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银鲫种系细胞标记分子Vasa: cDNA克隆及其抗体制备   总被引:2,自引:0,他引:2  
种系细胞始自胚胎发育早期,是动物生殖及生殖工程的基础。为研究鱼类的种系细胞提供标记分子,我们克隆并鉴定了银鲫的vasacDNA即Cagvasa。CagvasacDNA全长2771碱基(nt),编码的蛋白为银鲫Vasa即CagVasa,全长701个氨基酸(aa)。CagVasa蛋白与已知Vasa蛋白的结构特征一致:在N端有14个RGG重复序列,在C端Vasa所特有的8个功能域俱全。银鲫Vasa与鲤鱼、斑马鱼、陆生脊椎动物和果蝇的Vasa蛋白分别有95%,89%,61%-66%和50%的同源性。卵巢切片的RNA原位杂交揭示,Cagvasa限于种系细胞,且表达水平呈现出低-高-低的动态变化:即两头低(卵原细胞跟Ⅳ期成熟卵子),中间高(Ⅱ-Ⅲ期卵子)。为分析鱼类种系细胞提供手段,我们用310aa的N端序列产生细菌的重组蛋白来免疫大白兔,获得了抗Vasa的多克隆抗体αVasa。Western免疫印迹表明,αVasa特异性地识别一个鱼类性腺的蛋白,该蛋白的分子量为75kD,仅见于银鲫的性腺和卵子。卵巢切片的组织免疫荧光共聚焦显微分析表明,抗体αVasa只对种系细胞染色:卵原细胞着色最深,卵母细胞和早期的卵子都浓染,成熟卵则浅染。类似情况亦见之于精子发生早期阶段的雄性种系细胞。卵巢和精巢的体细胞则不着色。因此,Cagvasa编码的当是Vasa同源蛋白,为银鲫种系细胞的第一个标记分子。我们的研究表明,抗体αVasa染色灵敏度高,特异性好,当是鉴别银鲫及其它鲤科鱼类的种系细胞的有效手段  相似文献
2.
鱼类生殖细胞   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
鱼类和其他大多数动物一样, 胚胎发育产生两大细胞系, 一个是生殖细胞系或种质系, 另一个是体细胞系. 生殖细胞系和体细胞系的分离发生在胚胎发育的早期, 其标志是形成生殖细胞系的祖细胞, 即原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs). PGC形成后从其“出生地”进行“长途跋涉”迁移到性原基, 成为性原细胞, 即卵原细胞和精原细胞; 随后在经过配子生成的一系列发育过程后, 最终产生成熟的配子——卵子和精子. 生殖细胞发育的每个步骤都可能都可能影响生物个体的生殖能力或育性.巨大的生物学意义及其令人振奋的研究进展, 使“生殖细胞”日益成为科学研究的热点, 且作为特别议题出现在Science杂志2007年4月20日第5823期的封面上.近10年见证了对生殖细胞的认知的长足进步, 这些都得益于对青鳉和斑马鱼等模式生物的研究. 生殖细胞已能被准确地标记且分离以进行体外培养及移植, 这为濒临绝种的动物借助近缘物种进行生殖繁衍提供了技术基础, 譬如最近就有人成功地“借鲑鱼之腹”获得了虹鳟后代. 另外, 单倍体细胞体外培养已获成功, 如最近有研究人员获得了青鳉鱼单倍体胚胎干细胞, 而且把这种细胞的核移植到正常的卵子中, 其能像正常精子授精一样发育并产生可育的子代. 这种鱼其实最初是由嵌合卵发育而成, 也就是由正常减数分裂生成的单倍体卵母细胞核和植入的体外培养的有丝分裂单倍体细胞核组成的卵. 这种繁殖技术也被称作半克隆技术. 这条首次获得的半克隆青鳉鱼被命名为“霍莉”(Holly). 总之, 本文将从基础研究和繁殖技术两方面, 就生物界对鱼类生殖细胞研究和操作现状及未来研究方向进行小结与探讨.  相似文献
3.
研究利用中华鳖为研究模型进行爬行类生殖细胞发育分化成熟等生物学研究,克隆了中华鳖vasa基因的cDNA序列,全长3865 bp,包括5′端非编码区90 bp,3′端非编码区1699 bp,开放阅读框长2076 bp,共编码691个氨基酸.中华鳖Vasa氨基酸序列包含DEAD-box家族蛋白8个保守保守功能域,在N末端有4个RGG重复序列和2个GG富集区,与小鼠Vasa蛋白的同源性较高(72%).荧光定量PCR的结果表明,中华鳖vasa mRNA主要精巢和卵巢中表达,其他体组织中均难检测到表达.卵巢冰冻切片原位杂交结果显示:中华鳖vasa mRNA在生殖细胞中特异表达;在卵子发生过程中的不同发育期卵母细胞中呈现动态的变化.即vasa mRNA在初级卵母细胞及生长期卵母细胞中表达最强,且均匀分布在细胞质中,随着卵母细胞的逐渐增大,信号逐渐减弱,直至在成熟的卵母细胞中几乎检测不到表达信号,说明vasa可能在中华鳖早期卵母细胞发育中起重要作用.同时,vasa基因可作为中华鳖生殖细胞分子标记物,根据其mRNA的表达水平来鉴别不同发育时期的卵母细胞.研究结果为进一步开展中华鳖胚胎生殖细胞发育及配子生成,特别是研究中华鳖,乃至爬行类原始生殖细胞(Primordial Germ Cells,PGCs)的起源、迁移、分化等研究奠定了基础.  相似文献
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