融合酰基载体蛋白可增强大肠杆菌重组蛋白的可溶性和热稳定性

目前,蛋白质可溶性和热稳定性已成为重组蛋白高效生产、功能应用和长久保存不可回避的问题,而使用酸性蛋白融合标签可能是其有效解决策略。酰基载体蛋白(ACP)是脂肪酸生物合成途径的必要组分,在大肠杆菌中为一个高度酸性的小分子多肽。将大肠杆菌ACP与几个热不稳定的靶蛋白[如小桐子抗坏血酸过氧化物酶1(Jc APX1)、大豆核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶的活化酶2(GmRCA2)、大肠杆菌高丝氨酸O-转琥珀酰酶(EcMetA)]进行基因融合并使其在大肠杆菌中诱导表达,发现ACP融合能显著增强这些重组靶蛋白的可溶性。另外,对重组蛋白的热处理和酶活性分析发现,融合ACP还能极大提高这三个靶蛋白的热稳定性,并有效保护JcAPX1酶活免遭热失活,使其耐热性提高了至少2℃。ACP的这种效果推测可能与其高酸度特性有关,可以作为一个新的功能酸性融合标签。     

宝石能谱CT的功能特点及心血管检查的临床应用

宝石能谱CT拥有一系列独特的技术,包括宝石探测器、高压发射器、ASIR重组技术、能谱栅技术等,使其具有低剂量高清成像、能谱成像和动态500排成像特点,实现了全身0.23mm的极限空间分辨率和类MRI的软组织低密度分辨率,为心脏能量成像、斑块性质的鉴别及金属伪影的消除提供了全新有效的手段。其特有的高纯度和高通透性的物理学特性,再加上影像链中采样率的增高,专有的高清算法,使得宝石能谱CT能够在更低的剂量下,获得更为清晰的图像质量,达到目前业内最高的空间分辨率和密度分辨率;同时,其独有的能谱栅成像技术,将CT诊断从形态学带入功能学领域,因此也被称为"显微CT,病理CT,绿色CT",宝石能谱CT代表了目前CT发展的趋势,它用准确的绝对CT值的单能量成像(keV)诊断和基物质成像诊断来取代传统的相对CT值的混合能量(kVp)成像诊断,用多参数CT成像诊断来代替传统的单参数CT成像诊断,而"三同"(同时、同源、同向)的物理基础保证了其能谱成像的准确性,使CT能谱成像真正走入了临床诊断的第一线,从而提高了心血管疾病诊断的准确性和安全性。为CT在心脏疾病的诊断方面开拓了新领域和新方法。     

水苏糖及其功能的研究进展

随着现代社会的发展,人们对健康的要求日益增高,对生活质量也有了很高的要求.与此同时,健康食品也成为了现代社会的一个热潮,受到社会的广泛关注.水苏糖是唇形科水苏属植物中天然存在的能显著促进人体肠道有益菌群增值的功能性低聚糖,被誉为"天然超强双歧因子"[1].被美国FAD认定为GRAS(一般安全无毒食品)的低聚糖产品.上世纪80年代开始,日本人就开始研究水苏糖的功能.水苏糖与其他功能性低聚糖相类似,它不为人体肠胃消化液所分解,能被人体肠道内的双歧杆菌、乳酸杆菌等有益菌群所利用,促进这些有益菌的增值[2].此外,水苏糖还能抑制腐败菌,如大肠埃希菌和产气荚膜梭菌的生长,从而抑制腐败菌代谢所产生的酚、氨、吲哚等有害物质.且根据食品安全性毒理学评价程序和方法( GBl5193-2003)中急性毒性分级标准判定,水苏糖属实际无毒级[3].本文就水苏糖对肠道菌群的影响以及其产生的作用进行综述.     

老年高血压患者血清D-二聚体与左室肥厚的相关性研究

目的:探讨血清D-二聚体(D-D)与老年原发性高血压(EH)患者左室肥厚的相关性。方法:选取我院收治的老年EH患者158例为研究对象,均行心脏超声检查,依据左室质量指数(LVMI)将患者分为左室肥厚组(LVH组,n=72例)和非左室肥厚组(非LVH组,n=86例);分析比较两组患者血清D-D水平及相关实验室检查指标的差异。用Logistic回归模型分析血清D-D水平与左室肥厚的关系,用ROC曲线分析血清D-D水平预测老年EH患者发生左室肥厚的价值。结果:LVH组患者血清D-D水平[(315.54±45.70)μg/L]高于非LVH组[(148.29±37.65)μg/L](t=13.456,P0.05);D-D增高组患者LVMI[(137.25±16.94)g/m~2]高于非LVH组[(104.39±14.84)g/m~2](t=12.876,P0.05);D-D增高组中有发生左室肥厚的比例显著高于D-D正常组(65.1%vs 38.3%,X2=4.567,P0.05)。血清D-D与LVMI呈正相关(r=0.354,P0.05),与NT-pro BNP亦呈正相关(r=0.394,P0.05)。血清D-D水平(OR=1.239,95%CI:1.134~1.548,P0.05)是老年EH发生左室肥厚呈的独立相关因素。血清D-D预测发生左室肥厚的曲线下面积(ROCAUC)为0.879;灵敏度及特异度分别是89.8%及78.7%,最佳诊断截点为295.54μg/L。结论:老年EH患者血清D-D水平可能是左室肥厚发生的独立危险因素,血清D-D指标对于评价高EH患者左室肥厚的发生具有一定的临床意义。     

马蜂肠道菌的分离鉴定及产消化酶功能菌株的筛选

【背景】马蜂(Vespa mandarinia Smith)可以防治多种田间害虫,还具有药用价值,其肠道菌群结构和功能还有待研究。【目的】获得马蜂肠道可培养细菌并筛选出具有产消化酶功能的菌株,为理解肠道菌对宿主的影响机理及功能菌株的利用提供科学依据和研究材料。【方法】采用传统细菌分离培养法获得马蜂肠道菌,结合形态学以及16S rRNA基因序列分析进行鉴定;利用水解圈法分别筛选产蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶菌株;通过测量水解圈D与菌落直径d的比值,比较不同细菌的产酶能力。【结果】在马蜂肠道中共分离出6属10种细菌,其中芽孢杆菌属5种,肠球菌属、葡萄球菌属、明串珠菌属、乳球菌属和不动杆菌属各1种。从获得的61个菌株中筛选出6个具有产消化酶功能的菌株。其中,苏云金芽孢杆菌V44具有产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶4种消化酶的能力;粪肠球菌V6具有产淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶3种消化酶的能力;蜡样芽孢杆菌V43具有产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶3种消化酶的能力;粪肠球菌V20、蜡样芽孢杆菌V19和维德曼氏芽孢杆菌V22均具有产蛋白酶的能力。【结论】马蜂肠道细菌资源较丰富,部分有产消化酶的功能,可帮助马蜂消化食物,对宿主健康有一定影响。本研究筛选的6个菌株都能产蛋白酶,其中菌株V43和V44分别具有最强产淀粉酶和脂肪酶的能力,是可进一步开发利用的肠道功能菌株资源。     

基于菌植互作的植物根际细菌钝化镉作用和机制研究进展

土壤重金属镉(Cd)污染严重危害农产品安全生产,植物根际细菌在钝化土壤Cd和帮助作物抵御Cd胁迫方面发挥重要作用。本文首先概括在修复Cd污染土壤中得到广泛应用的植物根际细菌种类,并从根际细菌直接吸附Cd、调整土壤理化特性、调控土壤微生物群落和其他作用4方面阐述了植物根际细菌对Cd的钝化作用,其次从菌植互作角度阐述植物根系分泌物与根际细菌群落相互影响对土壤Cd的钝化作用。最后展望重金属胁迫下植物根际钝化Cd核心菌群的构建,以在新兴学科与技术的快速发展中探明植物根系-微生物互作体系的分子机制,深入开展植物根际细菌钝化修复重金属污染土壤的理论研究和实践。     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对高血压合并焦虑抑郁患者的疗效观察

目的:研究厄贝沙坦对高血压合并焦虑抑郁患者的临床疗效。方法:选取2010年1月至2013年12月在哈尔滨医科大学附属第四医院心内科住院的高血压伴焦虑抑郁患者180人。根据汉密尔顿抑郁量表17项(HAMD)及汉密尔顿焦虑量表14项(HAMA)评分,将患者随机分为治疗组和对照组。治疗组患者采用厄贝沙坦进行治疗,而对照组患者采用非洛地平进行治疗。观察并比较两组患者平均血压的下降幅度、治疗总有效率及治疗前后焦虑抑郁量表的评分变化。结果:两组患者治疗总有效率无显著差异(P0.05)。与对照组相比,治疗组收缩压和舒张压降低较明显,HAMA和HAMD总分降低明显,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:厄贝沙坦对原发性高血压伴虑患抑郁焦患者具有有良好的治疗作用。     

脑利钠肽后处理对兔急性心肌梗死的保护作用

目的：脑利钠肽后处理对兔急性心肌梗死的保护作用及可能机制。方法：30 只兔随机分为3 组,每组10 只,左冠状动脉的左 室支缺血30 分钟,再灌注120 分钟。AMI（急性心肌梗死）组：再灌注期间静脉滴注生理盐水;BNP（脑利钠肽）组：再灌注期间静脉 滴注rhBNP(重组人脑利钠肽);BNP+GLY（脑利钠肽+格列苯脲）组：再灌注期间静脉滴注rhBNP,同时舌下静脉注射GLY 。连续 监测心电变化,统计再灌注120 min 室性心动过速(VT)、心室颤动(VF)的发生率。心肌再灌注120 min 后,分别测定SOD(超氧化 物歧化酶)、MDA（丙二醛）、cTnI（肌钙蛋白I）、CK-MB（肌酸激酶同工酶）。各组随机抽取2 只兔,分别于再灌注1 小时和2 小时末 取心尖组织,HE 染色。结果：（1）再灌注心律失常：BNP 组与AMI组比较,VT 和VF发生率均明显升高（均为P<0.01）;BNP+GLY 组与BNP 组比较,VT 和VF 发生率均明显升高（均为P<0.01）。（2）SOD、MDA、cTnI 和CK-MB 水平：BNP 组与AMI 组比较, MDA、cTnI 和CK-MB 均明显降低（均为P<0.01）,而SOD 明显升高（P<0.01）;BNP+GLY 组与BNP 组比较,MDA、cTnI 和 CK-MB 均明显升高（分别为P<0.01,P<0.05和P<0.01）,而SOD明显降低（P<0.01）。（3）心肌HE 染色：AMI组和BNP+GLY 组心 肌损伤明显,BNP 组心肌损伤轻微。结论：脑利钠肽后处理对兔急性心肌梗死（缺血- 再灌注损伤）具有保护作用,可能与KATP 通道相关。     

一种基于亚磷酸盐及其脱氢酶的植物磷利用和杂草控制系统的建立

磷是植物生长发育所必需的大量营养元素之一。土壤中存在大量的正磷酸盐 (Pi),但由于土壤化学和微生物转化使得土壤可利用磷的浓度并不高。土壤缺磷以及杂草的抗除草剂能力已成为当前农业可持续发展的重要限制因素,所以提高植物对土壤磷的吸收利用能力或寻求可替代正磷酸盐的磷肥以及开发新型杂草控制系统已成为亟待解决的问题。自然界中亚磷酸盐 (Phi) 是含量仅次于正磷酸盐的磷源,但仅在某些细菌中能被专一性的亚磷酸盐脱氢酶 (PTDH) 氧化利用,对植物的生长发育则具有抑制作用。利用这一特性,将从土壤宏基因组中直接扩增到的假单胞菌PTDH基因PsPtx通过农杆菌侵染法转入烟草中,并通过RT-PCR、垂直板幼苗生长、显性标记和生长竞争实验分析PsPtx转基因烟草的基因表达以及在Phi胁迫条件下的特性。结果显示,PsPtx在其转基因植株的根茎叶组织中都有几乎相同水平的表达;PsPtx转基因烟草不但能解除Phi对植物的毒害作用,并将它氧化成可用的Pi作为生长发育所需的磷源,而且在Phi胁迫条件下较野生型烟草有相当明显的生长竞争优势;另外PsPtx还具备成为植物遗传转化显性选择标记的优良特质。因此,PsPtx基因编码的亚磷酸盐脱氢酶可用于开发一种基于亚磷酸盐为磷肥和除草剂的植物磷利用和杂草控制系统,为当前农作物转基因研究存在的一些重大问题提供一个有效解决方案。     

土壤假单胞菌亚磷酸盐脱氢酶的基因克隆和原核表达及其酶活分析

亚磷酸盐脱氢酶(PTDH)以NAD+为辅助因子催化亚磷酸盐氧化生成正磷酸盐和NADH,在辅酶再生和基于亚磷酸盐的磷利用等方面有着潜在重大的应用价值。以土壤宏基因组DNA为模板,采用两轮PCR扩增得到全长亚磷酸盐脱氢酶基因PsPtx。通过酶切将它克隆到质粒pET32a(+)中,构建了原核表达载体pET(PsPtx)。序列分析表明,PsPtx基因的完整编码区大小为1 011 bp,其推导蛋白由336个氨基酸组成,理论分子量大小为36.5 kD。保守结构域预测分析表明PsPtx编码蛋白属于亚磷酸盐脱氢酶,含有保守的NAD+结合基序和催化功能残基。系统进化树分析显示PsPtx基因来源于一无法确定种名的土壤假单胞菌。另外,PsPtx基因经IPTG诱导能在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,重组PsPtx蛋白用组氨酸标签亲合层析纯化,其以亚磷酸钠盐为底物的酶比活性为3.75 U/mg。该PsPtx功能基因的获得为其后续应用研究打下了必要的基础。