长尾麝凤蝶生活史、生命表、生境及保护

评价了长尾麝凤蝶Byasa impediens在白水江自然保护区碧峰沟的生存状况,对其实施保护,维持其种群长期生存.通过野外观察、实验地饲养、野外林间样方调查、线路调查等方法,研究了长尾麝凤蝶的生物学特性和自然种群生命表,调查了生境,分析了致危原因,提出了保护措施.长尾麝凤蝶Byasa impediens在白水江自然保护区一年两代,以蛹在灌木或树枝上越冬,翌年4月中旬羽化.第一代成虫5月中下旬为高峰期;第二代成虫高峰期在6月下旬到7月中旬.有世代重叠.雄成虫比雌成虫早羽化7～10d,飞行能力较强,其飞行活动主要受到寻找雌成虫交尾和访花补充营养的影响,主要在沟底活动.雌成虫飞行能力较差,主要在出生地附近访花交尾产卵,飞行活动主要受到寻找寄主植物和访花补充营养的影响.雌雄性比1：4.1.雄成虫寿命平均6.9d,最长26d;雌成虫寿命平均7.6d,最长21d.孕卵量平均为31.5粒.成虫主要的访花蜜源植物有： 合欢Albizzia julibrissin、粉叶羊蹄甲Bauhinia glauca、臭牡丹Clerodendrum bungei、接骨草Sambucus chinensis.异叶马兜铃的生境选择,在本区的分布海拔范围为900～1680m,最适范围为1200～1500m.多分布于山坡丛林内郁闭度小于0.7且林下有灌木分布的林间小路、林窗边缘.郁闭度大于0.8则分布较少.幼虫分布的范围为800～1500m.异叶马兜铃的最适生境即长尾麝凤蝶幼虫的最适生境.影响种群下降的主要原因是生境丧失和退化.生境的破坏、丧失减少了寄主植物的数量和分布范围.毁林开荒、人畜践踏、喷洒除草剂对马兜铃和幼虫生存有重要影响.种群受到密度制约,异常气候条件和天敌是主要限制因子.夏季高温干旱、秋季淫雨降低了卵和幼虫的成活率,寄生蜂降低了越冬蛹的成活率.幼虫期的天敌主要有：蜘蛛、蠼螋、胡蜂、猎蝽、姬蜂、鸟类,蛹期和成虫期的天敌为鸟类.保护措施有：（1）保护和恢复生境,如退耕还林,提供廉价电能、加强保护执法,发展生态旅游等;（2）在异质种群斑块中心部位建一个廊道斑块;（3）在最适生境中,适度的割灌可促进寄主植物的生长,有利于蝶类种群的增长.  

嘉翠蛱蝶的生物学特性初步观察

在白水江自然保护区研究了嘉翠蛱蝶Euthaliakardama (Moore)的生物学特性。嘉翠蛱蝶 1年 1代 ,以老熟幼虫在棕榈棕中越冬 ;幼虫于翌年 5月中下旬从棕榈棕中爬出 ,取食嫩棕叶并于 6月初化蛹 ,7月至 8月均可见成虫 ,8月中旬在棕榈上发现大量卵 ,9月至 1 0月为幼虫期 ,1 0月底以幼虫在棕叶中越冬。卵和小幼虫易被天敌捕食 ,存活率低。  

拟南芥GHMP基因家族成员的组织表达及生物信息学分析

利用生物信息学方法获得拟南芥全基因组中12个GHMP基因家族成员。通过实时定量PCR技术研究这12个基因在不同组织中的表达，结果显示它们具有组织表达特异性。构建了拟南芥中GHMP基因家族成员的系统进化树。启动子区调控元件分析表明，大多数GHMP成员包含有光响应、生物钟及其它逆境胁迫响应的相关元件，预测这些GHMP基因家族成员可能参与了植物的光信号、生物钟及相关的逆境胁迫信号转导途径。  

拟南芥信号肽AtRALF1的表达、纯化及活性分析

利用RT-PCR扩增获得拟南芥At RALF1基因的全长cDNA序列,将其构建入携带His标签的原核表达载体p ET28b中,获得重组表达载体p ET28b-At RALF1,并将其转入到大肠杆菌BL21(DE3)中。随后在不同的IPTG浓度、温度和诱导时间条件下,进行At RALF1蛋白的表达研究,建立了At RALF1融合蛋白的高效表达体系。结果表明,在30℃、1 mmol/L IPTG的条件下诱导4 h,At RALF1融合蛋白的表达量最大。进一步用获得的At RALF1融合蛋白处理苗龄5 d的野生型拟南芥(Col-0)植株,发现其根的生长受到了抑制,表明我们获得了具有活性的At RALF1小肽,为进一步研究该小肽奠定了基础。  

拟南芥6个酪蛋白激酶基因的组织表达及其生物信息学分析

利用实时荧光定量PCR技术研究6个酪蛋白激酶摹惆在不同组织中的表达特性。结果表明:6个基因在各个器官中均有表达,但表达量不同。AT4G14340、AT3G23340、ATlG03930和AT3G03940基冈在花中表达量最高,在根中其次,在茎、叶和叶柄中的表达量最低;。4TIC,04440和AT4G26100基因在根中的表达最高,在化、茎、叶和叶柄中的表达量较低。对6个基因的碱基组成、核苷酸和氨基酸序列差异进行了比较。结果显示:它们的核苷酸组成情况为A>T>G>C,核苷酸同源性在60%～83%之间,氨基酸同源性在20%～79%之间。时启动子区域进行分析,发现含有多种与逆境诱导相关的调控元件,推测这6个基因与植物耐逆性有一定关系。  

GA2ox1氧化酶基因的克隆及原核表达

采用RT-PCR从拟南芥基因组中克隆到GA2ox1基因,通过Gateway克隆技术构建原核重组表达载体pDEST17-GA2ox1,并转化大肠杆菌BL(21)star,对蛋白原核表达条件进行优化.结果表明,最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导6 h.蛋白表达形式为包涵体,与Biotech对GA2ox1基因在大肠杆菌中的表达情况推测的结论一致.重组蛋白分子质量约为40 kD,经Ni Sepharose亲和层析柱纯化和Western blot鉴定得纯度90%以上的GA2ox1重组蛋白.研究结果为GA2ox1抗体制备及蛋白功能的进一步研究奠定了基础.  

拟南芥DBB 1 a（double B-box 1a）蛋白的表达、纯化及Western blotting检测

PCR扩增拟南芥（Arabidopsis thaliana）DBB1a cDNA的保守区段（GenBank登录号：AT2G21320）,转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a.15℃下IPTG诱导表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE检测.证实目的蛋白以可溶形式在约20 kD处高效表达,与预期蛋白大小相吻合.表达蛋白经Ni琼脂糖凝胶亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western blotting检测证实纯化后获得高纯度融合蛋白,这为进一步研究DBB1a功能奠定了基础.