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1.
毕赤酵母的密码子用法分析   总被引:134,自引:5,他引:129       下载免费PDF全文
通过分析Pichia pastoris的28个蛋白编码基因的同义密码子使用情况并计算该酵母的密码子用法,首次确定出P.pastoris的19个高表达优越密码子。这些结果经与已知的Saccharomyces cerevisiaeKluyveromyces lactis的密码子用法基本相似,但在氨基酸谷氨酸的密码子选择上截然相反,提示这可能属于P.pastoris所偏爱的密码子用法。  相似文献
2.
转甲状腺素蛋白基因在酵母中的表达   总被引:8,自引:0,他引:8       下载免费PDF全文
用限制酶BamHI将含人TTR基因的DNA片段(约493bp)从质粒 pSK-TTR上切下后并插入到分泌型载体pHIL-SI的BamHI位点上,经酶切鉴定重组质粒pHIL-SI-TTR上的TTR基因插入方向正确。将pHIL-SI-TTRDNA用BglII酶切后,转入真核表达系统——毕赤氏酵母。得到的转化子经摇瓶发酵,上清液用15%SDSPAGE检测,有TTRF的表达。经DEAESepheroseF.F离子交换柱和SephacrylS200分子筛层析,得到纯化的TTRF。体外实验表明TTRF对肝癌细胞有抑制作用。  相似文献
3.
新型酵母表达系统的研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
酵母表达系统是在酿酒酵母质粒的发现和酵母转化技术的成熟基础上建立起来的真核生物表达系统。许多有应用价值的外源基因成功地在其中表达,但也存在一些局限性。为了开发新的酵母表达系统,人们在酿酒酵母以外的酵母中寻找合适的宿主以建立新的载体-宿主系统。本文综述了建立新的酵母表达系统涉及的有关问题和近几年来的研究进展。  相似文献
4.
非常规酵母基因工程表达系统   总被引:6,自引:2,他引:4       下载免费PDF全文
非常规酵母系指除了酿酒酵母与粟裂殖酵母之外的酵母曹。非常规酵母可利用其自主复制序列构建载体,但整合载体是进行外源基因导入的主要方式。非常规酵母的转化有一定的宿主范围,可采用与酿酒酵母相同的方法,最常用的仍为化学法。高效表达元件可利用酿酒酵母的强启动子,也可以根据非常规酵母菌的代谢特点寻找强启动子.本文综述了近年来应用非常规酵母基因表达系统表达外源基因的一些实例。  相似文献
5.
外源基因在酵母中表达产物的分泌   总被引:5,自引:0,他引:5       下载免费PDF全文
6.
菊芋含有大量的菊粉多糖,且种植简单、产量高,是极具开发价值的替代玉米等粮食作物生产燃料乙醇的原料。本文研究鹰嘴豆孢克鲁维酵母Y179利用菊芋原料同步糖化与发酵生产乙醇。鹰嘴豆孢克鲁维酵母Y179具有高效分泌菊粉酶的能力,摇瓶试验显示Y179酵母能够利用完全由菊芋原料配制而成的培养基良好生长并发酵产生乙醇。通气及温度对乙醇产量影响明显,相对厌氧环境对Y179酵母发酵产乙醇具有促进作用,30℃发酵温度相对37℃和42℃更有利于乙醇产量提高。种子液培养时间及接种量对乙醇产量影响较小。在5 L发酵罐中以10% (V/V)量接入预培养36 h的Y179种子液,发酵液完全由菊芋干粉配制而成,总糖含量22% (W/V),30℃不通气,300 r/min搅拌,发酵144 h时,乙醇浓度达到12.3% (V/V),糖醇转化效率86.9%,糖利用率大于93.6%。初步研究结果显示鹰嘴豆孢克鲁维酵母Y179在利用菊芋原料生产乙醇方面具有良好应用前景。  相似文献
7.
RGD-葡激酶的凝胶过滤层析法复性及其纯化   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
构建的溶栓和抗栓双重功能的RGD-葡激酶突变体(RGD-Sak)在大肠杆菌中高表达,目的蛋白质以包涵体形式存在。为获得有活性的蛋白质,需要对包涵体进行变复性。利用凝胶层析方法对包涵体中RGD-Sak进行复性,并与稀释复性法进行比较,发现凝胶柱复性方法具有操作周期短、简便、成本低而高效等优点。复性后蛋白质用Q-Sepharose FF离子交换进一步纯化,纯度达95%,酪蛋白凝胶板活性测定表明两种复性法得到的蛋白质比活性相当。圆二色谱测定显示两种复性法得到的蛋白质的二级结构成份和谱形一致,说明在两种复性过程中完成了RGD-Sak分子的正确折叠。  相似文献
8.
在枯草杆菌中有启动子功能的噬菌体T5 DNA片段的克隆   总被引:2,自引:1,他引:1  
用启动子探针质粒pTG 402为载体,用鸟枪射击法克隆了噬菌体T5 DNA的片段。克隆中的2%含有具启动子功能的插入片段,其中pTG 402-20含有启动功能最强的插入片段。DNA-DNA分子杂交实验结果表明,pTG 402-20的插入片段能与T5 DNA Hind Ⅲ酶切的G和B片段杂交。这个插入片段的大小约为0.84kb。  相似文献
9.
通过同源重组构建酿酒酵母新型表达质粒   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
利用同源重组的方法, 构建了具有高拷贝数和高稳定性的新型酿酒酵母表达质粒. 对酵母附加体型载体pHC11进行一系列改造, 得到质粒pHC11R, 并用适当的酶切线性化; 利用PCR反应得到人IFNα2b表达单元片段, 它的两端和线性化的pHC11R的两端具有50 bp左右的同源区段. 上述两个片段共转化酿酒酵母, 在酵母体内经同源重组后得到表达质粒pHC11R-IFNα2b, 该表达质粒与 pHC11-IFNα2b相比去除了质粒上用于在大肠杆菌中复制和筛选所需的序列, 在宿主菌中的稳定性和拷贝数均有明显提高, 同时外源基因的表达量也获得了一定程度的提高. 在此基础上, 进一步构建了带有不同表达元件的pHR系列载体, 使得外源基因能够通过同源重组在酿酒酵母中快速、方便地克隆和表达.  相似文献
10.
乙型肝炎表面抗原基因在酵母中的表达   总被引:2,自引:1,他引:1       下载免费PDF全文
本文报道用酵母磷酸甘油酸激酶相似文献
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