Ubc9融合表达时SUMO化修饰影响蛋白激酶Cθ在免疫突触的聚集

SUMO化修饰具有广泛的功能,包括调控神经突触的形成和传递。神经突触和免疫突触共享某些特性,而蛋白激酶Cθ(protein kinase Cθ,PKCθ)是蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)家族中唯一能在抗原刺激后定位于免疫突触中央超分子活化簇的一员。为了探讨SUMO化修饰对免疫突触的影响,该文采用"Ubc9融合介导的SUMO化修饰系统(Ubc9 fusion-directed SUMOylation system,UFDS)"方法检测Ubc9-PKCθ与SUMO的相互作用;应用体外定点突变技术构建多个SUMO化修饰位点突变的Ubc9-PKCθ;通过荧光显微镜观察Raji B-Jurkat T细胞之间的接触面。结果显示,Ubc9-PKCθ能被SUMO化修饰,且抗原刺激后能在免疫突触聚集;而当多个SUMO化修饰位点突变后,Ubc9-PKCθ的SUMO化水平显著下调,抗原刺激后虽然还是被招募到免疫突触上,但呈现弥散状态。综上所述,Ubc9融合表达时SUMO化修饰影响PKCθ在免疫突触的聚集。     

UFDS系统检测蛋白质SUMO化修饰研究

为了验证UFDS系统（Ubc9 fusion-directed sumoylation, UFDS）是否能够检测蛋白质SUMO(small ubiquitin-related modifier)化修饰,构建了Ubc9和PKCθ的融合表达载体,与SUMO1表达载体共转染293T细胞,通过免疫共沉淀和Western印迹检测Ubc9-PKCθ与SUMO1的相互作用。 结果表明,Ubc9-PKCθ与SUMO1相互作用,且SENP1共表达时导致Ubc9-PKCθ去SUMO化修饰;相较于野生型Ubc9-PKCθ,SUMO化修饰位点突变型Ubc9-PKCθ与SUMO1的相互作用显著减弱;而相较于野生型PKCθ,SUMO化修饰位点突变型PKCθ与SUMO1的相互作用则完全检测不到。 研究结果说明,应用UFDS系统能检测蛋白质的SUMO化修饰,但在鉴定潜在的SUMO化修饰位点时有一定的缺陷。     

维生素B_1对丙二醛修饰小牛血清白蛋白的影响

不同来源的活性羰基化合物(主要是非酶糖基化和脂质过氧化中间产物)能和多种蛋白发生交联反应,导致其结构的改变及功能的丧失.利用小牛血清白蛋白/丙二醛(BSA/MDA)这一蛋白羰基应激模式,检测不同浓度的MDA对BSA吸光和荧光的影响.同时,通过向BSA/MDA反应体系加入不同浓度的维生素B1(VB1),检测VB1对蛋白羰基修饰的抑制作用.实验结果表明,蛋白的羰基修饰生成了老年色素类荧光物质(APFs),同时使蛋白的羰基含量增加;VB1在一定程度上抑制了蛋白羰基含量的增加.     

气候变化背景下黄淮冬麦区冬季长寒型冻害时空变化特征

冻害是影响我国北方冬小麦生产主要的农业气象灾害之一,明确气候变化背景下冻害发生规律和演变特征,对防御冻害具有重要的意义。以黄淮冬麦区为研究区域,利用1960—2010年47个气象台站逐日气温资料,在分析越冬期负积温和越冬期长度变化特征基础上,以越冬期负积温为指标分析了黄淮冬麦区冬季长寒型冻害发生频率及站次比演变特征,并利用冻害实际灾情资料对研究结果进行验证。研究结果表明:(1)黄淮冬麦区越冬期负积温绝对值在过去50a平均为17.3—240.8℃·d,空间上呈南少北多的纬向分布特征,且近50a呈减少趋势,全区负积温绝对值每10年减少1.8—38.3℃·d,这种变化趋势表现为南低北高的空间分布特征;(2)研究时段内全区越冬期长度呈波动性缩短趋势,尤其是研究区域北部地区,南部地区越冬期长度年际间变化不显著,且个别站点有些年份没有稳定越冬期,多集中在1985年以后;(3)黄淮冬麦区较轻冻害发生频率较高,为40%以上,空间上由北向南逐渐增大,站次比年代际呈增加趋势;中度冻害和较重冻害发生频率较低,多数站点在10%以下,空间上由北向南逐渐减小,站次比呈减少趋势;全区无严重冻害和极严重冻害风险。气候变化背景下,黄淮冬麦区冬季长寒型冻害风险较小,各站点冻害程度随年代变化逐渐减轻,较轻冻害的站点逐渐增多。     

Toll样受体激动剂对小鼠脾脏细胞中SARM蛋白表达的影响

目的探讨多种Toll样受体(toll-like receptor, TLR)激动剂分别刺激小鼠脾脏细胞后对SARM蛋白(sterile-α and armadillo motif-containing protein)表达的影响。方法无菌条件下收集小鼠脾脏并制成单细胞悬液,分别加入TLR1/2激动剂Pam3Cys、TLR2/6激动剂LTA、TLR3激动剂poly(I∶C)、TLR4激动剂LPS或TLR9激动剂CpG,终质量浓度均为20μg/mL,刺激时间分别为2、4、8、20和24 h,然后利用蛋白质印迹法(Western blot)检测SARM的表达。结果小鼠脾脏细胞中SARM的表达,Pam3Cys刺激后4~20 h持续上调,24 h后回落接近初始水平;LTA刺激后8~24 h持续下调;poly(I∶C)刺激后4~20 h持续上调,24 h后回落接近初始水平;LPS刺激后20~24 h持续上调;CpG刺激后24 h开始下调。结论小鼠脾脏细胞中SARM可能参与对TLR信号传导通路的调控。     

医疗美容医疗纠纷成因分析及对策探讨

医疗美容科是外科手术较为频繁、患者对手术期望极高的科室。患者所要求的不仅仅是安全,而且对术后效果更为重视,整形美容科术后效果不佳是整形美容科医疗纠纷高发的重要原因之一。通过对整形美容医疗纠纷成因进行分析,消除医疗事故隐患,规避医疗风险。