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1.
用PCR法直接快速筛查重组阳性克隆   总被引:13,自引:0,他引:13  
胡维  向华  周艳  刘敬忠 《生物技术通报》1999,15(6):39-40,43
本研究目的是应用PCR法快速筛查插入有苯丙氨酸脱氨酶(PAL)cDNA重组阳性克隆,用于PCR扩增的引物是位于载体pET23b启动子处的T7启动子引物和位于目的基因PALc DNA3’端终止密码TAA处的引物,以灭菌吸头挑一单菌落加PCR体系扩增。结果:在筛查的3个克隆中,有2个阳性克隆,并且插入方向正确,经DNA序列测定得到进一步证实,结果表明,以PCR方法筛查重组阳性克隆,可以简便快速鉴定插入片段的大小和方向,不需提取质粒。  相似文献
2.
为构建苯丙氨酸脱氨酶的一种更新更高表达的基因工程菌,取得治疗高苯丙氨酸血症大鼠的更佳疗效。将欧芹PAL cDNA重组到质粒pNZ8048中,构建翻译融合载体和转录融合载体,分别转化乳酸乳球菌NZ9000。对两种高效表达菌株的酶活性差异进行比较,观察Nisin诱导的动态进程,并利用新鲜培养的p(NZ8048-PAL)1/NZ9000工程菌进行了高苯丙氨酸血症大鼠(称PKU动物模型)的治疗实验。结果表明:(1)翻译融合型菌株具有更高的酶活性;(2)当Nisin的诱导时间达6h时, 产物肉桂酸生成量基本达到峰值;(3)给高苯丙氨酸血症大鼠灌喂新鲜培养的p(NZ8048-PAL)1/NZ9000工程菌(翻译融合型), 观察到该工程菌能显著降低模型动物血中Phe浓度,从而取得了更好的疗效。    相似文献
3.
利用基因重组技术 ,在大肠杆菌中克隆并表达苯丙氨酸脱氨酶 (PAL) (EC4 .3 .1 .5) ,并应用此酶转化肉桂酸生成L 苯丙氨酸。方法是将欧芹苯丙氨酸脱氨酶cDNA亚克隆到组成型表达载体pMG3 6e启动子P3 2下游 ,以菌落PCR法鉴定插入片段的大小和方向都正确的克隆 ,进而以HPLC检测肉桂酸浓度的方法鉴别重组质粒有催化肉桂酸生成L 苯丙氨酸的酶活力。结果获得能表达PAL酶活性的阳性克隆 ,在pH1 0 ,含 1 .0 %肉桂酸、8.0mol/L氨的转化液中 ,3 0℃反应 2 0h ,肉桂酸重量转化率可达 60 %。该基因工程菌有希望用于工业化生产L 苯丙氨酸。  相似文献
4.
小鼠脊髓重与颈膨大截面积QTL研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
应用近交系小鼠A/J和C5 7BL/ 6J以及其F2 代重组小鼠定位脊髓重与颈膨大截面积数量性状基因座(QuantitativeTraitLoci,QTL)。结果表明 13个QTL与脊髓重和截面积相关 ,这些QTL分别位于 2、4、8、14、15、17、18、19和X染色体上。其中 6个QTL与脊髓重相关 ;4个QTL与颈膨大截面积相关 ;3个QTL与二者均相关。在 13个QTL中 ,3个QTL (P <0 0 1)———SC1(位于D15Mit15 8附近 )、SC2 (DXMit14 0附近 )和SC3(DXMit6 4附近 )其表型变异的解释率分别为 2 4 %、19%和 15 % ;加性效应分别为 - 3 78、3 4 1和 2 0 6mg。其他QTL的P值在 0 0 1~ 0 0 5之间。在上述 3个QTL中 ,SC1是唯一与脊髓重和面积均相关的QTL  相似文献
5.
慢性脑低灌注大鼠海马BDNF的表达与认知功能损害   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 观察慢性脑低灌注大鼠认知功能损害与海马脑源性神经营养因子 (Brain derivedneurotrophicfactor,BDNF)表达的关系。方法 通过结扎大鼠双侧颈总动脉 ,制成慢性脑低灌注模型 ,分缺血 6周组和 4月组及相应假手术组 ,在相应时间点用三等份MG 2Y型迷宫法测定大鼠学习记忆能力。用免疫组化S P法检测 4组大鼠海马中BDNF的表达 ,在光镜下测其平均光密度。结果 显示手术组与假手术组相比学习记忆能力明显下降 ,慢性脑低灌注大鼠缺血 4月组与缺血 6周组相比学习记忆能力也下降 (P <0 0 5 )。缺血 4月组大鼠海马BDNF表达的平均光密度值与Y型迷宫实验正确次数间存在正相关 (r=0 782 5 ,P <0 0 5 )。结论 表明在慢性脑低灌注状态下 ,大鼠学习记忆能力随海马BDNF表达的下降而下降 ,内源性BDNF可能通过对突触传递和认知功能有内在保护作用。  相似文献
6.
用PCR法直接快速筛查重组阳性克隆   总被引:2,自引:0,他引:2  
应用PCR法快速筛查插入有苯丙氨酸脱氨酶cDNA重组阳性克隆。方法:用于PCR扩增的引物是位于载体pET23b启动子处的T7启动子引物和位于目的基因PALcDNA3’端终止密码TAA处的引物。以灭菌吸头挑一单菌落加入PCR体系扩增。结果:在筛查的3个克隆中,有2个阳性克降,并且插入方向正确,经DNA序列测定得到进一步证实。结论:以PCR方法筛查重组阳性克隆,可以简便快速鉴定插入片段的大小和方面,不  相似文献
7.
中国黄牛mtDNA D-loop遗传多样性及起源   总被引:2,自引:0,他引:2  
房兴堂  周艳  陈宏  蔡欣  方南洙 《动物学报》2007,53(5):928-933
黄牛自古以来就是我国一个重要的畜种,其经济、文化价值很高。我国是世界上黄牛品种资源最丰富的国家之一。据《中国牛品种志》介绍,把一些地区同种异名的黄牛品种合并以后,尚有28个地方黄牛品种,按照其地理分布区域分为北方黄牛、中原黄牛和南方黄牛三大类型(邱怀,1986)。如果把中国地方黄牛品种分得更细,则有49个固有品种(常洪,1995)。关于中国黄牛的起源,历来有不同的观点。一般认为,中国黄牛是多元起源的,但究竟起源于哪几个牛种,观点不一(陈宏等,1993;于汝梁等,1993;Yu et al.,1999;陈幼春,1990)。主要的观点有:(1)中国黄牛主要起源于…  相似文献
8.
陈振斌  朱金玲  阎梅  梁燕  周艳  谭淑珍  肖白  刘敬忠 《遗传》2004,26(4):432-436
阐明21号染色体上唐氏综合征关键区域内或附近的5个STR基因座(D21S1413、D21S1446、D21S1437、D21S1411、D21S1412)在北京地区汉族人群中的结构特征和群体遗传学数据。Chelex法提取血DNA,PCR扩增后,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法或基因片段扫描检测法进行STR分型,测序后确定STR基因座的主型和进行等位基因的命名。结果该5个STR基因座具有简单重复序列和遗传多态性,杂合度和多态信息含量高。它为唐氏综合征的基因诊断和产前基因诊断提供理论依据,也为这些遗传标记在我国人群中进行亲子鉴定和个体识别提供概率计算依据。Abstract: To elucidate the genetic polymorphisms of five STR loci on chromosome 21 in Chinese Han population and construct a preliminary database,EDTA-blood specimens were collected from unrelated individuals in Beijing. The DNAs were extracted with Chelex method and were amplified by PCR. The PCR products were analyzed by the PAG electrophoresis or by the approach of the automated fluorescent detection. The five STR loci consist of simple repeat motif and its distributions of genotypes are agreement with Hardy–Weinberg equation. Its polymorphism information content is all over 0.50. The obtained data can not only be used as evidences for genetic diagnosis of Down Syndrome, but also for calculating the probabilities in the paternity test and individual identification.  相似文献
9.
以入侵植物紫茎泽兰(Ageratina adenophora Sprengel)为材料,采用基于PCR方法的染色体步行和改良的热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)两种方法分别克隆到hsp90和hsp17.66基因的5'上游启动子序列,长度分别为864 bp和1 485 bp(GenBank登录号分别为FJ434253和FJ434252).测序结果表明:这两个启动子序列均具有hsp启动子特有的HSE元件,及其他一些启动子顺式作用元件,如TATA-box,CAAT-box等.  相似文献
10.
850 nm 微激光已被发现能够减少黑色素细胞内酪氨酸酶的表达,进而抑制黑色素的合成。在此基础上本文选用 C57BL /6J 小鼠为模型,采用拉曼光谱法和荧光光谱法初步研究了850 nm 微激光的在体美白效应。黑色素含量丰富时,小鼠皮肤拉曼谱线中代表黑色素的信号(1405 cm-1和1609 cm-1)变得异常明显;而经过微激光的照射后这些拉曼信号明显减弱。在 NIR 光的激发下黑色素也能发出强烈的荧光,这种荧光信号也会因微激光的照射而减弱。通过计算相对的拉曼信号强度及荧光信号强度对850 nm 微激光的美白效应进行了定量分析。最后,采用常规的组织学检测(H&E 染色和 Fontana-Masson 染色)验证了光谱学检测手段的有效性。因此,光谱学技术可以作为一种简单有效的方法用于黑色素相关生理事件的实时检测。  相似文献
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