长链非编码RNA n336928对胃肠胰神经内分泌肿瘤细胞增殖及迁移的影响

摘要 目的：从基础实验层面研究长链非编码RAN n336928(LncRNA n336928,即n336928)在胃肠胰神经内分泌肿瘤(Gastro-entero-pancreatic neuroendocrine tumors，GEP-NETs)进展中的作用与影响。方法：首先采用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测n336928在人正常胰腺导管上皮细胞系(hTERT-HPNE)、GEP-NETs细胞株(QGP-1、 STC-1)中表达情况。采用靶向n336928的小干扰(si-RNA)，以转染试剂lipo3000为载体进行敲降。通过CCK8法、克隆实验和 EdU 实验观察细胞增殖活力，通过Transwell 实验观察细胞迁移能力变化，通过流式分析实验检测n336928敲低是否与周期阻滞和细胞凋亡相关，并用Western blotting 检测周期和凋亡相关标志性蛋白表达。结果：QGP-1和STC-1中 n336928的mRNA水平的表达相较于hTERT-HPNE明显升高(P＜0.05)，抑制QGP-1及STC-1中 n336928的表达后，细胞的增殖及迁移能力明显减弱(P＜0.05)。QGP-1细胞转染n336928小干扰后，细胞周期主要阻滞在G1/S期，且细胞凋亡明显增加。与对照组相比，敲降组的周期相关蛋白（CyclinD1）明显减少，相反凋亡相关蛋白(Caspase3)明显升高(P＜0.05)。为了进一步研究基因作用机制，我们用RNA免疫沉淀反应（RIP）验证n336928可与EZH2结合，并共同调控下游基因P21。结论：LncRNA n336928可通过结合EZH2并表观调控下游基因P21，而参与胃肠胰神经内分泌肿瘤的发生发展过程。     

奥曲肽联合黄芩素抑制胰腺神经内分泌肿瘤细胞增殖和迁移

摘要 目的：探讨奥曲肽（Octreotide，Oct）联合黄芩素（Baicalein，BE）对胰腺神经内分泌肿瘤（Pancreatic neuroendocrine neoplasms, pNENs）的影响。方法：用不同浓度的奥曲肽和黄芩素处理pNENs来源的QGP-1细胞，CCK8法检测细胞的存活率，以其半抑制浓度（IC₅₀）的比值作为浓度梯度进行联合用药，并用Compusyn软件进行联合指数（CI）分析，取细胞毒性效应适中且CI值较低的浓度（奥曲肽150 μmol/L，黄芩素20 μmol/L）进行表型实验。将QGP-1细胞分为四组：对照组、奥曲肽组、黄芩素组、奥曲肽和黄芩素联用组。通过克隆形成实验、EdU增殖检测、划痕实验、细胞凋亡和周期检测评价四组细胞的增殖、迁移能力以及凋亡和细胞周期的情况。结果：药物处理24 h后，奥曲肽和黄芩素均能够呈浓度依赖性抑制QGP-1细胞增殖（P<0.05），奥曲肽的IC₅₀为329.90 μmol/L，黄芩素的IC₅₀为42.86 μmol/L，两者IC₅₀的比值约为7.5:1，联用组细胞活性明显低于单药组（P<0.05），且CI值随着药物浓度的增加而降低。克隆形成实验和EdU增殖检测结果表明，奥曲肽和黄芩素均可抑制QGP-1细胞增殖（P<0.05），且联用组的克隆形成率和EdU阳性细胞百分比均低于单药组（P<0.05）。划痕实验结果表明，奥曲肽和黄芩素均可降低QGP-1细胞的迁移率（P<0.05），且联用组的迁移率低于单药组（P<0.05）。细胞凋亡和周期检测结果表明，黄芩素可促进QGP-1细胞的凋亡（P<0.05），并使QGP-1细胞阻滞于G0/G1期（P<0.05），而奥曲肽对QGP-1细胞的凋亡和细胞周期无明显影响（P>0.05），两药联用对其凋亡和周期无协同作用。结论：奥曲肽和黄芩素联合用药可协同抑制QGP-1细胞增殖和迁移，对细胞凋亡和周期无明显协同作用。