、1 h、6 h、12 h、24 h、48 h均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:右美托咪定辅助麻醉应用于老年腹部重症患者,可保持患者心率及平均动脉压平稳,缩短拔管时间及苏醒时间,减少术后谵妄发生情况,且缩短谵妄发生时间,值得临床推广普及。