采用柱层析法提纯狂犬病毒的研究

采用柱层析法提纯狂犬病毒的研究顾鸣,邵益斌,顾勤,曾蓉芳（卫生部上海生物制品研究所,上海２０００５１）关键词狂犬病毒,柱层析法迄今,分离提纯包膜病毒的方法多采用密度梯度离心法、亲和层析法和等电聚焦法等,这些方法有一定的优点,但用在处理量很大的病毒疫苗...     

迟缓爱德华氏菌EcoRⅠ核糖体自动化分型与聚类分析

【目的】对26株迟缓爱德华氏菌进行自动化核糖体分型,并进行聚类分析。【方法】采用RiboprinterTM全自动微生物鉴定系统对分离自斑点叉尾鮰、日本鳗、多宝鱼、比目鱼、斑醴等宿主体内的迟缓爱德华氏菌进行核糖体分型,以限制性内切酶Eco RⅠ处理、切割菌株DNA;运用Bio Numerics软件分析图像数据。【结果】迟缓爱德华氏菌核糖体图谱与数据库中已有信息进行比对,ATCC15947和BYK00685的比对相似值0.85,分别为0.95及0.90。条形码经软件分析共产生21种核糖体条带,聚类分析分为3个群。条带之间呈现明显的地域性差异和宿主差别。来自北方及南方的菌株除少数几株以外,各自聚集为一个群;所有人源株则分布在第三群。【结论】自动化核糖体分型可以方便快捷地用于不同物种的菌株分型与流行病学追踪溯源。     

玻璃结合蛋白

玻璃结合蛋白有独特的蛋白质分子结构的生物学性能,具有多种功能作用,参与机体免疫,凝血,纤溶和组织细胞损伤修复等功能活动;尤其是近来对这一古老蛋白质又有新的认识。本就近来对该蛋白质的性质,分子结构和作用机制做一综述。     

空肠弯曲菌活而不可培养状态的产毒素能力及毒素基因表达的检测

目的 通过诱导空肠弯曲菌进入活的不可培养(VBNC)状态建立细胞学模型,用VeroE6细胞和HeLa细胞检测空肠弯曲菌产细胞膨胀性肠毒素(cytotoxic distendingtoxin,CDT)能力的改变,并在RNA水平上进一步验证毒素的表达。方法 采用4℃冷藏及-70℃冷冻的方法诱导空肠弯曲菌进入VBNC状态,利用细胞总数计算、活细胞染色计数及可培养细胞计数间接确证VBNC状态细菌的存在,细胞对于VBNC状态下的细菌仍然敏感,并用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)证实空肠弯曲菌毒素基因的表达。结果 3种不同状态的细胞计数结果表明存活细胞进入了VBNC状态,细菌经4℃冷藏及-70℃冷冻后数量减少约1个数量级,在冷冻前,细菌对细胞毒性较强,72h时70%以上细胞凋亡,冷冻后的VBNC状态细菌对VeroE6和HeLa细胞的生长仍有影响,72h时约有40%细胞进入凋亡状态。结论 低温、贫养条件下空肠弯曲菌可进入VBNC状态,用常规传统的羊血平板培养基仅能使不到10%的空肠弯曲菌复苏生长,从而可以检测,在VBNC状态时,空肠弯曲菌产毒素能力改变较大,远远低于正常状态,但仍具备产毒素的能力,也从RNA水平实验得到证实。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的研究Ⅱ．抗HBsAg单克隆抗体的实际应用

本文用抗HBs／a McAb腹水用亲和层析法有效地提纯了HBsAg,回收率较高,并进行了CIEP检测临床血清标本,沉淀线清晰,检测灵敏度高于抗HBsAg血清。将抗HBs／a和抗HBs／d二种McAb提纯后制备诊断血球,进行RPHA检测临床血清标本千余例,并经美国Abbott实验室RIA试剂盒验证,表明其阳性检出率与中和试验符合率较国内目前以PcAb制备的诊断血球为优,显示了良好的特异性、灵敏度和准确性。抗HBsAgMcAb可作为新一代的HBsAg检测试剂。