水母雪莲的幼根培养及植株再生

1　植物名称　水母雪莲 (Ｓａｕｓｓｕｒｅａｍｅｄｕｓａ) ,藏药中称为恰羔素巴。2　材料类别　无菌苗的根。3　培养条件　诱导愈伤组织培养基以ＭＳ、Ｃ1 7或Ｗ 1 4为基本培养基 ,附加 2 ,4 Ｄ 1～ 2ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) 肌醇 2 0 0 蔗糖 3% 琼脂 0 .5%。继代培养基为ＭＳ 2 ,4 Ｄ 1 肌醇 2 0 0 ＣＨ 30 0 蔗糖 3%～ 5% 琼脂 0 .5%。分化培养基配方为 1 /2ＭＳ ＫＴ 1 ＣＨ 30 0 肌醇 2 0 0 蔗糖 3% 琼脂0 .5% ,再附加 ( 1 )ＮＡＡ 0 .5 6 ＢＡ 1或 ( 2 )ＮＡＡ1 6 ＢＡ 2。所用培养基的 ｐＨ均调为 5.8。培养温度为…  

光照对水母雪莲愈伤组织合成生物碱的影响

以水母雪莲（Saussurea medusa Maxin.)无菌幼苗的根作外植体，诱导获得的愈伤组织为材料，研究光照对生物碱合成的影响。结果表明：尽管在水母雪莲的愈伤组织培养物中，总生物碱的含量比原植株中的含量低，但其组成成分比原植物丰富。并且秋水仙碱的含量也比原植物高，尤其是在光照培养的愈伤组织中秋水仙碱大大增加。  

棕色田鼠睾丸及附睾胚后发育的形态学变化

通过组织学方法,对产后1 d、10 d、25 d、45 d、60 d及70 d的棕色田鼠Lasiopodomys mandarinus睾丸和附睾发育进行了观察,以探讨其精子发生特点.结果 发现,1 d棕色田鼠的生殖细胞主要是生殖母细胞和前精原细胞;10 d出现大量精原细胞,睾丸间质细胞明显;25 d出现精子细胞;45 d有少量精子出现;60 d和70 d具有各级生精细胞,睾丸生精小管和附睾内出现大量成熟精子.睾丸生精小管管径和生精上皮厚度随日龄增加,于60 d达到最大;附睾管腔直径和附睾上皮厚度也于60 d达到最大.这些结果表明,棕色田鼠在生后45 d左右进入青春期,60 d左右达到性成熟,精子的产生及成熟与附睾的发育同步.  

棕色田鼠睾丸和附睾雌激素α受体表达的增龄变化

应用免疫组织化学方法系统研究了初生（1日龄）到成体（60日龄）5个发育阶段各6只棕色田鼠睾丸和附睾内雌激素受体α（ERα）的表达。结果发现：①在生殖细胞中，1日龄组幼鼠的生殖母细胞和支持细胞有微弱的ERa阳性表达，10日龄组精原细胞中ERa有弱表达，25日龄组精子细胞出现了较强ERα阳性表达，发育到45日龄时精子细胞ERα阳性表达最强，成体组中各级生精细胞中均有ERα阳性表达。②在间质细胞中，1日龄组间质前体细胞有ERα阳性表达，10日龄表达减弱，而到25日龄增强，至45日龄达到峰值，而成体又减弱。③附睾中，1日龄附睾上皮细胞有ERα阳性表达，10和25日龄附睾管类肌细胞出现ERα阳性表达，45日龄和成体附睾管上皮细胞和类肌细胞中均有ERα阳性表达。上述结果表明，ERα可能作为一种特异性受体在棕色田鼠睾丸发育过程中影响睾丸间质细胞雄激素的分泌，进而调节生精过程和精子的发育成熟。  

棕色田鼠睾丸和附睾雄激素受体表达的增龄变化

应用免疫组织化学方法研究了1、10、25、45及60日龄（成体）5个发育阶段的棕色田鼠（Lasiopodomys mandarinus）睾丸和附睾中雄激素受体（androgen receptor，AR）的表达。结果发现：①睾丸间质细胞中：1日龄有AR表达，至10日龄和25日龄AR表达减弱，45日龄AR表达最强，至成体AR表达又减弱（P＜0.05）；②肌样细胞中：从1日龄至成体均有AR表达，25日龄AR表达最弱，45日龄AR表达最强，至成体AR表达又减弱（P＜0.05）。③1日龄前精原细胞偶有AR表达，10日龄精原细胞没有AR表达；25日龄精子细胞有AR表达，45日龄精子细胞和部分精母细胞有AR表达，成体精原细胞和精母细胞及精子中有AR表达。④支持细胞中：性成熟前AR表达不明显，成体有AR表达。⑤从1日龄到成体，附睾中均有AR表达。这些结果表明，雄激素在棕色田鼠睾丸间质细胞、肌样细胞和生精细胞的表达随个体的发育阶段而变化；雄激素可促进青春期棕色田鼠间质细胞的功能与分化，肌样细胞在精子发生过程中有重要作用；同时，雄激素对附睾功能有调控作用。  

棕色田鼠脑和行为不同发育阶段副嗅球和主嗅球的细胞活动

本文运用免疫组化显示Fos蛋白的方法首次研究了棕色田鼠脑和行为不同发育阶段副嗅球和主嗅球的细胞活动。当不同年龄阶段的幼鼠同时暴露于自己家庭的熟悉底物和另一家庭的陌生底物时 ,嗅闻和呆在自己熟悉底物上的时间较多 ,直到产后 15d、 2 0d和 2 5d时 ,幼鼠探究不同底物的行为显示出显著性差异。脑的大小随着日龄增加而增加 ,但从产后 1到 15d ,脑重、脑宽和嗅球大小随着日龄增加特别显著。当不同日龄幼鼠暴露于陌生底物或者暴露于自己的熟悉底物时 ,从产后 5到 15日龄 ,主嗅球僧帽细胞层、颗粒细胞层、副嗅球僧帽细胞层和颗粒细胞层Fos免疫阳性细胞随着日龄明显增加 ,但直到 15和 30日龄时 ,和对照组相比 ,陌生底物可引起幼鼠主嗅球Fos免疫阳性细胞明显增加 ,从 2 0日龄起 ,陌生底物可引起副嗅球Fos免疫阳性细胞明显增加。主嗅球颗粒细胞层Fos免疫阳性细胞随着日龄的增加从边缘到中心逐渐出现 ,而副嗅球Fos免疫阳性细胞随着日龄的增加从顶部到底部逐渐出现。以上结果说明产后第 1d到 15d左右可能是棕色田鼠脑结构发育的重要阶段 ,而从此以后棕色田鼠主嗅球和副嗅球就具有区别熟悉气味和陌生气味的能力 ,表明棕色田鼠行为、脑发育和细胞活动间有紧密关系  

棕色田鼠睾丸和附睾胚后发育中的睾酮表达

应用免疫组织化学方法研究了产后1、10、25、45、60日龄（成体）5个发育阶段的棕色田鼠（Lasiopodomys mandarinus）睾丸和附睾组织内睾酮的免疫阳性反应.1日龄和10日龄,棕色田鼠睾丸生精小管内的前精原细胞胞质中有睾酮阳性表达.25日龄,有许多精子细胞产生,睾酮主要集中于精子细胞胞质表达.45日龄,精母细胞和精子中也有睾酮表达.成体精原细胞、精母细胞、精子细胞和精子中均有睾酮表达.1日龄至成体睾丸间质细胞和肌样细胞均有睾酮表达,25日龄时表达最强（P〈0.05）.1日龄至成体附睾上皮细胞和连接组织有睾酮表达,成体附睾管内的大量精子有睾酮表达.这些结果说明,棕色田鼠从出生到性成熟过程中,在精子发生的各阶段,睾酮对生精细胞的分化增殖有直接的调控作用,这种调控作用随发育阶段不同具有可变性,同时,附睾的功能和精子的成熟也受到睾酮的调节.  

半合成抗体库的构建及抗Tie2 Fab抗体的筛选

构建一个半合成抗体库 ,不经免疫制备人源抗Tie2Fab抗体。通过RT PCR方法 ,从人脐带血淋巴细胞总RNA扩增轻链基因及重链VH段基因 ,将轻链基因插入pCOMb3载体中 ,得人轻链质粒库 ;从HBsAb的Fd段基因制备含有不同长度随机化CDR3的FR3 CDR3 J CH1片段 ,然后将VH段基因与随机化的CDR3融合 ,得到Fd基因片段 ,再将其插入轻链质粒库中 ,得半合成人Fab质粒库。通过多次建库 ,获得总容量为 2× 1 0 7的半合成抗体库。其Fd段和轻链基因的重组率为 5 0 %。经 3轮淘洗 ,从噬菌体抗体库中筛选到与Tie2抗原特异结合的噬菌体克隆。测序确定抗体基因序列