羊水直接PCR法快速诊断脊肌萎缩症的实验研究

目的：建立一种快速、简便的产前诊断脊肌萎缩症的检测方法。方法：基于运动神经元生存基因SMNc和SMNt的两个同源拷贝碱基的差异,对SMNt基因第7、8外显子进行缺失分析,抽取孕妇羊水后用作者自行研制的“HpH—Buffer”,以离心后羊水沉淀中的胎儿细胞为模板直接进行PCR扩增,扩增产物进行酶切限制性片断长度多态性分析,对2例有脊肌萎缩症患儿生育史的孕妇怀有的胎儿进行产前基因诊断。同时,为考察羊水直接扩增方法的效率,对羊水样本直接扩增和对羊水样本中提取的基因组DNA扩增进行了平行实验。结果：2例胎儿均有SMNt基因第7、8外显子缺失;以羊水为模板和以基因组DNA为模板进行扩增的效率相似。结论：应用“HpHBuffer”直接对羊水样本中SMN基因上外显子7、8进行扩增,结合限制性片断长度多态性分析SMNt上是否发生缺失,可缩短诊断时间,节约诊断成本,减少检测过程中可能出现的样本交叉污染,有望成为临床上产前诊断脊肌萎缩症的新方法。     

高灵敏可视化核酸试纸条法快速检测 HBV DNA

目的:本研究旨在建立一种基于试纸条的快速、灵敏及可视化检测乙型肝炎病毒核酸的方法.方法:利用聚合酶链反应扩增乙肝病毒的保守区,其中上、下游引物的5'端分别修饰异硫氰酸荧光素和生物素.核酸试纸条上的胶体金以及检测线处分别标记有链霉亲和素以及抗荧光素抗体.将扩增产物与展开液混合后点样,10min 后即可用肉眼判读结果.在优化了展开液成分、上样体积以及上样浓度之后,对该方法的灵敏度进行了评价.最后收集15例阴性样本及33例HBsAg 阳性样本,按血清标志物结果进行分类后使用核酸试纸条进行检测,并与实时荧光PCR的结果进行了比较.结果:试纸条检测乙肝病毒核酸的灵敏度为250eopies/mL.在临床样本的测定中,该方法与实时荧光定量PCR的特异性均为100%.且两种方法检测不同血清标志物类型的阳性检出率无差异.结论:核酸试纸条技术能够用于乙肝病毒核酸的可视化检测,与实时荧光PCR相比检测速度快,具有较好的灵敏度和特异性,适合流行病学调查以及在基层医院体检使用.     

岩溶型铝土矿尾矿堆不同自然演替阶段苔藓植物多样性特征

按空间代替时间序列的方法,对贵州省修文县小山坝岩溶型铝土矿区尾矿堆5个不同自然演替阶段苔藓植物多样性进行了研究。结果显示：（1）苔藓植物共有11科18属31种,其中藓类9科16属29种,苔类2科2属2种。在演替过程中,苔藓植物生活型单一,仅矮丛集型（占67.7%）和交织型（占32.3%）,矮丛集型占优势地位。苔藓植物物种组成简单,纯群落较多,混合群落随演替阶段逐渐增多。（2）不同自然演替阶段苔藓植物群落Shannon-Wiener指数、Pielou均匀度指数和丰富度指数有所不同,裸岩阶段最低（0.196、0.283和-1.930）,草灌丛阶段最高（3.470、1.281和2.342）,乔灌木阶段逐渐下降（2.128、0.887和1.267）。苔藓植物种的替代速率与相似性变化趋势相反。小山坝岩溶型铝土矿区尾矿堆苔藓植物多样性在5个不同自然演替阶段呈先上升后下降的变化规律,多样性水平总体呈上升趋势,研究结果可为岩溶型铝土矿区生态恢复和生物多样性保护提供基础资料。     

黄河三角洲人工恢复芦苇湿地生态系统健康评价

研究目的是对黄河三角洲人工恢复芦苇湿地生态系统的健康状况进行评价。按照层次分析法的思想,从环境、植物群落和植物生理生化特征等3个方面构建评价指标体系。在专家意见的基础上,确定各个指标的权重,计算生态系统健康指数。通过与自然芦苇湿地对比,对人工恢复芦苇湿地的健康状况进行评价。结果显示:人工恢复芦苇湿地的土壤有机质、全氮和全盐含量、群落盖度、密度和地上生物量等指标显著低于自然芦苇湿地,地表水电导率、叶片的APX、DHAR、MDHAR等酶的活性显著高于自然芦苇湿地,其生态系统健康指数低于自然芦苇湿地。这说明在短时间内,人工恢复芦苇湿地的健康状况和自然芦苇湿地还存在一定差距。恢复时间对生态系统健康评价有重要影响,长时间尺度上监测数据的积累是全面、深入了解生态系统、评价生态系统健康状况所必需的。     

不同来源的脱氧核糖核酸酶在基因表达量分析中应用效果的比较研究

目的：比较在基因表达量分析中使用不同来源的脱氧核糖核酸酶（DNase）去除样本中残留DNA的应用效果差异,为研究者根据自己的实验需求选择合适的DNase提供依据。方法：选择国内外广泛使用的3种DNase,分别为Invitrogen DNase,T擞aRaDNase和TiandzDNase。按照各种DNase的说明书对Trizol法提取的胎盘总RNA中残留DNA进行降解,定量方法采用实时荧光PCR测定反转录后的cDNA量。比较各种DNase对不同浓度RNA样本中残留DNA的处理效率、RNA损失量、操作时间及成本等。结果：三种DNase酶均能够完全降解不同残留量的DNA（10ng、100ng及1恤g）,实时荧光定量PCR均未检测到残留DNA。InvitrogenDNase对DNA的处理过程耗时最短,操作过程造成各种浓度RNA模板的损失量均最低,但成本最高;TaKaRaDNase处理的耗时居中,成本居中,RNA损失量最高,尤其对低浓度（〈100ng／μL）RNA样本;TiandzDNase处理的耗时最长,成本最低,RNA损失量居中,当模板浓度较高（〉500ng/μL）时,损失量相对减少。结论：不同来源的DNase在基因表达量分析中对样本处理的应用效果各不相同,在不同样本分析中可参考以下原则正确使用合适的DNase,以保证分析的顺利和结果的准确：对于RNA提取量较多的样本,三种DNase均可选择,但如考虑成本,首选TiandzDNase,如考虑耗时或RNA损失量,首选InvitrogenDNase,如既考虑耗时又考虑成本,可选TaKaRaDNase;对RNA提取量较少的血液或少量细胞（如单细胞）样本,应选择Invitrog—enDNase。     

高灵敏可视化核酸试纸条法快速检测HBV DNA

目的：本研究旨在建立一种基于试纸条的快速、灵敏及可视化检测乙型肝炎病毒核酸的方法。方法：利用聚合酶链反应扩增乙肝病毒的保守区,其中上、下游引物的5＇端分别修饰异硫氰酸荧光素和生物素。核酸试纸条上的胶体金以及检测线处分别标记有链霉亲和素以及抗荧光素抗体。将扩增产物与展开液混合后点样,10 min后即可用肉眼判读结果。在优化了展开液成分、上样体积以及上样浓度之后,对该方法的灵敏度进行了评价。最后收集15例阴性样本及33例HBsAg阳性样本,按血清标志物结果进行分类后使用核酸试纸条进行检测,并与实时荧光PCR的结果进行了比较。结果：试纸条检测乙肝病毒核酸的灵敏度为250copies/mL。在临床样本的测定中,该方法与实时荧光定量PCR的特异性均为100%。且两种方法检测不同血清标志物类型的阳性检出率无差异。结论：核酸试纸条技术能够用于乙肝病毒核酸的可视化检测,与实时荧光PCR相比检测速度快,具有较好的灵敏度和特异性,适合流行病学调查以及在基层医院体检使用。     

ESCRT系统： 一个多功能的蛋白转运及膜剪切机器

转运必需内体分选复合物（endosomal sorting complex required for transport, ESCRT）系统是真核细胞中完成内体（endosome）膜内陷以形成多囊泡体（multi-vesicular body, MVB）的分子机器.其主要功能是促进被泛素（ubiquitin）标记的膜蛋白的降解, 还与细胞分裂、病毒出芽、细胞自噬以及真菌pH感知相关. ESCRT系统包括ESCRT-0,-Ⅰ,-Ⅱ,-Ⅲ和Vps4-Vta1共5个蛋白 蛋白复合物.晶体学研究已经解析了大部分复合物的结构. 其促使膜内陷的分子机理一般认为分3步. 首先是ESCRT-Ⅰ和-Ⅱ在内体膜上结合并促使内体膜内陷形成初始芽体. 之后,ESCRT-Ⅲ在芽体颈部聚合并导致芽体的剪切,从而将内腔囊泡（intralumenal vesicles, ILVs）释放到内体腔内,形成MVB. 最后,Vps4/Vta1复合物则以水解ATP提供能量将聚合的ESCRT-Ⅲ解聚以循环使用,完成更多的出芽过程.本文将对ESCRT系统的结构、出芽机理和生物功能几方面做一个综述.     

中国大陆慢性皮肤黏膜念珠菌病回顾性分析(1980-2020年)CSCD

目的总结与探讨中国大陆慢性皮肤黏膜念珠菌病(chronic mucocutaneous candidiasis,CMC)的病因、流行病学、临床特征及诊疗情况。方法检索分析中国知网、万方、维普及PubMed等数据库中1980—2020年中国大陆确诊为慢性皮肤黏膜念珠菌病的相关文献资料。结果共纳入文献24篇,病例61例。患者平均发病年龄为3.38岁,本病以反复发作的皮肤(57.38%)、口腔黏膜(95.08%)、甲(63.93%)念珠菌感染为特点。信号转导和转录活化子1功能获得性突变(STAT1 gain-of-function,STAT1 GOF)为最常见病因,治疗以唑类药物最常用,复发率高。结论慢性皮肤黏膜念珠菌病是一种少见的免疫缺陷病,临床表现多样,可有多器官和系统的异常,早期诊断和治疗非常重要。     

大肠癌组织及癌旁组织中c—myc，COX-2和CD44v6基因表达量差异的检测

目的：通过检测大肠癌组织和癌旁组织中c-myc,COX-2以及CD44v6的表达水平,探讨这三种基因在大肠癌发生和发展中的意义。方法：应用实时荧光定量PCR技术检测了10例大肠癌组织和相应癌旁组织中c-myc,COX-2以及CD44v6基因表达水平的差异,并探讨了各基因在癌纽织中的表达水平与大肠癌临床病理指标之间的关系。结果：c-myc,COX-2以及CD44v6在大肠癌组织和癌旁组织中的表达均有非常显著性差异（P〈0．01）;癌组织中COX-2和CD44v6的表达与淋巴结转移、分化程度及Dukes分期有关（P〈0．05）。结论：c—myc,COX-2和CD44v6的异常表达均与大肠癌密切相关,三者从不同方面对大肠癌的发生和发展起到了重要作用,可作为早期诊断和预后的参考指标。     

腹部超声检查对新生儿坏死性小肠结肠炎的临床应用价值研究

目的:探究腹部超声检查对新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)的临床应用价值。方法:选取2009年1月-2016年12月我院收治116例患有NEC的新生儿作为本次研究的对象,依据修正Bell-NEC分级标准将之分为确诊组(n=50)和疑似组(n=66),再依据临床转归分为手术组(n=37)和内科治愈组(n=79),对比确诊组和疑似组的腹部超声与X线检查结果,以及内科治愈组和手术组的腹部超声与X线检查结果。结果:在确诊组和疑似组中,腹部超声对肠壁积气、门静脉积气的检出率均高于X线摄片(P0.05)。腹部超声还发现了肠道蠕动缓慢、肠道蠕动消失和腹腔积液;内科治愈组腹部超声对肠壁增厚、肠管扩张和腹腔积液的检出率低于手术组(P0.05);内科治愈组X线摄片对肠管扩张的检出率低于手术组(P0.05)。结论:腹部超声能够提高NEC的检出率,且对NEC的临床转归有较好的预测作用。