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生物大分子"液-液"相分离是近年来在生命科学领域迅速发展起来的新概念。相分离概念的提出,为我们深入理解细胞内生物大分子的组织模式和功能调控提供了新的观点和研究工具,因此迅速成为生命科学领域的研究前沿。但是围绕生物大分子相分离的生物物理学特性及其在细胞中扮演的角色仍有很多未解之谜。该文对近年来生物大分子相分离的相关研究进行了综述,对其在细胞中的功能和未来的发展趋势进行了初步探讨和展望。 相似文献
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HCV E2蛋白诱导的体液免疫及CTL应答研究 总被引:2,自引:0,他引:2
应用PCR方法扩增出HCVE2基因编码417a.a~750a.a的DNA片段,克隆到原核表达载体pQE30 LacZ启动子下游,转化JM109菌株.在JM109菌株中诱导表达出N端含6个组氨酸的E2融合蛋白,用Ni-NTA-Superflow亲和层析柱纯化作为抗原免疫实验兔和BALB/c鼠.定期取免血,采用间接ELISA方法检测兔子体内针对E2的抗体水平和维持规律.结果显示,距初次免疫14d兔子体内已有抗体产生,直至免疫第55d抗体水平持续上升,之后抗体水平保持稳定,抗体滴度达到13200.六周后,取鼠脾脏制备淋巴细胞,定向刺激扩增后与经过重组真核表达质粒pCE2转染的P815细胞作用,利用LDH释放试验检测作用效果.在ET=2001的情况下,杀伤率超过30%.这些结果表明工程菌株表达的HCV E2蛋白具有良好的免疫原性,可以诱发免疫实验动物机体产生较高滴度的抗体及特异性CTL应答.由此我们认为E2蛋白是发展HCV预防工程蛋白疫苗的合适候选者. 相似文献
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应用直接提取法从武汉地区乙型肝炎病人患者阳性血清中提取HBV基因组,以此作为模板,用引物PCR方法获得全长preS基因,该片段的DNA大小1203bp-克隆到pUCm-T载体中,应用M13通用引物进行序列测定,与中国HBV标准株序列比较,证实基因型为Adr亚型。有24个核苷酸不同,preS基因包含3个起始密码ATG分别为preS1,preS2,和S的翻译起点。然后将preS基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,将Sal Ⅰ线性化的pPIC9K—preS质粒用电击法导入巴斯德一毕赤酵母GS115His中。通过MD—G418平板筛选和5‘‘‘‘‘‘‘‘AOXI和3’AOXI引物PCR鉴定获得稳定重组HBV全长严preS基因的His^ Mut^ 酵母工程菌株。此酵母菌株在合适的培养条件和甲醇诱导下高效表达产生全长preS蛋白并可分泌到培养液中,SDS—PAGE显示培养液中含有分子量约为48kDa的带;微孔ELISIA法证实表达并分泌到培养液中的preS蛋白能够与HBV抗体阳性血清发生特异性反应。 相似文献
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应用PCR方法扩增出HCVE2基因编码417a.a-750a.a的DNA片段,克隆到原核表达载体pQE30 LacZ启动子下游,转化JM109菌株。在JM109菌株中诱导表达出N端含6个组氨酸的E2融合蛋白,用Ni-NTA-Superflow亲和层析柱纯化作为抗原免疫实验兔和BALB/c鼠。定期取兔血,采用间接ELISA方法检测兔子体内针对E2的抗体水平和维持规律。结果显示,距初次免疫14d兔子体内已有抗体产生,直至免疫第55d抗体水平持续上升,之后抗体水平保持稳定,抗体滴度达到1:3200。六周后,取鼠脾脏制各淋巴细胞,定向刺激扩增后与经过重组真核表达质粒pCE2转染的P815细胞作用,利用LDH释放试验检测作用效果。在E:T=200:1的情况下,杀伤率超过30%。这些结果表明工程菌株表达的HCVE2蛋白具有良好的免疫原性,可以诱发免疫实验动物机体产生较高滴度的抗体及特异性CTL应答。由此我们认为E2蛋白是发展HCV预防工程蛋白疫苗的合适候选者。 相似文献
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【目的】观察嗜酸乳杆菌完整肽聚糖(Whole peptidoglycan,WPG)对致敏脾淋巴细胞Th1/Th2及Treg/Th17平衡的体外调节作用。【方法】通过腹腔注射β-乳球蛋白(β-Lg)建立BALB/c小鼠牛乳过敏模型。造模成功后,分离致敏小鼠的脾淋巴细胞并分别与不同剂量的WPG共同孵育,酶联免疫法检测细胞上清液中抗体(总IgE和特异性IgE),Th1/Th2及Treg/Th17相关细胞因子(IFN-γ,IL-4,TGF-β,IL-17)水平,流式细胞术检测脾淋巴细胞中CD3+、CD4+和CD8+的百分含量,荧光定量PCR法检测过敏小鼠脾细胞中Th1/Th2及Treg/Th17相关转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3和RORγt mRNA的表达量。【结果】WPG体外刺激致敏脾细胞后可显著抑制IgE的产生,上调CD3+、CD4+细胞数及CD4+/CD8+比值,下调Th2型因子(IL-4,GATA-3mRNA)和Th17型因子(IL-17,RORγt mRNA)的表达,且与过敏组相比,中、高剂量WPG的作用效果显著(P0.05);另外,WPG体外作用还上调了Th1型因子(IFN-γ,T-bet mRNA)及Treg型因子(TGF-β,Foxp3 mRNA)的表达,且具有剂量依赖性。【结论】嗜酸乳杆菌WPG体外刺激可有效纠正致敏脾淋巴细胞的Th1/Th2及Treg/Th17失衡。 相似文献
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人丙型肝炎病毒 (HCV)感染可引起丙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌[1] 。丙型肝炎病毒是单股正链RNA病毒 ,基因组约长 9.5kb ,仅有一个开放阅读框 ,编码一个大的聚蛋白前体 ,由宿主蛋白酶和病毒编码的蛋白酶加工成多个成熟蛋白。非结构蛋白NS5A分子量为 56kD/ 58kD。目前对NS5A蛋白的功能尚不清楚 ,NS5A蛋白可降低干扰素治疗效果[2 ] ;NS5A蛋白含核定位序列 ,因此人们推测它在HCVRNA复制过程中可能起一定的作用[3~ 4 ] 。本研究在大肠杆菌中表达全长NS5A蛋白 ,提纯后NS5A蛋白能与大多数丙肝阳性血清起强烈… 相似文献
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摘要 目的:检测腺苷脱氨酶(ADA)及其同工酶在自身免疫病患者血清中的变化,探讨其诊断和病情监测作用。方法:收集70例系统性红斑狼疮(SLE)、114例类风湿性关节炎(RA)、55例强直性脊柱炎(AS)、及其年龄性别对应的健康血清标本。测定血清总ADA(tADA)、ADA1及ADA2活性。ROC曲线分析其诊断价值。结果:与健康对照相比,ADA活性在SLE患者血清中显著升高[tADA:15(12,20)vs 8(7,10)U/L;ADA1:3.5(2,5)vs 3(2,3)U/L;ADA2:11(8,15)vs 6(5,7)U/L;P<0.01)]。与健康对照相比,RA患者血清中tADA和ADA1活性无显著变化(P>0.05),ADA2活性水平升高[8(5.25,10)vs 7(5,9)U/L,P<0.05)];与健康对照相比,AS患者血清中tADA和ADA1活性无显著变化(P>0.05),ADA2活性升高[7(5,9)vs 6(5,7)U/L,P<0.05)]。ROC分析显示tADA及ADA2对SLE具有较好诊断价值(tADA:88.6%特异性、77.1%敏感性;ADA2:92.9%特异性、68.6%敏感性)。ADA活性对RA及AS患者无诊断价值。spearman相关性分析显示,tADA活性与SLE患者疾病活动度有一定正相关性(r=0.303,P=0.011)。结论:血清tADA活性检测可作为SLE辅助诊断和病情监测指标。 相似文献
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目的测定睡眠剥夺大鼠脑组织氨基酸类神经递质的含量。方法复制药物诱导失眠动物模型、平台水环境诱导失眠动物模型、刺激诱导失眠动物模型,以Agilent 1100荧光检测器高效液相系统为检测工具,Agilent ZORBAX SB-Aq(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,柱温25℃,激发波长λex=357 nm,发射波长λem=455 nm,甲醇-50 mmoL/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)为流动相,采取梯度洗脱,测定正常组及模型组大鼠脑组织中谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(γ-GABA)、牛磺酸(Tau)的含量。结果谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸分别在10.06~0.0503、10.13~0.0506、10.05~0.0502、10.03~0.0501μg/mL范围内,其浓度与峰面积呈良好的线性关系(r分别为0.99995、0.99995、0.99985、0.99990)。测得药物诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.2042±0.0145)、(0.0086±0.0005)、(0.0919±0.0024)、(0.0421±0.0011)μg;平台水环境诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.2144±0.0159)、(0.0085±0.0004)、(0.0966±0.0035)、(0.0433±0.0012)μg;刺激诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.1818±0.0043)、(0.0084±0.0005)、(0.0824±0.0033)、(0.0414±0.0018)μg;正常大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.1744±0.0038)、(0.0085±0.0004)、(0.0791±0.0022)、(0.0406±0.0012)μg。结论本实验建立的方法能满足同时测定大鼠脑组织中谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸的含量测定的需要,Glu、Tau、γ-GABA与失眠可能存在一定的量效关系,三种失眠动物模型均能较好的反映出脑内氨基酸类神经递质的变化。 相似文献