PRAS40(Ser183)磷酸化多克隆抗体的制备及检测

PRAS40为富含脯氨酸、分子量为40kD的Akt底物蛋白,能够与雷怕霉素哺乳动物细胞靶点复合物1(mTORC1)结合,其苏氨酸183位点(Ser183)可被mTORC1磷酸化。为了制备PRAS40(Ser183)磷酸化多克隆抗体,本实验通过蛋白疏水性抗原性分析设计多肽抗原,用其免疫家兔获得抗血清,ELISA检测其效价为1:10000;Western blotting法检测发现,通过rProtein A Sepharose亲和层析纯化并经非磷酸化的抗原条吸附处理后的抗体可以明显提高磷酸化抗体的特异性;用PRAS40抗体及PRAS40(Ser183)磷酸化抗体对正常细胞HL7702、HEK293及肿瘤细胞HepG2、A549、S180的检测显示:磷酸化的Ser183在不同细胞中表达差异不显著,而在经细胞饥饿处理的HEK293细胞中却明显观察到了S183磷酸化水平随氨基酸含量降低而减弱的现象。因此,本实验所制备的抗体可用于PRAS40(Ser183)磷酸化位点的功能研究。     

山东半岛南部产卵场温跃层对鳀鱼鱼卵垂直分布的作用

2000～2004年5～7月"北斗"号生物资源调查船对山东半岛南部产卵场进行多学科综合调查期间,于2003年6月17～18日和6月27～30日分别在35°01.9′N、120°32.9′E海区和35°03.3′N、120°26.4′E海区进行了25 h和64 h的水团追踪观测调查,鳀鱼鱼卵的数量、垂直分布与水温的分布为重点调查内容.调查结果表明:水温垂直分布的变化、海水混合的强弱、水体的辐聚/辐散等物理过程对水体中鳀鱼鱼卵数量和鳀鱼鱼卵在不同水层的分布有很大影响.温跃层分布深度的波动引起水体的垂直交换(混合)、水平对流(辐聚/辐散)和跨跃层的物质交换.温跃层深度变浅时,上混合层水体的厚度变薄,跨跃层的向上混合,将下混合层水体中和温跃层中的鳀鱼鱼卵输运到温跃层和上混合层中,同时表层水体发生辐散现象,使得下混合层、温跃层和上混合层水体中鳀鱼鱼卵数量减少、密度减小,导致整个水柱内鳀鱼鱼卵的数量减少;温跃层深度加深时,上混合层水体的厚度增加,跨跃层的向下混合,将上混合层水体中和温跃层中的鳀鱼鱼卵输运到温跃层和下混合层水体中,同时表层水体发生辐聚现象,使得上混合层、温跃层和下混合层水体中的鳀鱼鱼卵数量增多、密度增大,导致整个水柱内鳀鱼鱼卵的数量增多;温跃层水体中鱼卵数量和密度的变化较上混合层和下混合层水体更为显著.水体中温跃层的存在、温跃层分布深度的波动及其波动的程度对上混合层和温跃层中鳀鱼鱼卵的数量和密度的变化起着主导作用,导致鳀鱼鱼卵数量垂直分布的剧烈变化.     

山东半岛南部产卵场鳀鱼的产卵生态Ⅱ.鳀鱼的产卵习性和胚胎发育特性

2000-2004年5-7月在山东半岛南部鲤鱼产卵场调查结果表明：鲲鱼受精卵的胚胎发育全程，在表层水体中，水温条件为21．78％-22．68qc（平均22．05℃）和17．05℃-18．88℃（平均17．900C），大约需要42-44h和50-52h；在上混合层水体中，水温条件为21．26℃-22．050C（平均21．70℃）和17．02℃-17．90℃（平均17．50℃），大约需要44-46h和50-54h；在温跃层水体中，水温条件为16．22℃-21．26℃（平均18．70℃）和14．42℃-17．02℃（平均15．72％），大约需要46-48h和68-72h。对鲲鱼胚胎发育时间的观测值与计算值进行单因子方差分析，结果表明两者之间差异不显著（P〉0．05），说明本研究所用的现场观测和估算方法是值得信赖的。2003年6月下旬产卵场中的水温分布较2002年6月下旬低1．80℃-3．80℃，鲤鱼受精卵的胚胎发育时间要长8-24h。鲲鱼胚胎发育的阈温度和有效积温值分别为10．26℃和423．1h·℃。在产卵季节，产卵场中傍晚7：00就有少量的鲲鱼开始产卵，直到凌晨5：00仍然有少量的鳃鱼还在产卵，产卯时间持续10h；上半夜9：00至凌晨2：00为鲤鱼的产卵高峰时间，鲤鱼主要在温跃层内产卵[动物学报54（6）：988-997，2008]。     

山东半岛南部产卵场鳀鱼的产卵生态Ⅰ.鳀鱼鱼卵和仔稚幼鱼的数量与分布特征

2000-2004年5-7月,"北斗"号生物资源调查船对山东半岛南部产卵场进行了11个航次多学科的综合调查,鳀鱼鱼卵和仔稚幼鱼的数量与分布及其与环境因氐墓系为重点调查内容.调查结果表明:1)山东半岛南部产卵场5月中、下旬鳀鱼才进入产卵初期;6月上旬产卵个体逐渐增多,即将进入产卵盛期;6月中、下旬进入产卵盛期; 2)山东半岛南部产卵场中,35°N断面及其邻近海区的鳀鱼鱼卵密集分布区相当稳定,这一带海域基本上每年都有鱼卵的密集分布中心形成;北部海域的密集分布区的分布范围和分布位置变化比较大,但是,密集分布区一旦形成,鱼卵的平均密度相当可观;西南部沿岸一带海域的鱼卵数量很少.鳀鱼鱼卵的分布与海流、潮汐以及水温分布等物理海洋学要素的关系密切,南、北两个鱼卵密集分布区正是潮锋所在的位置,锋区的辐聚和卷夹作用,使鳀鱼鱼卵聚集成密集的斑块,从而形成了鱼卵的密集分布中心; 3)鳀鱼鱼卵在水体中的空间分布主要集中在上混合层,温跃层中的数量次之,下混合层的数量最少;统计学检验, 上混合层、温跃层和下混合层之间的鱼卵数量差异显著; 4)鳀鱼仔稚幼鱼的数量明显少于鱼卵,水平分布特征与鱼卵也有明显的差异.