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1.
肠道病毒71型的RT-PCR诊断及基因特征   总被引:63,自引:1,他引:62  
2002~2003年从上海市和重庆市手足口病患儿的疱液标本中分离到10株病毒,其中上海9株,重庆1株.利用两对分别针对EV71和Cox.A16病毒VP1区的特异性引物,用RT-PCR方法对病毒进行初步鉴别.根据PCR所用引物及PCR扩增出的产物片段大小不同,可初步判定出EV71和Cox.A16病毒的血清型别.RT-PCR结果提示,上海分离到的9株病毒中,有2株为EV71,其余7株病毒为Cox.A16;重庆分离到的1株病毒为EV71.10株病毒的RT-PCR产物经序列测定和分析证实,PCR定型结果正确,说明PCR法具有很高的特异性,可作为EV71初步鉴定的首选方法.对所分离的3株EV71病毒进行VP1区编码基因全序列的测定和遗传学分析,通过同源性比较和构建系统发生树发现,此3株EV71病毒和中国大陆已发表的7株EV71病毒(SHZH03、SHZH98、SH-F1、SH-F2、SH-H25、SH-H26和CHN-87)全部属于C基因型,与该型代表株比较,同源性为89.3%~94.6%;与A、B基因型代表株比较,同源性为81.3%~84.0%,差异较大.在C基因型中,此3株EV71病毒和中国大陆先前分离的6株病毒(SHZH03、SHZH98、SH-F1、SH-F2、SH-H25、SH-H26)的同源性较高,在94.5%~100%范围内.在系统发生树上,这9株病毒形成一个较独立的分支.与CHN-87株的同源性在92.1%~93.6%之间.与已知的C1、C2、C3亚型代表株比较,同源性在89.3%~92.9%,差异≥7%,因此认为可将这9株病毒划分为C4亚型.上海、重庆和深圳的EV71病毒有较高的同源性,提示该病毒EV71-CA亚型在中国大陆1998~2003年间有较广泛的传播.建立中国流行的EV71病毒毒株库和基因库,对诊断、预防和控制EV71在中国的爆发有重要意义,对加强EV71的实验室诊断、病毒学监测和病毒基因型和亚型的标准命名和分子流行病学研究有重要帮助.  相似文献
2.
为研究中国急性弛缓性麻痹(AFP)病例中脊髓灰质炎(简称脊灰)病毒分离株的分子特征,为中国继续维持"无脊灰野毒状态"提供理论依据,对2002年所有省级疾病预防控制中心送检的脊灰分离株,用PCR-RFLP法及ELISA法进行型内鉴定.用PCR-RFLP法筛查出与疫苗株相比有异常酶切图谱的毒株共24株,其中Ⅰ型毒株1株,Ⅱ型毒株21株,Ⅲ型毒株2株;用ELISA法筛查出与疫苗株相比有不同的抗原抗体反应的毒株共22株,其中Ⅰ型毒株7株,Ⅱ型毒株4株,Ⅲ型毒株11株,在7株Ⅰ型毒株中有3株为非疫苗类似株(NSL),其余为双反应毒株(DRV).随后对这46株毒株进行了全VP1区的基因序列分析.结果表明:2002年脊灰分离株都是疫苗株或疫苗衍生株,没有发现野毒株,中国继续保持着"无脊灰野毒状态";口服减毒活疫苗(OPV)株与其它野毒株在稳定性性质方面是类似的,即通常是不稳定的,在人体肠道内有很强的选择性;在人体肠道内,病毒复制产生的基因变异导致毒力升高,是引起疫苗相关麻痹病例(VAPP)的重要原因,但宿主本身的因素也有很大的作用;在局部地区有疫苗株的循环或脊灰疫苗衍生株(VDPV)的存在;最终消除疫苗株引起的AFP病例可能还需要脊灰灭活疫苗(IPV)的介入.  相似文献
3.
唐古特瑞香提取物对菜粉蝶幼虫的毒杀作用   总被引:30,自引:0,他引:30       下载免费PDF全文
 生测表明,唐古特瑞香Daphne tangutica的甲醇抽提物具有明显的拒食和胃毒活性,活性跟踪得到流分9。流分9导致菜粉蝶Pieris rapae幼虫体小,中肠组织细胞受到破坏,脂肪体呈消融状;对试虫生理指标的影响主要表现在降低血淋巴蛋白质含量和抑制中肠酯酶活力。  相似文献
4.
一种从人血凝块中提取基因组DNA的方法   总被引:7,自引:0,他引:7  
介绍了一种新的从人血凝块中提取基因组DNA的方法,用该方法提取的DNA成功地应用于PCR和限制性酶切等后续实验中。基本过程为首先机械粉碎,然后高盐高EDTA溶液处理,含蛋白酶K和SDS的消化液变换温度消化,苯酚氯仿抽提。  相似文献
5.
AAV介导的hFⅨ基因在血友病B小鼠骨骼肌中特异性表达研究   总被引:6,自引:1,他引:5  
采用重组腺相关病毒(rAAV)介导人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)微基因在Ⅸ因子基因剔除小鼠骨骼肌中有效表达.在构建的质粒中,rAAV两侧反转重复末端顺序中插入肌酸肌酶增强子(MCK)和β肌动蛋白启动子(βA)调控下的hFⅨ微基因(hFⅨm1).直接肌肉注射高滴度rAAV(2.5×1011/mL),血友病B小鼠血浆hFⅨ最高表达量256ng/mL,凝血活性明显改善.从hFⅨ表达时效曲线来看,hFⅨ水平在第15天达到高峰,随后因血循环中抗hFⅨ抗体的出现而渐次下降.该结果提示采用rAAV系统,体内直接途径开展血友病B基因治疗是值得进一步探索的方向.  相似文献
6.
陈立  李玉雨 《病毒学报》1998,14(3):229-233
吉林省延边地区1996年6月发生无菌性脑膜脑炎流行,在全地区216万人口中,发病人数约5 ̄6千人,死亡2人,为历史上所罕见。从病人脑脊液和粪便标本中分离到多株病毒,分离率较高(分别达到52.4% ̄66.7%)。用WHO提供的RIVM肠道病毒组合血清进行中和定型,不能确定型别。RT-PCR结果表明为肠道病毒。病人早期血清特异性IgM抗性阳性率72.0%,证明所分离的病毒为此次无菌性脑膜脑炎暴发流行的  相似文献
7.
唐古特瑞香对菜粉蝶幼虫的拒食和胃毒活性   总被引:4,自引:0,他引:4  
用6种极性不同的溶剂对采自青藏高原的唐古特瑞香进行了连续抽提,各种抽提物在100mg干粉/ml的浓度下,均对菜粉蝶5龄幼虫表现出一定的拒食和胃毒作用,发现苯抽提物的生物活性最高,其次是氯仿抽提物。以苯为溶剂对唐古特瑞香的叶、茎皮、茎木质部、根皮、根木质部等5个植株部位进行了抽提,并对抽提物进行了生物活性测定,结果表明,叶的杀虫活性最高。经苯抽提过的残渣再用甲醇抽提,抽提物的生物活性测定结果表明,叶的抽提物具有一定的杀虫活性。从而进一步说明,叶中杀虫活性物质的含量高于其它部位。  相似文献
8.
C12-水解印楝素A的制备、结构鉴定及生物活性   总被引:3,自引:0,他引:3  
C12-水解印楝素A是将印楝素A C12位上的-COOCH3水解为-COOH而得到的印楝素衍生物。处理后24h和48h,C12-水解印楝素A对斜纹夜蛾3龄幼虫AFC50分别为3.44μg/mL和6.89μg/mL。处理后48h,3μg/mL C12-水解印楝素A对小菜蛾3龄幼虫的拒食率为73.59%,5μg/mL C12-水解印楝素A对棉铃虫3龄幼虫的拒食率为67.76%。3μg/mL C12-水解印楝素A处理后72h,小菜蛾3龄幼虫的校正死亡率为78.16%;5μg/mL C12-水解印楝素A处理后72h,棉铃虫3龄幼虫的校正死亡率为58.69%。  相似文献
9.
暴发脑膜脑炎流行的新型毒株的全基因序列   总被引:3,自引:0,他引:3  
陈立  张礼璧  候晓辉  李杰 《病毒学报》2000,16(4):289-293
吉林省延边地区1996年6月发生无菌性脑膜脑炎流行,从病人脑脊液和粪便标本中分离到多株病毒,血清学实验证明所分离的病毒为此次无菌性脑膜脑炎流行的病因。对其中的2株病毒(Yanbian96-83csf和Yanbian96-85csf)测定了全基因核酸序列并帮了比较分析。结果所测2株病毒核酸长度均为7456bp〔包括3端poly(A)尾〕,两者间仅有13个位点不同,同源性达99.8%,在进化树上位于同  相似文献
10.
通过重组HSV/AAV辅助病毒方法制备出高滴度(>1012)的重组AAV/mFⅨ病毒颗粒, 并注射到血友病B小鼠的后肢骨骼肌中, 获得了稳定的高水平小鼠Ⅸ因子表达(>370 ng/mL), 持续时间超过350 d. 治疗组小鼠体内的Ⅸ因子活性达到正常值的30%, 而且出血症状得到显著改善. 在小鼠血浆中未发现抗Ⅸ因子的中和抗体, 第1次注射后抗AAV抗体的水平也非常低. 重复注射AAV/mFⅨ病毒后, 不同剂量组的小鼠体内的抗AAV抗体出现了不同的结果. 组织分析结果证实了血浆中有功能的FⅨ因子确实来源于骨骼肌. 以上结果显示, AAV介导的基因转移是血友病B基因治疗的极有前途的方法.  相似文献
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